低圧液体クロマトグラフィー

低圧液体クロマトグラフィー(LPLC)は、低圧を利用して移動相を固定相を含有するカラムに送り込み、複雑な混合物を分配の違いによって分離する分析技術です。もともとは、重力によって試料を充填床に移動させる開放カラムで実施されていたため、「オープンカラム液体クロマトグラフィー」とも呼ばれています。LPLCの異なるモードにより、化合物をその化学的性質(サイズ、電荷、親和性など)に基づいて分離することで、化合物を正確かつ効率的に精製することができます。
非破壊的な調製という性質から、主にタンパク質、ペプチド、モノクローナル抗体などの生体分子の研究に使用されています。一般的に、LPLCではサンプルを保存してさらなる試験を行うことができます。LPLCには、シンプルな設計、強力なサイフォン機能、検出器、低圧ポンプ、分取コレクターなどの機器要件がわずかで済むといった、さらなるメリットがあります。その汎用性により、製薬、バイオテクノロジー、食品・飲料、環境モニタリング、研究などの分野で欠かせないものとなっています。さらに、低圧で溶媒の使用量を抑えるLPLCは、グリーンケミストリーの原則にも適合しています。
注目のカテゴリー
吸着クロマトグラフィー
液体-固体クロマトグラフィーとも呼ばれる吸着クロマトグラフィーは、固定相と呼ばれる担体の表面で、化学物質を吸着および脱着させることで保持します。吸着剤が固定相を形成し、溶質はファンデルワール力と立体障害相互作用によってこれに結合します。吸着部位は通常、固定相の外表面にあるため、固定相には比較的小さな粒子が使用されます。シリカ、アルミナ、木炭、フロリシル、ポリアミド、セライト、珪藻土などがよく使われる吸着剤です。
分配クロマトグラフィー
分配クロマトグラフィーは、2つの混ざり合わない液体間の成分を分配することで分離します。一方は移動相の液体であり、もう一方は担体に固定された固定相の液体です。固体支持体として使用される材料には、シリカゲル、珪藻土、セルロース、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリスチレンなどがあります。不活性固体支持体は、液体固定相に大きな表面積を提供します。
アフィニティークロマトグラフィー
アフィニティークロマトグラフィーは、抗体-抗原、酵素-基質、ホルモン-受容体などの組み合わせによる選択的かつ可逆的な相互作用を利用して、成分を分離します。相互作用する物質の一方を固定相として使用します。「アフィニティーリガンド」は、アクリルビーズ、アガロース、トヨパール樹脂などの固相に固定された相互作用種であり、アフィニティーカラムの固定相として機能します。
ゲルろ過クロマトグラフィー
サイズ排除クロマトグラフィーとしても知られ、さまざまな大きさのタンパク質やオリゴマー形態などの異なるサイズの分子を分離します。固定相は、特定の大きさの孔を持つビーズの架橋マトリックスで構成された樹脂です。ゲルろ過カラムには、ポリアクリルアミド、アガロース、デキストラン、またはこれらの混合物のビーズが含まれています。カラム充填粒子内の細孔容積へ部分的あるいは全体的にアクセスすることで、より小さな分析物を分離します。
疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)
疎水性相互作用クロマトグラフィー(HIC)は、生体分子の表面の疎水性の違いに基づいて生体分子を分離します。これは、カラムレジンに結合したブチル、オクチル、フェニルなどの非極性疎水基と生体分子の疎水基との相互作用に基づいています。変性条件やマトリックスをあまり使用しないため、タンパク質の生物学的活性を維持したまま分離するのに広く使用されています。
イオン交換クロマトグラフィー(IEX)
イオン交換クロマトグラフィーは、分子の正味表面電荷の違いに基づいて分子を分離します。セルロース、シリカ、スチレン-ジビニルベンゼンなどのマトリックスの表面は、帯電した官能基と共有結合しています。樹脂に固定化されたイオン交換基は、反対の電荷を持つ分子と相互作用します。カチオン交換クロマトグラフィーでは、移動相中の正に帯電した物質が負に帯電したイオン交換樹脂に結合します。アニオン交換クロマトグラフィーでは、移動相中の負に帯電した物質がイオン交換樹脂上の正の電荷に結合します。
低圧液体クロマトグラフィーシステム
低圧液体クロマトグラフィー(LPLC)システムは、通常、分離用の固定相で充填されたカラム、移動相を制御された流量でカラムに供給するポンプ、カラムから溶出する溶出液を測定する検出器で構成されています。
LPLCシステムには、移動相にサンプルを導入するための注入システムも装備されており、正確で再現性の高いサンプル導入を保証します。システムによっては、分離された成分を収集してさらなる解析を行うためのフラクションコレクターが装備されているものもあります。
関連資料
- イオン交換クロマトグラフィーは、 Genopure Plasmid Midi Kit と Genopure Plasmid Maxi Kit で採用されています。
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- This page describes the maintenance of media and storage conditions for multimodal chromatography using Cytiva products.
- Ultra-high performance liquid chromatographic (UHPLC) separation of ephedrine and its three structural analogs based on polar retention effect on graphite (PREG) mechanism using Supel™ Carbon LC column.
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関連プロトコル
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- This page shows how to convert between linear flow and volumetric flow rates in affinity chromatography.
- The Amberlite™ XAD-4 resin used in Porozorb™ cartridges is a proven technology that is highly effective in removing various detergents from cell culture media for biopharmaceutical applications such as vaccine production.
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