Tris
Il Tris, indicato anche come THAM (Tris(idrossimetil)aminometano), è una polvere cristallina bianca. Il tampone Tris ha un pKa di circa 8,1 a 25°C, il che lo rende una buona scelta per la maggior parte dei processi biologici in un intervallo di pH compreso tra 7 e 9. Rispetto ad altri tamponi specializzati come HEPES, la polvere di tris è un'opzione economica e più robusta.
Le soluzioni tampone di tris vengono preparate sciogliendo la base tris in acqua e regolando il pH con un acido, tipicamente acido cloridrico o acido solforico. La soluzione risultante serve come regolatore e stabilizzatore di pH affidabile in una varietà di impostazioni sperimentali, tra cui la biochimica delle proteine, la biologia molecolare e l'enzimologia, nonché tecniche come l'elettroforesi, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e processi cromatografici. Inoltre, nella coltura cellulare, il tampone tris contribuisce a mantenere l'ambiente di pH ottimale essenziale per la crescita e la proliferazione delle cellule e il mantenimento delle condizioni fisiologiche nei mezzi di coltura cellulare.
Il tampone Tris è disponibile in varie forme, tra cui soluzioni preconfezionate o in polvere, il che lo rende conveniente per l'uso in laboratorio.
Tris HCl
Il tris HCl o tris cloridrato (noto anche come Trizma HCl) è un agente tampone (tampone acido) comunemente utilizzato in biologia molecolare e in ambito biochimico per regolare il pH di una soluzione o stabilizzarlo. Simile alla base tris, anche il tris HCl è una polvere cristallina bianca con una formula molecolare di C4H12ClNO3 e un peso molecolare leggermente superiore di 157,60. La differenza fondamentale sta nell'aggiunta di acido cloridrico alla base tris, con conseguente formazione di Tris HCl. Mentre la base tris ha un pKa di circa 8,1, che le consente di funzionare come tampone nell'intervallo di pH 7-9, il Tris HCl contiene già acido cloridrico. Questa aggiunta abbassa il pH, rendendo la Tris HCl adatta a tamponare nell'intervallo di pH 7,0-8,6.
La base Tris serve come tampone versatile in un ampio intervallo di pH, mentre la Tris HCl offre un intervallo di pH più specifico grazie al suo contenuto di acido cloridrico. La scelta tra Tris e Tris HCl dipende dall'intervallo di pH desiderato e dalle specifiche esigenze sperimentali o applicative.
Tris Buffered Saline (TBS)
La Tris Buffered Saline (TBS) è un tampone comunemente usato in applicazioni biologiche e biochimiche. Contiene tipicamente Tris(idrossimetil)aminometano, o Tris in breve, un agente tampone che mantiene costante il pH, e cloruro di sodio, che fornisce la forza ionica necessaria. La TBS ha un pH relativamente neutro (circa 7,4) ed è ampiamente utilizzata per applicazioni come il Western blotting, l'immunoistochimica e i saggi ELISA. La TBS viene utilizzata anche come tampone di lavaggio per rimuovere gli anticorpi non legati o altri reagenti dal campione. La concentrazione di Tris e cloruro di sodio può variare a seconda dell'applicazione specifica, ma una formulazione comunemente utilizzata è 50 mM di Tris e 150 mM di cloruro di sodio.
Tris Acetato EDTA (TAE)
Il tampone TAE è un altro tampone comunemente usato in biologia molecolare, elettroforesi e per il blotting settentrionale e meridionale. Nel tampone TAE, il tris funge da agente tampone, l'acido acetico contribuisce alla capacità tampone e l'EDTA (acido etilendiamminotetraacetico) agisce come agente chelante. Il TAE è ampiamente utilizzato come tampone di corsa nell'elettroforesi su gel di agarosio, nell'analisi dei frammenti di DNA, nell'elettroforesi su gel a campo pulsato (per determinare le dimensioni dei frammenti di DNA), nell'elettroforesi dell'RNA e nel trasferimento degli acidi nucleici.
Tris Borato EDTA (TBE)
Il tampone TBE è ampiamente utilizzato per separare e analizzare i frammenti di DNA, soprattutto per ottenere una maggiore risoluzione nella separazione dei frammenti di DNA più piccoli. Nel tampone TBE, l'acido borico svolge un ruolo significativo nel mantenere la capacità tampone della soluzione. Il tampone TBE trova applicazione in diverse tecniche, tra cui elettroforesi su gel di agarosio, sequenziamento del DNA, (PCR), l'analisi degli oligonucleotidi, l'elettroforesi su gel denaturante e l'elettroforesi su gel nativo.
Tampone tris-glicina
Il tampone tris-glicina è un sistema tampone comunemente usato in biologia molecolare, in particolare nell'elettroforesi delle proteine. Nel tampone tris-glicina, la glicina contribuisce in modo significativo alla capacità tampone della soluzione e aiuta a raggiungere il livello di pH desiderato. Il pH del tampone può essere regolato con l'aggiunta di HCl. Il tampone Tris-glicina viene utilizzato per risospendere i campioni di proteine, diluire gli estratti di proteine per le successive analisi o la conservazione ed è particolarmente utile nelle tecniche di elettroforesi proteica non denaturante in cui è fondamentale mantenere la conformazione nativa delle proteine. Serve anche per la focalizzazione isoelettrica e funziona come agente tampone per vari esperimenti sulle proteine.
Tris-glicina-sodio dodecil solfato (SDS)
Il tampone tris-glicina-SDS è il tampone standard per SDS-PAGE, una tecnica utilizzata per separare e analizzare le proteine in base al loro peso molecolare. Questo tampone viene utilizzato per la quantificazione delle proteine, la denaturazione delle proteine, il western blotting e come parte del processo di preparazione dei campioni per le successive analisi a valle.
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