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SUPELCOSIL™和ASCENTIS®色谱柱上氨基酸的衍生化、水解及HPLC分析

简介

在许多情况下,需要通过严格的蛋白定量来研究蛋白化学应用。分析氨基酸能够精确定量蛋白,通过相对氨基酸组成和游离氨基酸获取详细信息。相对氨基酸组成可以提供蛋白特征信息,通常用于有效的蛋白鉴定,亦常用作挑选蛋白片段化水解酶的决定因素。

相关过程包括以下步骤:

  • 水解
  • 分离
  • 检测方法
  • 定量

水解

水解通常在酸性条件下实现。标准过程是利用6M盐酸进行水解(24小时,110 °C)。标准过程综合考虑时间和温度两个因素。敏感氨基酸(特别是色氨酸和半胱氨酸)将被部分破坏。气相水解以及添加其他酸(如丙酸,TFA,甲磺酸)可缩短水解时间,提高敏感氨基酸的产量。

分离、检测和定量

为获取高灵敏度检测结果,水解样品(氨基酸)需经衍生及HPLC分离。经典方法是柱后衍生;柱前衍生方法重要性日益提升,可通过更广泛的衍生试剂来实现。内标和外标的使用尤为关键。

色谱柱选择对于实验设计至关重要。Supelco品牌下的SUPELCOSIL™及ASCENTIS®色谱柱是满足您氨基酸分析需求的良好选择。

材料
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