Merck

T9935

Sigma-Aldrich

胰蛋白酶 来源于牛胰腺

essentially salt-free, lyophilized powder, ≥9,000 BAEE units/mg protein, BioReagent, suitable for cell culture

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别名:
Serine Protease 1
CAS号:
EC 号:
MDL编号:
NACRES:
NA.54

产品线

BioReagent

质量水平

形式

essentially salt-free, lyophilized powder

比活

≥9,000 BAEE units/mg protein

分子量

23.8 kDa

组成

protein, ≥80%

技术

cell culture | mammalian: suitable

溶解性

hydrochloric acid: soluble 1 mM

储存温度

−20°C

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应用

对于胰蛋白酶消化肽,胰蛋白酶:肽 使用约为 1:100 至 1:20 的比例。从培养表面除去粘附细胞是本产品的一个典型应用。 从其底物中去除细胞所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物的年龄。 胰蛋白酶也被用于细胞培养期间细胞的再悬浮、蛋白质组学研究中的蛋白质消化和各种凝胶内消化。 其他应用包括:通过基于膜的技术评估结晶,用在确定动力学陷阱的存在会限制蛋白质的折叠速率和产量的一项研究中。
来自牛胰腺的胰蛋白酶已被用于人髓核(NP)胞分离过程中NP细胞的酶消化。它还被用作纯化细胞的免疫抗体包被筛选试剂(immunopanning reagent)。

生化/生理作用

胰蛋白酶切割赖氨酸和精氨酸残基的 C 端肽。 如果酸性残基位于切割位点的任一侧,则该反应的水解速度减慢,并且如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧,则停止水解。 胰蛋白酶活性的最适 pH 为 7-9。 胰蛋白酶还可以起到裂解氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键的作用。 将 EDTA 作为螯合剂添加到胰蛋白酶溶液中,用于中和钙离子和镁离子,这些离子遮蔽胰蛋白酶作用的肽键。 去除这些离子会增加酶活性。

丝氨酸蛋白酶抑制剂,包括 DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF 和抑肽酶等,将抑制胰蛋白酶。

组分

胰蛋白酶由 223 个氨基酸残基组成的单链多肽组成,通过去除胰蛋白酶原的 N-末端六肽而产生,其在 Lys-lle 肽键处裂解。氨基酸序列由 6 个二硫键交联。这是胰蛋白酶的天然形式—β-胰蛋白酶。β-胰蛋白酶可被自溶,在赖氨酸残基处裂解,生成 α-胰蛋白酶。胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的一员。

注意

1 mM HCl 溶液可在-20°C 条件下稳定储存 1 年(等分试样)。Ca2+ 的存在也将减少胰蛋白酶的自溶,并维持其在溶液中的稳定性。胰蛋白酶在 2.0 M 尿素、2.0 M 盐酸胍或 0.1% (w/v) SDS 中也保留大部分活性。

单位定义

使用 BAEE 作为底物,一个 BAEE 单元,将在 pH 7.6,25℃ 下,每分钟产生 0.001 的 A253

制备说明

本产品来源于新西兰的 pancreas。可溶于 1 mM HCl (1 mg/mL)。
对于涉及 EDTA 的应用,应使用不含 ca2 + 或 mg2 + 的缓冲盐溶液溶解胰蛋白酶。

象形图

Exclamation markHealth hazard

警示用语:

Danger

危险分类

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3

靶器官

Respiratory system

储存分类代码

11 - Combustible Solids

WGK

WGK 1

个人防护装备

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves


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实验方案

Continuous spectrophotometric rate determination method using BAEE substrate measures trypsin activity, essential for enzyme characterization.

本方案适用于使用Nα-苯甲酰基-L-精氨酸乙酯(BAEE)作为底物测定胰蛋白酶活性。本方案是基于连续分光光度速率测定(A253,光程= 1cm)方案:

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