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DCAS9PROT

Sigma-Aldrich

dCas9-3XFLAG-生物素蛋白

from Streptococcus pyogenes with D10A and H840A mutations, recombinant, expressed in E. coli, 1X NLS

Synonym(s):
Cas9 D10A H840A, dCas9,催化失活的Cas9, 失活Cas 9
NACRES:
NA.51

重组

expressed in E. coli

质量水平

200

测定

≥90% (SDS-PAGE)

形式

lyophilized powder

包装

pkg of 1 kit (3 components)

运输

ambient

储存温度

−20°C

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一般描述

来自化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes )的重组dCas9-3X FLAG-生物素蛋白(~165KD)是用于基因组工程和基因组DNA检测、分离和成像实验的即用型试剂。当与靶点特异性向导RNA结合时,死亡的酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes )Cas9蛋白作为DNA靶标蛋白,适用于转染细胞培养物、显微注射、DNA下拉、染色质富集、微生物鉴定和原位DNA成像。在C末端,使用SV40大T抗原核定位信号(NLS)标记蛋白质以用于入核转运,使用3XFLAG表位和生物素标记蛋白质以用于基于FLAG抗体®或链霉抗生物素的实验。

应用

功能基因组学/靶标验证/基因组编辑/分子生物学/合成生物学/DNA检测/分离/DNA成像

特点和优势

  • 高特异性
  • 适用于基因组DNA检测/分离
  • 可立即用于注射/转染

包装

  • 50 μg包装(≥ 300 pmol)
  • 250 μg包装(≥ 1500pmol)

组分

每个试剂盒包含:
  • 一瓶dCas9重组蛋白
  • 一瓶1×稀释缓冲液,1 mL
  • 一瓶无核酸酶的水和甘油,1 mL

原理

CRISPR/Cas体系被细菌和古细菌用作抵抗入侵病毒和质粒的防御屏障。最近,来自化脓性链球菌( Streptococcus pyogenes )的II型CRISPR/Cas系统经过设计可用于真核系统,它采用两种分子组分:单个Cas9蛋白和一个非编码向导RNA(gRNA)。两个蛋白质结构域RuvCHnH(分别为D10A和H840A)负责核酸酶活性,它们发生突变会导致Cas9内切核酸酶失活(dCas9)。随后,可以用gRNA对蛋白质进行编程,并指导其与所需的DNA序列结合。

重悬

dCas9蛋白冻干粉应使用提供的复原(Reconstitution)溶液重悬,获得所需浓度。轻轻敲打试管以完全溶解冻干的粉末,在冰上孵育10分钟,然后离心试管以使内容物离心至试管底部。

法律信息

FLAG is a registered trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC
MISSION is a registered trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

储存分类代码

10 - Combustible liquids

WGK

WGK 3

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