Nagy molekulájú HPLC
A biomolekulák az élő sejtek által termelt nagyméretű, polimer kémiai vegyületek, amelyek az élő szervezetek alapvető építőköveiként szolgálnak, és számos, az élethez nélkülözhetetlen biológiai folyamatot hajtanak végre. A főbb biomolekulatípusok közé tartoznak a fehérjék, peptidek, polinukleotidok, szénhidrátok, lipidek, vitaminok és koenzimek. A nagy molekulák és biomolekulák szerkezetének jellege, kémiai sokféleségük, a biológiai aktivitás figyelembevételének szükségessége és a komplex mátrixok hatékony jellemzési technikát igényelnek. Bár számos elválasztási és elemzési technika áll rendelkezésre, a nagy teljesítményű folyadékkromatográfiát (HPLC) használják a leggyakrabban. A biomolekulák sok funkciós csoportja és többféle konformációja miatt a HPLC biomolekula-analízis különböző módokon alapul, mint például fordított fázisú, méret-kiválasztás vagy ioncsere. Függetlenül az alkalmazott elválasztási módoktól, a hatékony oszloptöltés és a következetes állófázis részecskekémia kritikus fontosságú a biomolekulák pontos és megbízható elválasztásához.
Kapcsolódó termékek
Kiemelt kategóriák
Tekintse meg kiváló minőségű analitikai kémiai termékeinket a precíz és megbízható laboratóriumi vizsgálatokhoz. Találja meg a legújabb műszereket, reagenseket és fogyóeszközöket a kromatográfiához, spektroszkópiához és sok máshoz
Pontos elválasztásokat érhet el széles HPLC-oszlopgyűjteményünkkel. Növelje a visszatartást, a felbontást és a szelektivitást. Rendeljen még ma.
Optimalizálja a mintavételt: Precíziós mintavevő fecskendők - standard, kiváló minőségű. Válasszon az alkalmazás, a kompatibilitás és a preferenciák alapján.
Tekintse meg a transzfekciós reagensek, szelekciós eszközök és protokollok átfogó csomagját, amikor munkája megbízható sejttranszfekciós eredményeket követel meg.
Reversed-fázisú biomolekula HPLC
A reverzált fázisú HPLC (RP-HPLC) érzékeny és sokoldalú technika, amelyet fehérjék, fehérjefragmentumok és peptidek elválasztására és elemzésére használnak. Az RP-HPLC egy nem poláris állófázist és egy poláris mozgófázist használ. A fehérjék és peptidek visszatartása az állófázison az adszorpciós és a partíciós elveket követi. A hidrofób fehérje régiók reverzibilisen kötődnek az állófázishoz. A fehérjék eluálása a mozgófázis nem poláris jellegének növelésével történik. A felbontást befolyásolhatja a pórusméret, a részecskeméret, az oszlop hossza és az állófázishoz kapcsolódó szénhidrogénlánc.
Méretkizárásos kromatográfia (SEC)
A méretkizárásos kromatográfia (SEC) egy nem denaturáló kromatográfiás mód, amely a molekulákat méretük (azaz hidrodinamikai sugaruk) alapján választja szét. Ez a mód nem az analit és az állófázis közötti kölcsönhatásra, hanem az analit véletlenszerű áramlására támaszkodik az állófázis részecskéin keresztül. A nagy molekulatömegű analitok hamarabb eluálódnak, mivel teljesen vagy részben kizáródnak az állófázis részecske pórusaiból, míg az alacsonyabb molekulatömegű analitok később eluálódnak, mivel több időt töltenek a részecskén keresztülvezető, gyötrelmes útvonal bejárásával. A SEC-t monoklonális antitest (mAbs) aggregátumok és fragmentumok jellemzésére, ismeretlen fehérjemolekulatömegek becslésére és fehérjeformulák stabilitásának meghatározására használták.
Hidrofób kölcsönhatás kromatográfia (HIC)
A hidrofób kölcsönhatás kromatográfia (HIC) olyan kromatográfiás mód, amely az analiteket a hidrofób analit-részek és a hidrofób állófázis ligandumok közötti kölcsönhatás mértéke alapján választja el. Alacsonyabb molekulatömegük és kisebb hajlamuk miatt a HIC-t általában nem használják peptidek elválasztására. Magas sókoncentrációban a fehérjék hidratációs rétegei eléggé megszakadhatnak ahhoz, hogy a hidrofób felületi régiók kapcsolódási felületet képezzenek a nem poláros állófázissal. A só kiválasztását a Hofmeister-sorozat határozza meg, amely a kationokat és anionokat aszerint osztályozza, hogy képesek-e megbontani a fehérje hidratációs rétegét (kaotróp) vagy elősegíteni a fehérje hidratációs rétegének kialakulását (kozmotróp). A tipikus sók közé tartozik az ammónium-szulfát, a kálium-szulfát és a nátrium-szulfát. A hidrofób kölcsönhatáskromatográfiát jelenleg az antitest-hatóanyag konjugátumok (ADC) hatóanyag-antitest arányának (DAR) meghatározására használják.
