Terreni e tamponi classici
Per fornire alle colture cellulari di mammifero l'ambiente più adatto in funzione delle loro differenti fisiologie, sono state apportate svariate modifiche ai terreni di coltura classici. Prodotti nei nostri centri all'avanguardia, i nostri terreni e i sali, insieme ai loro componenti, sono stati convalidati per l'uso in molte applicazioni nell'ambito delle colture cellulari. Scegliete il terreno adatto alla vostra applicazione in funzione dei parametri necessari, come la concentrazione di glucosio, la supplementazione con L-glutammina o con glutammina stabile, l'aggiunta dell'indicatore di pH rosso fenolo, e anche il formato, liquido o in polvere.
Prodotti
Terreno di Eagle modificato da Dulbecco (DMEM)
Tra i terreni definiti per la coltura di cellule e tessuti, il DMEM (terreno di Eagle modificato da Dulbecco) è quello più versatile, perché appropriato per molti fenotipi di cellule aderenti. La modificazione di Dulbecco consiste in una formulazione potenziata da supplementi che vede un aumento fino a quattro volte della quantità di specifici amminoacidi e vitamine rispetto al terreno originale di Eagle. La nostra selezione comprende una gamma di diverse concentrazioni di glucosio, nonché formulazioni con e senza L-glutammina. Per le applicazioni sensibili agli estrogeni sono disponibili versioni senza l'indicatore di pH rosso fenolo. Inoltre, il nostro listino non comprende solo i formati liquidi, pratici e pronti per l'uso, ma anche le economiche formulazioni in polvere, più facili da conservare e più durature.
Terreni RPMI 1640
Così denominati in quanto sviluppati presso il Roswell Park Institute da Moore et al, i terreni RPMI 1640 sono ottimizzati per la coltura di cellule non aderenti, come i linfociti e altre cellule del sangue. La formulazione è basata sulla serie RPMI 1630 con l’uso di un sistema tampone bicarbonato e modifiche delle quantità di aminoacidi e vitamine. Il terreno RPMI 1640 è stato utilizzato per la coltura di leucociti umani normali e neoplastici. Se adeguatamente integrata, questa formulazione si è dimostrata molto versatile nel supportare la crescita di svariati tipi di cellule in coltura, inclusi i linfociti umani freschi nel test di stimolazione con fitoemoagglutinina (PHA) per 72 ore.
Formulazioni del terreno DMEM/F12
Da anni in letteratura sono reperibili da tempo numerosi riscontri positivi sulla crescita di diversi tipi di linee cellulari in terreni privi di siero, sostituito con la supplementazione di nutrienti, fattori di crescita e ormoni. Mather e Sato (BBRC, 1985) riportano la coltivazione di cellule di Leydig e di Sertoli in terreno senza siero ma contenente insulina, transferrina, fattore di crescita epidermico, ormone luteinizzante o ormone follicolo-stimolante, somatomedina e ormone della crescita. Sebbene gli ormoni e le loro concentrazioni venissero ottimizzati in base al tipo di cellula in studio, il terreno risultato ottimale per questi studi consisteva in una miscela 1:1 di terreno DMEM e della miscela di nutrenti del terreno Ham's F-12, nota anche come DMEM/F12. A questa formulazione può essere aggiunto il tampone HEPES, alla concentrazione finale di 15 mM, per compensare la perdita di capacità tampone causata dall'eliminazione del siero.
Terreno minimo essenziale (MEM)
Sviluppato da Harry Eagle presso l’NIH, il MEM (terreno minimo essenziale) contiene amminoacidi essenziali universali per rispondere alle esigenze di specie diverse ed è uno dei terreni sintetici per colture cellulari più ampiamente utilizzati. I primi tentativi di coltivare fibroblasti normali di mammifero e alcuni sottocloni di cellule HeLa dimostrarono che gli specifici requisiti nutrizionali di tali cellule non potevano essere soddisfatti dal terreno base di Eagle (BME). Studi successivi condotti su queste e altre cellule in coltura indicarono che l’aggiunta di alcuni nutrienti al BME consentiva la crescita di una più ampia varietà di cellule esigenti. Il terreno MEM, frutto di tali modifiche, contiene concentrazioni più elevate di amminoacidi che lo rendono più simile alla composizione proteica delle cellule di mammifero.
