CRISPR・shRNA・ZFN製品の概要とご注文方法

ヒト、マウス用CRISPR（ノックアウト、抑制、亢進）

• CRISPRn（ノックアウト）
• CRISPRi（抑制）
• CRISPRa SAM（亢進）

植物、大腸菌用CRISPRn

• 植物用
• 大腸菌用

CRISPRn（ノックアウト）

目的遺伝子をノックアウトするために必要なgRNA、Casタンパク質とライブラリー製品について紹介します。

Sanger gRNA

• 共同開発先のSanger研究所とSNP回避等を含むデザインとなっております¹。
• フォーマットは大腸菌グリセロールストック、プラスミドDNA、レンチウイルスの3種類からお選びいただけます。
• gRNAタイプになります。
• ベクターにはBFP、PiggyBac™ siteが搭載されております（ベクターマップ）。

詳しくはフライヤーをご覧ください。

MISSION™ gRNA

• 先行論文に基づいた弊社独自のアルゴリズムでデザインしております^2,3,4,5。
• フォーマットはプラスミドDNA、レンチウイルスと合成オリゴからお選びいただけます。
• 合成オリゴは現在国内販売を中止しております。
• gRNAもしくはCas9 + gRNA（All-in-one）の2タイプがございます。
• ベクターは様々なラインアップからお選びいただけます（ベクターマップ）。

詳しくはカタログをご覧ください。

参考論文

1. Metzakopian et al, Enhancing the genome editing toolbox: genome wide CRISPR arrayed libraries, Scientific Reports, 2017
2. Mali et al, RNA-guided human genome engineering via Cas9, Science, 2013
3. Doench et al., Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9, Nature biotech, 2016
4. Hsu et al., DNA targeting specificity of RNA-guided Cas9 nucleases, Nature biotech, 2013
5. Langmead et al., Ultrafast and memory-efficient alignment of short DNA sequences to the human genome. Genome Biology, 2009

Cas9 タンパク質

• 野生型Cas9以外にも、同等の活性を維持しつつ特異性を向上させたCas9 PlusとCas9 Plusよりさらに活性を高めたPURedit™ Cas9があります。

ヒト用CRISPR ノックアウト ライブラリー

• 製品選定や詳しいご説明をご希望の場合は、お問合わせフォームまでご連絡ください。
  専門スタッフが、お客様の研究目的や条件に最適なCRISPRライブラリーの選定をサポートいたします。
  スクリーニングの進め方など技術的なご相談も承っておりますので、ぜひお気軽にお問い合わせください。

マウス用CRISPR ノックアウト ライブラリー

植物用CRISPR

• All-in-oneタイプ（gRNA + Cas9）のプラスミドDNAになります。
• 単子葉植物または双子葉植物での発現に最適化されているベクターラインナップからお選びいただけます。
• デザインサイトでお選びいただいたgRNAまたはご希望のgRNAでのご注文が可能です。
• On-demand Webinar：Genome Editing Plants（英語）

大腸菌用CRISPR

• gRNAタイプのプラスミドDNAになります。Cas9については関連製品をご覧ください。
• ベクターはP10になります。
• デザインサイトでお選びいただいたgRNAまたはご希望のgRNAでのご注文が可能です。
• アプリケーションノート：Cas9-Mediated Recombineering Enhances Metabolic Production of Kdo2-Lipid A by E. coli

CRISPRi ツール

目的遺伝子の発現を抑制するために必要なgRNA、Casタンパク質とライブラリー製品について紹介します。
CRISPRiでは、Cas9に点変異を導入しヌクレアーゼ活性を欠失させたdCas9と、転写抑制因子であるKRABドメインを融合させたKRAB-dCas9を使用します。
gRNAによって目的遺伝子の転写開始地点近傍にリクルートされたKRAB-dCas9のKRABドメインが作用し、RNA ポリメラーゼをブロックすることで遺伝子発現を抑制します。

CRISPRi gRNA ベクター

• フォーマットはプラスミドDNAとレンチウイルスの2種類からお選びいただけます。
• ヒトgRNAのベクターはLV17になります。マウスgRNAのベクターはLV27になります。
• KRAB-dCas9については関連製品をご覧ください。

