利用X-tremeGENE™ 转染试剂转染常见细胞系的实验方案

X-tremeGENE™转染试剂能够可靠地转染多种核酸和CRISPR / Cas9组分,参与这一分子和细胞研究关键步骤。浏览以下最常见的细胞系列表,获取有关使用X-tremeGENE™产品线的详细说明。正在寻求最大限度提高灵活性的方法?新型X-tremeGENE™360转染试剂是一种通用聚合物,非常适合转染常见和难转染细胞系。

转染 CHO-K1 细胞

1.5 X 104个细胞/孔的密度铺板CHO-K1 细胞。转染前 18-24 小时(65-75% 汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入6μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入5μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 CHO-K1 细胞。

转染 COS-7 细胞

8.0 X 103个细胞/孔的密度铺板COS-7细胞。转染前 18-24 小时(75 – 85% 汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

允许 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEMR® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入6μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入5μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 COS-7 细胞。

转染 HeLa 细胞

1.5 X 104个细胞/孔的密度铺板HeLa细胞。转染前 18-24 小时(70 – 90%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

允许 X-tremeGENE 9 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入6μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入5μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 HeLa 细胞。

转染 NIH-3T3 细胞

1.5 X 104个细胞/孔的密度铺板NIH-3T3细胞。转染前 18-24 小时(70 – 80%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入6μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入5μl 转染复合物。
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染NIH-3T3细胞。

转染 HEK-293 细胞

3.0 – 3.5 X 104个细胞/孔的密度铺板HEK-293细胞。转染前 18-24 小时(50 – 70%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的DNA中加入6 μLX-tremeGENE™ HP DNA转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入10μl 转染复合物。
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 HEK-293 细胞。

转染 PC-3 细胞

1.0 – 1.2 X 104个细胞/孔的密度铺板PC-3细胞。转染前 18-24 小时(75 – 85%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。

向稀释的 DNA 中加入2 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 1:1 )。轻轻吹打混匀。

+15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。

  • 逐滴向细胞中加入10μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 PC-3 细胞。

转染 HCT 116 细胞

3.0 – 4.0 X 105个细胞/孔的密度铺板HCT 116细胞。转染前 18-24 小时 (80%汇合度),在1 mL 完全生长培养基/孔的12孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 100 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入1 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入2 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 2:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

转染 A549 细胞

2.8 X 104个细胞/孔的密度铺板A549细胞。转染前 18-24 小时(70%汇合度),在150μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

500 μL 稀释液置于无菌试管中。
加入5 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。

  • 向稀释的 DNA 中加入10 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 2:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入15μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

转染 MCF-7 细胞

1.2 – 1.8 X 104个细胞/孔的密度铺板MCF-7细胞。转染前 18-24 小时(70 – 90%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入6μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入10μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 MCF-7 细胞。

转染 HuH-7 细胞

1.0 X 105个细胞/孔的密度铺板HuH-7细胞。转染前 18-24 小时,在2.5 mL完全生长培养基/孔的 6 孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 100 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入1.5 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入1.5 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 1:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 在向细胞中加入复合物前一小时,用 1.5 mL Opti-MEM I低血清培养基刷新培养基。
  • 逐滴向细胞中加入100μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 次日用完全培养基刷洗培养基。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

转染U-2 OS 细胞

2.5 – 3.0 X 104个细胞/孔的密度铺板 U-2 OS细胞。转染前 18-24 小时(70 – 90%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入4 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 2:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入10μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染U-2 OS细胞。

转染 HepG2 细胞

2.0 – 2.5 X 104个细胞/孔的密度铺板HepG2细胞。转染前 18-24 小时(60 – 70%汇合度),在100μl 完全生长培养基/孔的 96 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 500 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入30 μL X-tremeGENE™ 9 DNA转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入10 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入5μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂,成功地用 pcDNA3.1-GFP 质粒转染 HepG2 细胞。

转染 Neuro-2a 细胞

客户提供的实验方案。
1.0 X 105个细胞/孔的密度铺板Neuro-2a细胞。转染前24 小时(30 – 40%汇合度),在500μl 完全生长培养基/孔的 24 孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 100 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 向稀释液中加入8μlx-tremeGENE 9DNA 转染试剂。轻轻吹打混匀。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(试剂与 DNA 的比例为 4:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入100μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

注意:“客户提供的方案”中包含的数据和实验条件由提交它们的客户独自负责。罗氏既没有参与建立实验条件,也没有参与制定具体分析性能的标准。因此,罗氏不对作者或其他使用类似实验方法表述的用户所描述的生物目标参数所获得的结果的性能或解读承担任何责任。

