Sejtnövekedés és fenntartás

A sejtnövekedés fázisai

A megfelelő sejtnövekedés biztosítása kritikus fontosságú a sejttenyésztési vizsgálatokból származó pontos adatok gyűjtéséhez. A sejtszám meghatározható hemocitométerrel vagy automatizált sejtszámlálóval, amely pontosabb sejtszámot biztosít.

A sejtnövekedés a kultúrában általában négy fázisban zajlik:

1. Lag fázis - A sejtek alkalmazkodnak a tenyésztési körülményekhez, és nem osztódnak.
2. Log (logaritmikus) növekedési fázis - A sejtek aktívan osztódnak, ezért ez a legjobb fázis a populáció növekedésének értékelésére vagy adatgyűjtésre. A késői log-fázis a legjobb időpont a sejtek passziválására (szubkultúrázására).
3. Plató (stacionárius) fázis - A növekedés lelassul, amikor a sejtek megközelítik a 100%-os összefolyást, és a sejtek a legérzékenyebbek a stresszre vagy sérülésre, mivel a sejtszemét felhalmozódik és az erőforrások kimerülnek.
4. Hanyatlási fázis - Az élő sejtek populációja csökken, mivel a sejthalál kerül túlsúlyba.

Cellkultúra médiumok, kiegészítők és reagensek

A tenyésztett sejteknek a növekedéshez tápanyagellátásra van szükségük. Az emlős sejttenyésztő közegeknek fiziológiás pH-t kell fenntartaniuk, emellett kiegyensúlyozott sókat, szénhidrátokat, aminosavakat, vitaminokat, zsírsavakat és lipideket, fehérjéket és peptideket, nyomelemeket és növekedési faktorokat kell biztosítaniuk. A magzati szarvasmarha szérum (FBS) a legszélesebb körben használt növekedési kiegészítő az emlős sejttenyészetben, mivel számos ilyen alapvető sejtszintű tápanyagot tartalmaz, és bizonyítottan támogatja a sejtek és szövetek növekedését a tenyészetben. A meghatározott táptalajt vagy csökkentett mennyiségű állati összetevőt igénylő alkalmazásokhoz a xeno-mentes táptalajkészítmények ismert összetételű, állatmentes készítményeket biztosítanak.

Mivel a táptalajok és a kiegészítők gyakran gazdag tápanyagokat biztosítanak az opportunista mikrobák növekedéséhez, a sikeres sejttenyésztés aszeptikus technikát és rendszeres megfigyelést igényel, hogy biztosítsák a sejtpusztulást okozó vagy az in vivo-szerű növekedést zavaró szennyező anyagok hiányát. A mikroszkóposan nem megfigyelhető, gyakori mikrobiális szennyeződések esetében a mikoplazma kimutató reagensekkel végzett rutinszerű szűrés védi a kultúrákat és a szövetszaporító környezeteket.  

A tenyészetek, mint például S. cerevisiae és P. pastoris (Pichia), gyakran használják a kutatásban rekombináns fehérjék expressziójának és a génfunkciók vizsgálatára. Az élesztőkultúra táptalajok összetételében jellemzően szereplő kritikus tápanyagok a pepton, az élesztőkivonat és a dextróz vagy glükóz.

Cellapasszázs tippek és trükkök

Cellakultúrás környezetek és tenyésztőeszközök

A tenyésztett sejteket egyszer használatos, steril műanyag eszközökkel termesztjük és kezeljük, beleértve a szövettenyésztő lombikokat és multiwell lemezeket, szerológiai pipettákat, steril üvegfedeles szűrőket és steril fecskendőszűrőket. A műanyag szövettenyésztő lombikokat és lemezeket általában úgy kezelik, hogy hidrofil felületet biztosítsanak a megtapadó sejtek rögzülésének megkönnyítése érdekében. A 2D felületek alternatívájaként a mikroporózus membrán alapú lemezek fiziológiásabb növekedési környezetet biztosítanak az olyan összetett sejtvizsgálatokhoz, mint a sejtvándorlás, a sejt-sejt kommunikáció és a sejtpolarizáció.

A tenyésztett sejteket olyan hőmérsékleten és gázos környezetben kell tartani, amely ezeket a paramétereket abban a szervezetben rekonstruálja, amelyből származnak. A sejteket és tápfolyadékot tartalmazó tenyésztőedényeket általában olyan inkubációs készülékekben tartják, amelyek a hőmérséklet és a gázkeverékek pontos szabályozását biztosítják. A mikrofluidikát alkalmazó és a sejtek folyamatos tenyésztésben történő leképezését megkönnyítő kisméretű, asztali inkubációs rendszerek azonban a leghitelesebb környezetet biztosíthatják a prediktív in vitro modellekhez.