Pirogénvizsgálati módszerek
A pirogénvizsgálat a parenterális gyógyszerészeti vagy biofarmakológiai készítményekben található pirogének mennyiségét határozza meg, és ezt számos szabvány szabályozza, például az Amerikai Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hivatal (FDA), az Amerikai Gyógyszerkönyv (USP) vagy az Európai Gyógyszerkönyv (EP) előírásai. A termék sterilitása nem jelenti azt, hogy pirogénmentes lenne. Ezért az állítólag steril gyógyszereket is pirogénvizsgálatnak kell alávetni a betegeknél fellépő lázas reakciók megelőzése érdekében.
A pirogénszennyeződés a gyógyszerek, bioterápiás készítmények és orvostechnikai eszközök gyártása vagy alkalmazása során is előfordulhat, de a pirogének jelenléte a termék velejáró tulajdonsága is lehet, például a vakcinák adjuvánsai vagy a szintetikus lipopeptidek esetében.
Kiemelt kategóriák
A biztonság garantálása: Gyógyszerek pirogénvizsgálata a monocita-aktivációs teszt (MAT) segítségével az endotoxinok és a nem endotoxin jellegű pirogének kimutatására.
Mikrobiológiai minőség-ellenőrzéshez szükséges sterilitásvizsgálati laboratóriumi műszerek és fogyóeszközök: sterilitásvizsgálati táptalajok, szivattyúk, berendezések és kiegészítők.
Mi az a pirogén?
A pirogén olyan anyag, amely a veleszületett immunrendszer aktiválása révén hőmérséklet-emelkedést (lázreakciót) okoz emberben vagy állatban. A pirogének a szennyező anyagok heterogén csoportját alkotják, amely mikrobiális és nem mikrobiális anyagokat egyaránt magában foglal. A pirogének két csoportba sorolhatók: endotoxinok és nem endotoxikus pirogének (NEP-ek).
Az endotoxinok a Gram-negatív baktériumokban előforduló anyagok. A nem endotoxikus pirogének egyéb mikrobiális anyagok, ideértve a Gram-pozitív baktériumokból, vírusokból, élesztőkből és gombákból származókat is. A nem mikrobiális pirogén anyagok gumirészecskékből, mikroszkopikus műanyagrészecskékből vagy az elasztomerekben található fémvegyületekből is származhatnak.
A pirogének kimutatására számos vizsgálati módszer áll rendelkezésre. Ezeket az alábbi táblázatban leírtak szerint az általuk kimutatott szennyezőanyag típusa, valamint a vizsgálat elvégzéséhez szükséges állati eredetű anyagok igénye alapján lehet osztályozni:
Nyúl-pirogénvizsgálat
A nyúl-pirogénvizsgálat (RPT) során a vizsgált termék intravénás beadása után mérik a nyulak hőmérsékletének emelkedését. Az RPT kvalitatív eredményeket ad, és érzékenysége meglehetősen alacsony. A vizsgálat megbízhatósága is korlátozott, mivel a nyulak ismételt injekciók után pirogén-toleranciát fejlesztenek ki, illetve a vizsgálat elvégzése során stressz éri őket.
Megjegyzés: A nyúl-pirogénvizsgálat (RPT) ma már tilos Európában, és az endotoxinok, valamint a nem endotoxin jellegű pirogének kimutatására a monocita-aktivációs vizsgálat (MAT) a preferált módszer.
Monocita-aktivációs teszt
A monocita-aktivációs teszt (MAT) az állatkísérleteken alapuló módszerek alternatívája mind az endotoxin, mind a nem endotoxin jellegű pirogének kimutatására. A monocita-aktivációs teszt az emberi immunreakciót utánozza azáltal, hogy a monocitákat a vizsgált mintával együtt inkubálja. Pirogének jelenléte esetén a monociták aktiválódnak, és gyulladásos molekulákat, citokineket termelnek, amelyek felelősek a lázas reakcióért. A citokineket ezután specifikus antitesteket és enzimatikus színreakciót alkalmazó immunológiai vizsgálattal (ELISA) mutatják ki.
Megjegyzés: 2025. júliustól az Európai Gyógyszerkönyv (Ph. Eur.) Bizottság az endotoxinok és a nem endotoxin jellegű pirogének vizsgálatára a monocita-aktivációs tesztet (MAT) javasolja elsődleges módszerként. A nyúl-pirogén-teszt (RPT) használata Európában immár tilos.
Olvassa el a cikket, és beszélje meg szakértőinkkel, hogyan állhat át az endotoxinokat és nem endotoxin jellegű pirogéneket kimutató MAT-ra, és hogyan követheti a szabályozási trendeket.