实验结果:用 X-tremeGENE 9DNA 转染试剂成功地用 CMV6-GFP 质粒转染 Neuro-2a 细胞。

转染原代 MEF 细胞

0.5 – 1.0 X 105个细胞/孔的密度铺板原代 MEF细胞。转染前 18-24 小时 (60%汇合度),在1 mL 完全生长培养基/孔的12孔板中铺板细胞。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 100 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入1 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入4 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 4:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入转染复合物。
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

转染来自Pre-Skin的人原代成纤维细胞

1.0 X 105个细胞/孔的密度铺板人原代成纤维细胞。转染前 18-24 小时,在2 mL完全生长培养基/孔的 6 孔板中铺板细胞(40 – 50%汇合度)。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入6 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入200μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂,成功地用 GFP编码质粒转染人原代成纤维细胞。

鼠间充质干细胞 EK8

3.0 X 104个细胞/孔的密度铺板EK8细胞。转染前 18-24 小时(50%汇合度),在100 mL 完全生长培养基/孔的96孔板中铺板细胞 (3 X 105细胞/mL)。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 392 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入8 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入8 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 1:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入10μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

转染人间充质干细胞

8.0 X 104个细胞/孔的密度铺板hMSC。转染前 18-24 小时(50%汇合度),在2 mL 完全生长培养基/孔的6孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 还原血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 200 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入6 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入200μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:利用 X-tremeGENE HP DNA 转染试剂,成功地用 GFP 编码质粒转染人间充质干细胞。

转染用于慢病毒生产的 HEK-293T 细胞

5.0 X 105个细胞/孔的密度铺板HEK-293T细胞。转染前 18-24 小时,在2 mL完全生长培养基/孔的 6 孔板中铺板细胞(60 – 80%汇合度)。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 180 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入2 μg 质粒 DNA。(20μl 质粒 DNA 混合物,摩尔比为 1: 2: 2= 文库质粒:包装质粒:包膜质粒)。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入6 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 3:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入200μl 转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

实验结果:应用 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂,成功地用 pGIPZ-eGFP 质粒转染 HEK-293T 细胞。

转染 SF9 昆虫细胞

0.5 X 106个细胞/孔的密度铺板SF9细胞。临转染前,在1 mL完全生长培养基/孔的 12 孔板中铺板细胞 。细胞培养过夜。

等待 X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂、DNA 和稀释液(Opti-MEM® I 低血清培养基或无血清培养基)加温至 +15°C 至 +25°C,并轻轻涡旋。

  • 100 μL 稀释液置于无菌试管中。
  • 加入1 μg 质粒 DNA。轻轻吹打混匀。
  • 向稀释的 DNA 中加入8 μL X-tremeGENE™ HP DNA 转染试剂。(试剂与 DNA 的比例为 8:1 )。轻轻吹打混匀。
  • +15°C 至 +25°C 孵育 15-30 min。
  • 逐滴向细胞中加入转染复合物
  • 轻轻摇动或旋转培养孔或培养瓶,确保整个培养板上分布均匀。
  • 在测量蛋白表达之前,将细胞孵育 24-72 小时。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断流程。

请注意,上述实验方案仅作建议,必须依据经验确定最佳条件。

  1. X-tremeGENE 9DNA 转染试剂保存在 +2~+8℃温度下,X-tremeGENE HP DNA 转染试剂保存于-15~-25℃温度下。
  2. 将盛有 X-tremeGENE DNA 转染试剂的小瓶置于 +15~+25°C温度下,涡旋 1 秒钟,然后取出所需量。
  3. 请勿将 X-tremeGENE DNA 转染试剂分装;将剩余的转染试剂储存在原始玻璃瓶中。
  4. 尽量减少未稀释的 X-tremeGENE DNA 转染试剂与塑料表面的接触。
  5. 取出所需量后,使用后立即紧扣小瓶盖。
  6. X-tremeGENE DNA 转染试剂的最小用量:用于转染的 DNA 复合物是 100μl。较低体积的复合物形成过程显著降低转染效率。
  7. 请勿将聚苯乙烯制成的试管或微孔板用于 X-tremeGENE DNA 转染试剂:DNA 复合物制备。当不能避免使用聚苯乙烯材料时,一定要将转染试剂直接移液到无血清培养基中,或加入低血清培养基(不含任何血清)。
  8. 请勿使用含硅吸头或吸管。
  9. 确定转染时细胞仍在活跃生长。
  10. 通过加入含下列内容的微孔,在进行转染时加入适当的对照品:
    (1) 未转染细胞
    (2) 只带转染试剂的细胞
    (3) 仅带 DNA 的细胞
  11. 转染试剂的最佳配比:DNA 和复合物的最佳总量可能随着细胞系、细胞密度、用于测定的细胞生长状态和基因表达的不同而变化。
材料
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