Pyrogen tesztelés
A pirogének vizsgálata kritikus lépés a parenteralisan beadott gyógyászati termékek, például gyógyszerek vagy biofarmakonok biztonságának biztosításában. Ez része a kötelező felszabadítási vizsgálatoknak a pirogének által kiváltott életveszélyes lázreakciók elkerülése érdekében. A monocita aktivációs teszt (MAT) képes mind az endotoxin, mind a nem endotoxin pirogének kimutatására egyetlen in vitro tesztben.
2025 júliusa óta a MAT az Európai Gyógyszerkönyv szerint az endotoxin és a nem endotoxin kimutatására szolgáló módszer, amely felváltotta a nyúl pirogén tesztet (RPT).
Monocyta aktivációs teszt (MAT)
Az endotoxinok és a nem endotoxin pirogének kimutatására használt MAT a parenterális termékekben, például gyógyszerekben és orvostechnikai eszközökben, ad an in vitro alternatívát nyújt a hagyományos állatkísérletek helyett a szabályozási irányelveknek megfelelően.
A nyúl pirogén tesztet és a Limulus amőbocita lizátum (LAL) tesztet széles körben használják a pirogének kimutatására. Mindkét módszerhez állatokat használnak, és bizonyos korlátokat mutatnak. A nyúl pirogén teszt nem eléggé megbízható, mivel az állati reakció nagymértékben eltérhet az emberi reakciótól. A LAL-teszt során csak endotoxinokat detektálnak, ami biztonsági kockázatot jelent, mivel figyelmen kívül hagyja a vizsgált mintában esetleg jelen lévő nem endotoxin pirogéneket.
Ezek a korlátok kiküszöbölésére 2010-ben az Európai Gyógyszerkönyvbe bevezették a Monocita-aktivációs tesztet (MAT), mint a nyúl pirogén tesztet helyettesítő kompendialis módszert (EP 2. fejezet.6.30) helyettesítésére, és az FDA iparnak szóló útmutatásában is megemlítik.
Kérjük, vegye figyelembe: A European Pharmacopoeia Commission a 3R-elvvel összhangban úgy döntött, hogy véget vet a nyúl-pyrogén tesztnek, tekintve, hogy a MAT a legjobb alternatív lehetőség. 2025 júliusától a nyúl-pyrogén teszt (RPT) Európában tilos, és a nyúl-pyrogén tesztről szóló 2.6.8. általános fejezetet megszüntették.
PyroMAT® in vitro in vitro teszt endotoxin és nem endotoxin pirogének kimutatására
A PyroMAT® rendszer a Mono-Mac-6 sejtvonalon és az IL-6 leolvasáson alapul. A monocita-aktivációs teszt minden előnyét kínálja a sejtvonal használatának előnyeivel kombinálva.
- A pirogének széles körének kimutatása: a betegbiztonság akkor biztosított, ha a pirogének teljes körét vizsgáljuk. A nyúl pirogénteszthez (RPT) hasonlóan a MAT is hatékony mind az endotoxin, mind a nem endotoxin pirogének kimutatására.
- A vizsgálható termékek körének bővítése: a leggyakrabban alkalmazott módszerek, az RPT, a bakteriális endotoxin teszt (BET) vagy a LAL korlátozottak az általuk vizsgálható terméktípusok tekintetében. A MAT nagyobb rugalmasságot kínál az alkalmazások tekintetében.
- In vitro vizsgálat, amely az emberi immunreakciót utánozza: a robusztus előrejelző modellhez, amely csökkenti az állatok fogyasztását.
- Megfelelés a nemzetközi előírásoknak és irányelveknek: összhangban az ipar és a szabályozó hatóságok etikai trendjeivel, hogy csökkentsék az állatokon végzett vizsgálatok használatát.
- Standardizált reaktivitás és nagy érzékenység (LOD 0,05 EU/mL). A használatra kész sejtvonal kényelme csökkenti a munkaigényes laboratóriumi munkát, és elkerüli a sejttenyésztő laboratórium szükségességét.
- Kvalifikált sejtek: amellett, hogy a MAT nemzetközi validálásában idézik, a Mono-Mac-6 sejtek az összes felszíni Toll-szerű receptor (TLR) expressziója szempontjából minősítettek, így biztosítva a pirogének széles körének kimutatását.
