Fehérje Pull-Down technikák
A pull-down assay két vagy több fehérje kölcsönhatásának meghatározására szolgál. Az affinitási pull-down próbák során egy ″bait″ fehérjét megjelölnek és rögzítenek egy immobilizált ligandumon (hordozógyöngyök) kovalens kötéssel vagy affinitási címkén keresztül, mint például az immobilizált fémaffinitás kromatográfia (IMAC). A gyakori csalifehérje-fúziós címkék közé tartoznak a glutation-S-transzferáz (GST) és a hisztidin-jelölt fehérjék. A csalifehérje komplexet képez, amelyet aztán egy fehérjeforrással, például sejt- vagy szövetlizátummal inkubálnak. Az érdeklődésre számot tartó fehérjéket a gyöngyös hordozóról több mosáson keresztül eluáljuk, majd centrifugálással összegyűjtjük. Az affinitási pull-down tisztítási és kimutatási módszer abban különbözik az immunprecipitációs (IP) és a Co-IP vizsgálatoktól, hogy nem antitest-antigén kölcsönhatásról van szó. Minden pull-down vizsgálatnál a megtisztított mintát gyakran SDS-PAGE, tömegspektrális elemzéssel és Western blot detektálással elemzik a további downstream analízishez.
Kiemelt kategóriák
A Cytiva™ technológiák olyan áttöréseket tettek lehetővé a tudományban és az orvostudományban, amelyek napjaink biotechnológiai iparát alakították.
Optimalizálja a fehérjetisztítást a többféle címkéhez való affinitásgyanták és pufferek választékával...
Streptavidin és avidin gyanták és előrecsomagolt oszlopok kis- és nagyméretű...
Affinitás GST Pull-Down alkalmazások
A glutation S-transzferáz (GST) egy 211 aminosavból álló fehérje, amely a legtöbb szervezetben megtalálható. A GST-t gyakran integrálják expressziós vektorokba, hogy a E. coli fehérje-expressziós rendszereken belül fúziós taget állítsanak elő. A GST-tag egy nagyméretű, körülbelül 26 kDa fehérje, és kifejezhető baktériumokban, élesztő-, emlős- és rovarsejtekben. A GST-tag előnyös, ha a rekombináns fehérje védelmére van szükség az intracelluláris proteázok hasításával szemben, és ha a jelölt fehérje oldhatóságát növelni kell. Ezenkívül a GST-fehérje nagy affinitású taget biztosít az egyszerű tisztításhoz és az olcsó affinitásgyantákat használó, enyhe elúciós körülmények között végzett pull-down kísérletekhez.
Co-Immunoprecipitáció
A pull-down vizsgálat ideális a koimmunoprecipitációs eredmények ellenőrzésére és kiváló módszer az ismeretlen fehérje-fehérje kölcsönhatások azonosítására, valamint a specifikus fehérjék aktivációs állapotának meghatározására. Az affinitási pull-down módszerekkel ellentétben az IP antitesteket használ az antigének komplex biológiai mintákhoz való kötődésére és izolálására.
A ko-IP egy antitest használatára utal, amely egy antigént köt meg egy multiprotein komplexen belül. A komplexet ezután protein A vagy protein G közeg hozzáadásával rögzítjük. A fehérje A/G nagy affinitása a poliklonális és monoklonális IgG típusú antitestek Fc régiójához teszi őket kritikus komponenssé az érdeklődésre számot tartó fehérje vagy fehérjekomplex tisztításában. A fehérje pull-down módszerek alkalmazása alapvető eszköz a fehérje-fehérje kölcsönhatási hálózatok vizsgálatához; a konkrét módszer kiválasztását azonban a kutató konkrét alkalmazási igénye határozza meg.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- CsCl gradient centrifugation separates RNA from DNA; differential and density gradient centrifugation techniques explained.
- A centrifugálás lehetővé teszi a részecskék üledékképződéssel történő szétválasztását. Ismerje meg, hogyan lehet a részecskéket centrifugával szétválasztani, és hogyan lehet a Stokes-törvényt használni az ülepedési sebesség kiszámításához.
- Sera-Mag and Sera-Mag SpeedBeads provide cost effective magnetic bead separation technology for molecular biology applications, nucleic acid isolation, and research immunoassays.
- Agarose beads Vs. Magnetic beads in Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)
- This page describes immunoprecipitation (immunoaffinity or pull-down techniques).
- Mindent látni (12)
Kapcsolódó protokollok
- Techniques for protein antigen molecular weight determination, protein interactions, enzymatic activity, and post-translational modifications.
- Ez a protokoll részletezi az immunprecipitációt immobilizált G-protein felhasználásával szövetekkel vagy sejtekkel. Hibaelhárítási tippeket is tartalmaz.
- Immunoprecipitation Kit (Protein A) Protocol & Troubleshooting
- Sera-Mag SpeedBeads provide fast and convenient protein isolation; suitable for manual or automated magnetic affinity binding in various applications.
- Az antitesttisztítási protokollok olyan készítményeket eredményeznek, amelyek a specifikus antitestek mellett endogén IgG-t is tartalmaznak.
- Mindent látni (17)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön [email protected]
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?