Minta tisztítása

A laboratóriumokban a minták későbbi elemzésre való előkészítéséhez az alábbi leggyakoribb tisztítási technikák közül néhányat alkalmaznak.

Dialízis

A dialízis egy olyan tisztítási technika, amelyet a só vagy más kis molekulatömegű molekulák eltávolítására használnak a mintából. A minta pufferkészítményének cseréjére is alkalmazzák. A dialízis egy passzív technika, amely nagy mennyiségű puffert igényel.

Puffercsere és sótalanítás

A sótalanítás egy egyszerű módszer a sók és más kis molekulatömegű szennyeződések eltávolítására a mintából. Ezt használják továbbá a puffercsere elvégzésére különböző kromatográfiás lépések előtt vagy után, valamint a reagensek gyors eltávolítására a reakció leállításához.

Frakcionált kicsapás

A frakcionált kicsapást kis mintamennyiségekből a durva szennyeződések eltávolítására használják. A kicsapási technikák a frakciókat a differenciális oldhatóság elve alapján választják szét. Mivel a fehérjefajták hidrofób mivoltuk mértékében különböznek egymástól, a megnövekedett sókoncentráció fokozhatja a fehérjék közötti hidrofób kölcsönhatásokat, és kicsapódást okozhat.

Extrakció

Az extrakcióval történő mintakészítés magában foglalja a célanalitok izolálását egy komplex mintából vagy egy sokkal nagyobb mintamennyiségből. A folyamat eltávolítja azokat a zavaró mintakomponenseket, amelyek blokkolhatják a HPLC- és GC-oszlopokat. Emellett 100-5000-szeresére növeli az analit koncentrációját, ezáltal jelentősen javítva a detektálási érzékenységet. A szelektív és specifikus mintakészítés részeként az extrakció segít biztosítani a megbízhatóbb kromatográfiás elemzést. Az extrakció típusai a folyadék-folyadék extrakció, a szilárd fázisú extrakció (SPE) és a szilárd fázisú mikroextrakció (SPME).

Affinitáskromatográfia

Az affinitáskromatográfia a fehérjéket a fehérje és egy kromatográfiás mátrixhoz kapcsolt specifikus ligandum közötti reverzibilis kölcsönhatások alapján választja szét. A technika rendkívül szelektív és nagy kapacitású fehérjetisztítást tesz lehetővé. Az affinitáskromatográfia akkor alkalmazható, ha a vizsgált fehérjéhez megfelelő ligandum áll rendelkezésre.

Az affinitáskromatográfiás tisztítás magában foglalja a befogási és az elúciós lépéseket. A befogási fázisban a célfehérje specifikusan és reverzibilisen kötődik egy komplementer ligandumhoz, amelyet a kromatográfiás mátrixon rögzítettek. A cél a céltermék izolálása, koncentrálása és stabilizálása, megőrizve annak hatékonyságát és aktivitását. A mátrix mosása után, amelynek célja a nem kötődött anyagok eltávolítása, a kötődött célfehérjét elúciót elősegítő feltételekre váltással nyerik vissza. Az elúciót specifikusan, kompetitív ligandum alkalmazásával, vagy nem specifikusan, a pH, az ionerősség vagy a polaritás megváltoztatásával végzik. Az elúció lehetővé teszi a célfehérje tisztított és koncentrált formában történő begyűjtését.