Questo terreno viene usato per la coltura di un’ampia tipologia di cellule che crescono in monostrato. Le possibilità di utilizzo di questo terreno sono state ampliate con aggiunta opzionale di amminoacidi non essenziali alle formulazioni contenenti sali di Hank o di Earle. La sua formulazione è stata ulteriormente modificata creando anche una versione priva di calcio, per consentire la coltura di cellule che crescono in sospensione.
Formulazioni dei terreni Ham's F-10 e F-12
Le miscele di nutrienti dei terreni di Ham sono state originariamente sviluppate per supportare la crescita di molti cloni di cellule di ovaio di criceto cinese (CHO) e di cloni di cellule HeLa e di cellule-L di topo, ma sono risultate adatte anche per la coltura di epatociti, la fusione virale e i test di tossicità. Queste miscele sono state formulate per l'uso con o senza l’aggiunta di siero, a seconda del tipo di cellule coltivate.
- È stato dimostrato che il terreno Ham's F-10 supporta la crescita di cellule diploidi umane, leucociti ed espianti primari di tessuti di ratto, coniglio e pollo.
- Il terreno Ham's F-12 è stato utilizzato per la crescita di epatociti primari di ratto e delle cellule epiteliali di prostata di ratto. È stato anche impiegato in un test di tossicità su cloni di cellule CHO. Inoltre, questo terreno è disponibile anche con HEPES 25 mM, che costituisce un tampone più efficace nell'intervallo ottimale di pH 7,2 - 7,4.
- La modifica di Coon al terreno Ham's F-12 è stata introdotta per la coltura di cellule ibride prodotte mediante fusione virale. Questa modifica consiste in una concentrazione di amminoacidi e di piruvato doppia rispetto alla concentrazione standard, oltre all'aggiunta di acido ascorbico e concentrazioni modificate dei sali. La formula di Coon contiene 0,863 mg/L di solfato di zinco, il che potrebbe renderla inadatta alla coltura di cellule L di topo.
- La modifica di Kaighn al terreno Ham's F-12 (chiamato anche Ham's F-12K) ha aumentato la concentrazione di alcuni amminoacidi e del piruvato e ha modificato quella dei sali (formula di Konigsberg). Questo terreno è stato ideato per supportare la crescita di cellule differenziate di ratto e pollo, nonché di epatociti primari umani.
Terreno di coltura M199
I primi terreni per colture tissutali erano prevalentemente formulati a partire da prodotti di origine animale e/o estratti tissutali. Nel 1950, Morgan e collaboratori descrissero il loro lavoro di messa a punto di un terreno per colture cellulari rigorosamente definito. I loro esperimenti, condotti con varie combinazioni di vitamine, amminoacidi e altri fattori, dimostrarono che era possibile crescere un tessuto espiantato in quello che è noto come Terreno di coltura M199, ancora oggi molto utilizzato in virologia, nella produzione di vaccini, nella coltura di espianti primari di tessuti e nella coltivazione in vitro di tessuti di epitelio pancreatico di topo e di cristallino di ratto.
I ricercatori capirono poi che la coltivazione a lungo termine delle cellule richiedeva anche una supplementazione di siero. Se adeguatamente integrato, il terreno M199 può essere impiegato per molte specie diverse, in particolare per coltivare cellule non trasformate.
Sali di base per colture cellulari
D-PBS, Hanks', Earle's, Tyrode's — Qualunque sia la vostra applicazione, troverete la formulazione ideale nella nostra collezione di sali bilanciati, la più completa attualmente disponibile.
Altri terreni di coltura classici
Scoprite le nostre formulazioni speciali, come quelle modificate Ames’ e Iscove’s, oppure le formulazioni Click’s, L-15, McCoy’s, NCTC e molte altre.
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