Preparazione dei terreni di coltura microbici

Tipi di terreni di coltura

I terreni di coltura microbici devono fornire condizioni di crescita ottimali per tutti o per specifici tipi di microrganismi. La composizione precisa di un terreno di coltura dipende dalla specie coltivata e dall'obiettivo dell'applicazione. Il pH del terreno deve essere regolato in base ai microrganismi. I terreni di coltura microbici sono classificati in base a diversi parametri, come i costituenti chimici, la natura fisica e la funzione. I tipi di terreni di coltura definiti da questi parametri sono descritti di seguito.

Classificazione dei terreni di coltura microbica in base alla composizione chimica

Mezzo sintetico (definito) è un terreno con sostanze chimiche definite comunemente usato per la coltura di fotoautotrofi, come cianobatteri e protisti fotosintetici. È ampiamente utilizzato nella ricerca, per studiare il metabolismo dei microrganismi.

Media complesso è un terreno contenente componenti chimici non definiti, come peptone, estratto di carne ed estratto di lievito, che soddisfano i requisiti nutrizionali di diversi microrganismi. Viene utilizzato per la coltura di microbi fastidiosi con esigenze nutrizionali complesse.

Medi di coltura microbica basati sulla natura fisica

Medi solidi utilizzano l'1-7% di agar-agar o il 10-20% di gelatina per solidificare il brodo liquido. I terreni solidi sono utilizzati per isolare diversi microbi tra loro, per stabilire colture pure, per preparare agar slants e per fare agar stabs.

Il terreno liquido non contiene agenti solidificanti. Dopo l'inoculazione e l'incubazione, le cellule diventano visibili sotto forma di una piccola massa o di una macchia di brodo.

Medi di coltura microbica basati sul metodo di preparazione

Medi di coltura pronti per l'uso sono terreni solidi o liquidi forniti in piastre, bottiglie, provette o altri contenitori, in forma pronta per l'uso o pronti per l'uso dopo rifusione e integrazione.

Medio preparato da formulazioni disidratate in commercio è un mezzo in forma secca che richiede reidratazione e lavorazione prima dell'uso, risultando in un mezzo completo o in un mezzo incompleto a cui vengono aggiunti supplementi prima dell'uso.

Medio preparato da singoli componenti è un terreno prodotto da un laboratorio di microbiologia interamente dai suoi singoli ingredienti.

Il terreno di coltura su richiesta è prodotto da un sistema che mantiene disponibile in laboratorio un terreno di coltura sterile altamente concentrato per diversi giorni. Diluendo con acqua sterile, si può produrre una quantità necessaria di terreno pronto all'uso su richiesta, senza bisogno di autoclave.

Preparazione di terreni di coltura microbici

La preparazione del terreno da formulazioni commerciali disidratate deve essere eseguita seguendo le istruzioni del produttore. La formulazione degli ingredienti di base, come peptoni, estratti di lievito, agar, sostanze tamponanti e antibiotici, viene modificata per ottenere la consistenza del terreno. La quantità necessaria di terreno disidratato o di singoli ingredienti viene sciolta in acqua distillata mediante agitazione continua seguita da riscaldamento (se necessario). I terreni contenenti agar devono essere adeguatamente impregnati con un'adeguata agitazione prima del riscaldamento. Il pH deve essere regolato e il terreno viene distribuito in contenitori appropriati per la sterilizzazione a calore umido in autoclave. Le sostanze sensibili al calore (ad es. proteine, enzimi) vengono sterilizzate utilizzando filtri a membrana.

I terreni di coltura devono essere conservati a temperature specifiche per evitare la modifica della composizione e non oltre la durata di conservazione del prodotto. La preparazione e la conservazione asettica sono essenziali per proteggere i terreni di coltura dalle infezioni microbiche. La perdita di acqua durante la conservazione può essere ridotta al minimo con un involucro impermeabile e/o con la conservazione a 5 °C ± 3 °C. La degradazione chimica, ad esempio l'ossidazione o la perdita di antimicrobici, può essere ritardata proteggendo il prodotto dalla luce, dal calore e dalla disidratazione.