Non-endotoxin pirogén pozitív kontrollok
Az Európai Gyógyszerkönyv 2.6.30. fejezete (Monocita aktivációs teszt) előírja, hogy az előkészítő vizsgálatban legalább a TLR4 toll-szerű receptort és legalább két másik toll-szerű receptor ligandumot kell kimutatni [...]. Az alkalmazott nem endotoxin pirogének kiválasztásának tükröznie kell a vizsgált készítmény legvalószínűbb szennyeződését (szennyeződéseit)."
Az e követelménynek való megfelelés érdekében a pozitív kontrollok kibővített választékát kínáljuk:
- A gyógyszeripari gyártási folyamatokban általában előforduló többféle szennyeződést (Gram-negatív és Gram-pozitív baktériumok, vírusok és mikoplazma) tükröző pozitív kontrollok.
- Másféle monociták toll-szerű receptorát (TLR)
Ligand | Célpont TLR | A visszavert szennyezőanyag típusa | ||
|---|---|---|---|---|
HKSA | ||||
HKSA /p> | TLR2 | Gram-pozitív baktériumok | ||
Flagellin | TLR5 | Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok | TLR5 | Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok |
PAM3CSK4 | TLR2/1 | Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok | ||
Reszikimod | TLR7/8 | Vírus | ||
FSL1 | TLR2/6 | Mykoplazma |
- A pirogének széles spektrumának kimutatása: A nyúl pirogénteszthez (RPT) hasonlóan a MAT is kimutatja az endotoxinokat és a NEP-eket.
- A vizsgálható termékek kibővített köre: A leggyakrabban alkalmazott módszerek, az RPT, a bakteriális endotoxin teszt (BET) és a LAL, korlátozottan alkalmazható terméktípusok. A MAT nagyobb rugalmasságot kínál az alkalmazások tekintetében.
- Az emberi immunreakciót utánzó in vitro vizsgálat: Egy robusztus előrejelző modellhez, amely csökkenti az állatok fogyasztását.
- Megfelelés a nemzetközi szabályozásoknak és irányelveknek: Egyetértve az ipar és a szabályozó hatóságok etikai trendjeivel, hogy csökkentsék az állatokon végzett kísérletek használatát.
- 8 donorból származó kriokonzervált vér összevontan: Hogy a lehető legközelebb álljon a pirogénekre adott emberi immunreakcióhoz.
Optimalizálja vagy egyszerűsítse pirogén tesztelési módszerét a könnyű validálás és a költséghatékony tesztelés érdekében szolgáltatási ajánlatainkkal:
- Alkalmazási szolgáltatások
- Validálási szolgáltatások
- Képzési szolgáltatások
A nyúl, LAL és MAT pirogén tesztek összehasonlítása | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| nyúl | LAL | MAT (PyroDetect System) | MAT (PyroMAT® System) | MAT (PyroMAT® System) | |||
| Vizsgálat típusa | In vivo | Ex vivo | In vitro (kriokonzervált teljes vér) | In vitro (Monocita sejtvonal) | |||
| Élettani fogyasztás/th> | ++ | + | - | - | |||
| Szennyezőanyagok kimutatása | Endotoxinok e.g. Gram-negatív baktériumokból származó LPS | + | + | + | + | ||
| + | - | + | + | ||||
| Élesztők és penészgombák | + | - | + | + | |||
| Vírusok | +/- | - | + | + | |||
| Alkalmazás | gyógyszerek | + | + | + | + | + | |
| Biológiai termékek | + | +/- | + | + | + | ||
| Egészségügyi eszközök | + | +/- | + | + | |||
| Sejtterápiák | - | +/- | + | + | |||
Hiányos erőforrások a MAT végrehajtásához és érvényesítéséhez. Mi megtesszük Önnek!
Megvalósíthatósági tanulmány, módszerfejlesztés, validálás & képzési szolgáltatások a pirogénvizsgálat megvalósításának támogatására, beszélje meg Pyrogen Testing Experts.
Kapcsolódó források
- Brochure: PyroMAT® and PyroDetect
Used to detect a broad range of pyrogens in parenteral products such as pharmaceuticals, biopharmaceuticals or medical devices, the MAT gives an in vitro alternative to conventional animal testing in accordance with regulatory guidelines.
- Datasheet: Non-endotoxin Pyrogen Positive Controls
Meet regulatory requirements for Monocyte Activation Test (MAT) with our non-endotoxin pyrogen controls designed for the PyroMAT® system
Kapcsolódó videók
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?Ügyfeleink kényelme érdekében ezt az oldalt géppel fordítottuk le. Törekedtünk arra, hogy ez a fordítás pontos legyen. A gépi fordítás azonban nem tökéletes. Ha nem elégedett a gépi fordítással, kérjük, tekintse meg az angol nyelvű változatot.