Ioncserélő kromatográfia (IEX)
Az ioncserélő kromatográfia (IEX) egy olyan kromatográfiás mód, amely az analiteket töltésük alapján választja el. A fehérjék és peptidek amfoterek, azaz savas és bázikus funkcionalitást egyaránt mutatnak. A fehérjék savas funkcionalitásai közé tartozik az aszparaginsav, a glutaminsav, a cisztein, a tirozin és a C-terminális α-karboxilát. A bázikus fehérjefunkciók közé tartozik az arginin, a hisztidin, a lizin és az N-terminális α-amin. A bioterápiás töltésváltozatok az IEX segítségével kimutathatók és felbonthatók. A töltésváltozatok keletkezhetnek a messenger RNS (mRNS) transzkriptum hibás transzlációjából és/vagy poszt-transzlációs módosításokból, például deamidációból, oxidációból vagy glikozilációból.
Az IEX oszlopot az analit izoelektromos pontja (pI) alapján kell kiválasztani. Ha a mobilfázis pH-fázisa alacsonyabb, mint a pI, az analit pozitív töltésű lesz, és a kationcserélő oszlophoz kötődik.Ha a mozgófázis pH-ja a pI felett van, az analit negatív töltésű lesz, és anioncserélő oszlophoz kötődik.
Affinitás-kromatográfia
Affinitás-kromatográfia az analit és az állófázis ligandum közötti specifikus kölcsönhatásra épül. Ideális esetben csak a kívánt analit lép kapcsolatba az állófázissal, és az összes többi mintakomponenst átengedi az oszlopon. Ezután egy második mobil fázist vezetnek át az oszlopon az analit eluálásához.
A fehérje A kromatográfia a biofarmáciai iparban alkalmazott affinitáskromatográfia leggyakoribb formája. Az A fehérje egy 42 kDa felszíni fehérje, amely a S. aureus sejtfalában található.Ez a fehérje specifikusan kötődik az IgG-k Fc régiójának nehézláncához, így ideális mechanizmus az IgG-k más mintakomponensektől való elválasztására. A legtöbb Protein A oszlopot úgy állítják elő, hogy a fehérjét egy porózus, szerves részecskére immobilizálják. Azonban a Protein A kromatográfiához monolitikus formátumot is gyártottak, amely lehetővé teszi a nagy mintaátbocsátást különböző áramlási sebességek mellett, a hatékonyság feláldozása nélkül.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- A gyakori HPLC-problémák kijavítása az oszlop teljesítményének helyreállítása érdekében, a csúcsproblémák, a retenciós idő, a zaj és a kromatogramok felbontásának kezelése.
- Size-exclusion chromatography (SEC) columns and ready-to-use standards facilitate method development and increase robustness of protein SEC methods.
- A méretkizárásos kromatográfiás oszlopok a biomolekulák elválasztásának hatékonyságát 2 μm alatti részecskékkel növelik, javítva az analitikai teljesítményt.
- Supelco’s product offering for biopolymer separations includes columns and media categorized by separation mode, as well as by column brand.
- BIOshell™ IgG 1000 Å C4 columns are highly suited for the reversed phase separation of high molecular weight compounds such as monoclonal antibodies with molecular weight of 150 kDa.
- Mindent látni (79)
Kapcsolódó protokollok
- An optimized LC-MS/MS based workflow for low artifact tryptic digestion and peptide mapping of monoclonal antibody, adalimumab (Humira) using filter assisted sample preparation (FASP).
- A step-by-step protocol for released N-linked glycan analysis of the monoclonal antibody adalimumab, based on UHPLC-FLR-MS and procainamide labeling.
- A complete workflow for the intact and middle-up mass analysis of reduced and non-reduced monoclonal antibodies based on SEC-MS with sample preparation by protein-A affinity clean-up.
- Uncover how HPLC analysis of glycans helps researchers analyze glycan structures and glycoforms & find products to assist in your glycan analysis methods.
- Larger porous shell particles in BIOshell™ columns improve efficiency in U/HPLC analysis of peptides and proteins.
- Mindent látni (26)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön [email protected]
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?Ügyfeleink kényelme érdekében ezt az oldalt géppel fordítottuk le. Törekedtünk arra, hogy ez a fordítás pontos legyen. A gépi fordítás azonban nem tökéletes. Ha nem elégedett a gépi fordítással, kérjük, tekintse meg az angol nyelvű változatot.
