11684795910

In Situ細胞死検出キット、フルオレセイン

sufficient for ≤50 tests, suitable for detection

• 別名: フルオレセイン-12-UTPテトラリチウム塩, フルオレセイン-5（6）-カルボキサミドカプロイル-（5- [3-アミノアリル]ウリジン5′-三リン酸）
• UNSPSC Code: 12352200
• NACRES: NA.54

特性

• usage: sufficient for ≤50 tests
• manufacturer/tradename: Roche
• technique(s): flow cytometry: suitable
• application(s): detection
• storage temp.: −20°C

詳細

General description

DNA鎖切断による標識（TUNELテクノロジー）に基づく、単一細胞レベルでのアポトーシスの検出および定量用キット；蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーによる解析。

アポトーシスの検出において幅広く使用されている方法には、アガロースゲル電気泳動および³H-チミジンまたは5-ブロモ-2′-デオキシウリジンに基づくDNA断片アッセイによるゲノムDNAの分析が含まれます。これらの方法では、特定の細胞集団において、断片化していない高分子量DNAから、断片化した低分子量DNAを分離します。そのため、これらの方法は、特定の細胞集団または組織切片における個々の細胞の運命に関する情報を提供しません。あるいは、個々細胞は、核のクロマチン濃縮や断片化による特徴的な見た目から、顕微鏡によって区別できますが、この方法は主観的であり、形態学的な変化が最大の場合、タイムウィンドウが比較的狭く限られます。
アポトーシスの証明となるものは、初期段階におけるDNAの分解であり、これはヌクレオソーム間のDNAリンカー領域に選択的です。DNAの分解は、二重鎖および一重鎖（ニック）でのDNA切断物を与えます。両方のタイプの切断は、酵素反応によるフリー3′-OH末端の修飾ヌクレオチド（例、ビオチン-dUTP、DIG-dUTP、フルオレセイン-dUTP）による標識化によって検出できます。酵素末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（TdT）は、デオキシヌクレオチドの、一重および二重鎖DNAの3′末端への、テンプレート非依存的な重合化を触媒します。また、この方法は、TUNEL（TdT-mediated dUTP-X nick end labeling）と呼ばれています。また別の方法では、3′-OH基は、ニックトランスレーションと呼ばれるテンプレート依存的なメカニズムによって、DNAポリメラーゼを使用して標識化できます。しかし、TUNEL法が、より高感度で迅速であると考えられています。

Application

In Situ細胞死検出キットフルオレセインは、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーによる細胞や組織の定量的検出によって、単一細胞レベルでのアポトーシスを検出および定量するための、正確性、即時性、および簡易性を兼ね備えた非放射活性テクニックです。[1][2]そのため、In Situ細胞死検出キットは、多くの異なるアッセイシステムに使用できます。
例：

• 基礎研究における冷凍およびホルマリン固定組織切片中の、個々のアポトーシス細胞の検出[3][4][5]
• 癌研究における薬剤誘導アポトーシスのための悪性細胞の感受性の測定[6]
• 二重染色手法による不均一細胞集団中の細胞死を受ける細胞のタイピング[7]

Biochem/physiol Actions

TUNEL反応は、アポトーシス中に生成されるDNA鎖切断を特異的に標識します。これにより、ネクローシスおよび細胞分裂阻害剤または放射線によって起こる初期のDNA鎖切断から、アポトーシスを区別することができます。

Features and Benefits

• 高感度：フルオレセイン-dUTPを用いる直接標識により、バックグラウンドが低減されます
• 迅速：フルオレセイン-dUTPの使用により、TUNEL反応の後、サンプルを直接分析できます
• 簡便：二次的な検出システムが不要
• 正確：分子レベル（DNA 鎖切断）でアポトーシスを同定、およびアポトーシスの初期の段階で細胞を同定

Packaging

1つのキットには2のコンポーネントが含まれています。

Preparation Note

使用液：酵素溶液の全量（50 μL）を、残りの450 μLのラベル溶液に加え、500 μLのTUNEL反応混合物を得ます。
成分が均一になるまでよく混合します。

Other Notes

ライフサイエンス研究のみに使用できます。診断には使用できません。

キットの構成要素のみ

• Enzyme Solution (TdT)
• Label Solution (fluorescein-dUTP)

安全性情報

• pictograms: GHS08,GHS09
• signalword: Danger
• hcodes: H350i,H411
• pcodes: P201 - P273 - P280 - P308 + P313 - P391 - P501
• Hazard Classifications: Aquatic Chronic 2 - Carc. 1B Inhalation
• 保管分類: 6.1D - Non-combustible acute toxic Cat.3 / toxic hazardous materials or hazardous materials causing chronic effects
• wgk: WGK 3
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash