ウェスタンブロッティング

ウェスタンブロッティングは、タンパク質の検出、分析、定量化を可能にする確立された分析手法です。この分析法は、組織ホモジネートや細胞溶解物などの複雑なサンプル中の特定のタンパク質分子を検出する目的で広く利用されています。ウェスタンブロッティングでは、通常、ゲル電気泳動によるタンパク質の分離と、それに続くポリフッ化ビニリデン（PVDF）またはニトロセルロースメンブレンへの転写が行われます。タンパク質を転写した後は、視覚化のために染色したり、N-末端配列解析、マススペクトル分析、免疫検出法により直接同定することができます。

ウェスタンブロッティング免疫検出では、タンパク質は特定の抗体への結合を通じて識別されます。通常は、一次抗体をHRPまたはAP結合二次抗体と組み合わせて使用して、適切な基質を用いた化学発光検出または比色検出を行います。または、蛍光標識された一次または二次抗体を使用して直接可視化することもできます。

ウェスタンブロッティングは、特定のタンパク質の存在の検出、翻訳後修飾の程度の判定、クローニング用途でのタンパク質発現の検証、抗体エピトープマッピングでのタンパク質とバイオマーカーの発現レベルの分析、臨床現場での疾病マーカーのテストなどの目的のために生化学の分野で広く使用されています。

より多くのタンパク質を限られたサンプルで同時に解析する必要があるため、ブロッティング手法の感度とスピードを改善するための継続的な研究が進められています。ダブルブロッティングは、非特異的な相互作用によって引き起こされる擬陽性を排除します。ファーウエスタンブロッティングでは、タンパク質間の特異的な相互作用を検出できます。サウスウエスタンブロッティングは、特定のDNA配列と相互作用するタンパク質を同定するために使用されます。マルチストリップブロッティングは、ブロット間のばらつきを最小化しながら、作業量を増加させます。また、シグナルの産生に必要なタンパク質の量を減らし、ウェスタンブロッティングの定量的検出力を向上させる新技術の開発も進められています。