CRISPRa SAM（Synergistic Activation Mediator）

目的遺伝子の発現を亢進するために必要なgRNA、Casタンパク質とライブラリー製品について紹介します。
CRISPRaでは、dCas9にウイルス由来の転写活性化因子VP64を融合させたdCas9-VP64と、MS2-p65-HSF1活性化ドメインの2つの活性エフェクターを利用します。
gRNAにはMS2 RNAアプタマーが含まれているため、 アプタマーを介してリクルートされたMS2-p65-HSF1活性化ドメインが近傍のVP64と相乗的に遺伝子発現を亢進します。

CRISPRa SAM gRNAベクター

• フォーマットはプラスミドDNAとレンチウイルスの2種類からお選びいただけます。
• ヒト用とマウス用がございます。
• ベクターはLV06（Puromycin）またはLV07（Zeocin）になります。
• dCas9-VP64とMS2-P65-HSF1については関連製品をご覧ください。

• 製品情報・注文方法
• ノックダウン保証
• 関連製品
• プロトコールとベクターコレクション

MISSION™ shRNAによるRNAiツール

• MITとハーバード大学からなるブロード研究所を中心としたコンソーシアム（The RNAi Consortium, TRC）のアルゴリズムにより、デザインしています。
• シグマアルドリッチ独自で開発したクローンもご準備しております。
• フォーマットは大腸菌グリセロールストック、プラスミドDNA、レンチウイルスの3種類からお選びいただけます。
• ベクター変更やウイルス量など多彩なオプションをご用意しております。
• 5クローン以上のレンチウイルスを一度にご購入いただいた場合に限りノックダウン保証がございます。

詳しくは総合カタログをご覧ください。

プレデザイン クローン　通常納期・希望販売価格

• 5クローン以上のご購入で割引価格が適用されます。

オプション（ベクター変更・容量変更・ウイルス量変更）希望販売価格

• 1つのオプションにつき、通常納期が2週間ずつ加算されます。

ノックダウン保証

「保証の範囲」

• 同一遺伝子（同一 RefSeq）5 クローン中の 1 クローン以上が、mRNA レベルにおいて 70% 以上のノックダウンレベルを示すことを保証します。

「保証の条件（下記条件を全て満たした場合のみ適用）」

• 同一遺伝子についてレンチウイルスを 5クローン以上を一度にご購入いただいた場合（大腸菌、プラスミド DNAフォーマットは適用外）。
• 適切なコントロールにてノックダウンを検証済みの場合。
• 実験系で、ノックダウンが確認されなかった場合は、導入された shRNA が十分に発現していることを確認した場合。

「ノックダウンが確認されなかったら、下記、いずれかの方法で対応させていただきます」

• 別のクローンを 1 つ無償提供
• 別の製品によって、金額相当の無償提供
• 金額相当のご返金
• 弊社営業、またはテクニカルサービスまでご連絡ください。

「バリデートデータとは？」

• バリデートデータは、Broad Institute にて 50％以上のノックダウン効果を示したものを表示しております。
• これらのデータは、表示の手法、表示の細胞において検証されたノックダウンレベルとなります。
• お客様の実験系におけるノックダウンレベルを保証したものではありません。予めご了承ください。

プロトコールとベクターコレクション

• shRNA大腸菌グリセロールストックからプラスミドDNAの抽出方法
• shRNA レンチウイル粒子の調製方法
• shRNA レンチウイルスの感染方法
• 選択用抗生物質（ピューロマイシン）濃度の最適化方法
• レンチウイルス感染効率評価方法
• ベクターマップ

• 製品選定や詳しいご説明をご希望の場合は、お問合わせフォームまでご連絡ください。
  専門スタッフが、お客様の研究目的や条件に最適なライブラリーをご提案いたします。
  スクリーニングの進め方など技術的なご相談も承っておりますので、ぜひお気軽にお問い合わせください。
• 詳しくはカタログをご覧ください。

CompoZr™ Zinc Finger Nuclease (ZFN)

• カスタムでターゲット遺伝子に対するZFNを作成します。

カルタヘナ法対応について

レンチウイルスパーティクル（レンチウイルス粒子）およびバクテリアフォーマットの MISSION™ shRNA および CRISPR 製品は、「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性確保に関する法律」の使用規制対象となります。
詳しくは下記リンク先をご覧ください。

MISSION™ shRNA/CRISPR カルタヘナ法対応について