Merck
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ECAS9GFPPR

Sigma-Aldrich

eSpCas9-GFP蛋白质

from Streptococcus pyogenes with mutations conferring enhanced specificity, fused with enhanced GFP, recombinant, expressed in E. coli, 3X NLS

Synonym(s):
eSpCas9-EGFP, eSpCas9-GFP

重组

expressed in E. coli

测定

≥90% (SDS-PAGE)

形式

lyophilized powder

包装

pkg of 1 kit (3 components)

报告基因

GFP

运输

wet ice

储存温度

−20°C

一般描述

来源于化脓性链球菌的重组增强特异性Cas9-GFP蛋白(~192KD)是一种用于基因组工程实验的即用型试剂。当与靶标特异性的向导RNA结合时,eSpCas9-GFP蛋白可作为靶向核酸酶,用于细胞培养物的转染和通过单细胞胚胎注射加速遗传修饰动物的发育。

N端融合的增强型绿色荧光蛋白具有488 nm的激发峰和509 nm的发射峰,除了可用于流式细胞术应用之外,还可以用于观察转染的RNP复合物。  该蛋白质还包含三个不同的核定位序列,这些序列的位置可以实现最佳的活性。

应用

  • 功能基因组学
  • 靶标验证
  • 基因组编辑
  • 荧光显微镜
  • 流式细胞术

特点和优势

  • 与野生型Cas9相比具有增强的特异性
  • 高活性
  • 可立即用于注射/转染

包装

50 μg(≥260 pmol)装
250 μg(≥1300 pmol)装

组分

每个试剂盒包含:
  • 一瓶冻干的eSpCas9-GFP重组蛋白
  • 一瓶1x稀释缓冲液,1 mL
  • 一瓶含有甘油的1 mL无核酸酶水

原理

CRISPR/Cas被细菌和古细菌用作防御入侵病毒和质粒的防御系统。最近,来源于化脓性链球菌的II型CRISPR/Cas系统已被设计为在真核系统中起作用,其使用两种分子组分:单一Cas9蛋白和非编码向导RNA(gRNA)。可以通过单个gRNA对Cas9内切核酸酶进行编程,从而将DNA双链断裂(DSB)导向所需的基因组位置。与由锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB类似,细胞随后激活内源DNA修复过程[非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)],以愈合目标DSB。

新型工程化的eSpCas9(1.1)可对已经建立的CRISPR系统进行有效的靶向基因编辑,并具有更低脱靶效应的优势。如Slaymaker等人所述,SpCas9染色体结合基序中的点突变(K848A/K1003A/R1060A)可提供更高的靶上保真度,而不会降低切割效率。

重悬

冻干增强特异性化脓性链球菌eSpCas9-GFP蛋白应重悬于所提供的复溶溶液,获得所需浓度。轻轻敲打试管以完全溶解冻干的粉末,在冰上孵育10分钟,然后离心试管以使内容物离心至试管底部。

法律信息

MISSION is a registered trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

储存分类代码

11 - Combustible Solids

WGK

WGK 3

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