Bakteriális endotoxin-vizsgálat (LAL-teszt)
Az endotoxin-vizsgálat leggyakoribb módszere a Limulus-amöbocita-lizátum-teszt (LAL-teszt), amely a patkós rák véréből nyert amöbociták lizátumán alapuló vizsgálat. A patkós rák vérsejtjeiből nyert lizátum természetes módon koagulációs reakcióba lép a bakteriális endotoxinokkal. Ez a módszer nagy érzékenységgel rendelkezik az endotoxinok mennyiségi meghatározására, de nem képes kimutatni a nem endotoxin jellegű pirogéneket.
Rekombináns BET (r-FC, r-CR) vizsgálat
A rekombináns C-faktor egy géntechnológiával előállított fehérje, amely normális esetben a Limulus-amebocita-lizátum kaszkádjában található. Ebben a vizsgálatban a C-faktor reagál az endotoxinnal, és egy markerekkel kapcsolódik össze, így kvantifikálható, fluoreszkáló végterméket hozva létre. A rekombináns C-faktor-vizsgálat ugyanazon az elven működik, mint a LAL-vizsgálat, azonban állati eredetű anyagok használata nélkül.
A rekombináns kaszkádreagens (r-CR) egy géntechnológiával előállított, többkomponensű reagens, amely rekonstruálja a Limulus-amebocita-lizátumban található teljes véralvadási kaszkádot. Ebben a vizsgálatban a kaszkád fehérjéi – a C-faktor, a B-faktor és a prokoagulációs enzim – egymást követően reagálnak az endotoxinnal, és így mennyiségileg meghatározható végterméket hoznak létre. Az r-CR-teszt a teljes LAL-útvonalat modellezi, de állati eredetű anyagok használata nélkül.
Látogasson el a dokumentumkeresőnkbe, ahol megtalálja az adatlapokat, tanúsítványokat és a műszaki dokumentációt.
Kapcsolódó cikkek
- A Clostridium perfringens az alulfőzött vagy nem megfelelően sterilizált konzervekben és a vízben okozhat fertőzést. Ismerje meg e kórokozó kimutatását, azonosítását és megkülönböztetését.
- Interview: Accurate microbiology QC methods for infant formula testing
- Probiotics exhibit an inhibitory effect on pathogens, help prevent chronic intestinal inflammatory diseases or atopic syndromes, and support the immune system.
- Best practices for microbial testing of purified water in the lab. Covers storage, culture and incubation conditions, and contaminants reduction.
- Culture media provides a habitat with suitable nutrients, energy sources, and certain environmental conditions for the growth of microorganisms. The components of the culture media range from simple sugars to peptones, salts, antibiotics, and complex indicators.
- Összes megtekintése (10)
Kapcsolódó protokollok
- Általános útmutató az Enterobacteriaceae kimutatására és számbavételére az élelmiszerekben az EN-ISO 8523:1991 és az EN-ISO 4832:1991 szabvány szerint.
- Összes megtekintése (2)
További cikkek és protokollok
Kapcsolódó webináriumok
Ezen a webináriumon azt tárgyaljuk, hogy a PyroMAT® rendszerrel végzett monocita-aktivációs vizsgálatok hogyan észlelik az endotoxinokat és a nem endotoxin jellegű pirogéneket.
Tudja meg, hogyan nyújt a PyroMAT® rendszerünk egy megbízható megoldást a gyógyszeripari in vitro pirogénvizsgálathoz egy azonnal használatra kész készlettel.
Ezen az előadáson megismerhetik, hogyan kell vizsgálni a gyógyszeripari mintákban a pirogének (beleértve a nem endotoxin jellegű pirogéneket is) jelenlétét, valamint hogy milyen módszerek állnak rendelkezésre a folyamat szabályozása érdekében.
Hogyan segíthetünk?
Ha bármilyen kérdése van, kérjük, nyújtson be ügyfélszolgálati kérelmet
, vagy vegye fel a kapcsolatot ügyfélszolgálati csapatunkkal:
E-mail: custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173 számot
További támogatás
- Kromatogram-keresés
Használja a kromatogram-keresőt a mintában található ismeretlen vegyületek azonosításához.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Ügyfélszolgálati kérelem
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- GYIK
Olvassa el a „Gyakran feltett kérdések” rovatunkat, ahol megtalálja a termékeinkkel és szolgáltatásainkkal kapcsolatos leggyakrabban feltett kérdésekre adott válaszokat.