RPROTK-RO

プロテイナーゼK、組換え体、PCRグレード

Lyophilizate from Pichia pastoris

• EC Number: 3.4.23.1 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 12352204
• Specific activity: ~2 units/mg protein

特性

• form: lyophilized
• specific activity: ~2 units/mg protein
• packaging: pkg of 100 mg (03115879001), pkg of 25 mg (03115836001), pkg of 2 × 250 mg (03115801001), pkg of 4 × 250 mg (03115852001)
• manufacturer/tradename: Roche
• pH range: 4.0-12.5
• storage temp.: 2-8°C

詳細

General description

クロモザイムアッセイで測定した場合、凍結乾燥物 1 mgあたり約 2.0 U（タンパク質 1 mg あたり 2.5 U）（ヘモグロビンアッセイでは凍結乾燥物 1mg あたり 24 U ［タンパク質 1mg あたり30 U］に相当）。

プロテイナーゼＫは、ブチリシン関連セリンプロテアーゼです。[1]本組換え酵素は、もともとカビTritirachium albumから単離された天然プロテアーゼと同じです。組換え酵素の仕様は、天然プロテアーゼの仕様と同じです。アミノ酸配列（分子量）と分子構造は同じです。しかし、組換え製剤は、DNAが含まれず、顕著な切断特異性を示さないため、天然の酵素よりもはるかに純粋です。この酵素は天然のタンパク質に対して非常に効果的であるため、RNaseおよびDNaseのような内因性ヌクレアーゼを迅速に不活性化させることに使用できます。本酵素は溶液としても利用できます。

• 阻害剤：本酵素は、Pefabloc ^®SC（ペファブロック）により不活性化されます。しかし、これは金属イオン、キレート剤（例：EDTA）、スルフヒドリル試薬、またはトリプシンおよびキモトリプシン阻害剤により不活性化されません。
• 活性化剤：プロテイナーゼＫ活性は、変性剤（SDSおよび尿素）の存在により刺激されます。
• 至適pH：プロテイナーゼKは、広いpH範囲（4～12.5）にわたって安定です。本酵素は、pH 6.5～9.5でインキュベートする場合、完全な活性を数時間維持します。
• 容量活性：

約2.5 U/mgの凍結乾燥物（クロモザイムアッセイ）
約30 U/mgの凍結乾燥物（ヘモグロビンアッセイ）

注：SDSは、プロテイナーゼＫの活性を7倍も増加させることができます。

Application

プロテイナーゼＫは、知られている最も活性の高いエンドペプチダーゼのひとつです。このPCRグレードプロテイナーゼKは、増幅反応のための核酸の単離に特に適しています。:

• 本酵素は天然タンパク質に対して非常に効果的であるため、核酸単離時にRNaseおよびDNaseなどの内因性ヌクレアーゼを迅速に不活性化することに使用できます。この特性により、プロテイナーゼＫは、組織や細胞株からの天然のRNAおよびDNAの単離に特に適しています。[2][3]
• 本酵素は、細菌の自己融解因子を活性化することにより細胞溶解を促進します。
• プロテイナーゼＫは、細胞表面上のタンパク質および糖タンパク質を修飾することにより膜構造の分析に使用されます。
• 本酵素は、RNaseおよびDNaseが存在しないことを検査で確認しており、実質的にDNAが含まれないため、PCRおよびRT-PCRテンプレートの単離に特に適しています。
• プロテイナーゼKはコロニーリフトの調製時に細胞の破片を除去することや、in situハイブリダイゼーション時に効率的なプローブ浸潤を確保するために組織切片を処理することに使用できます。

Biochem/physiol Actions

プロテイナーゼＫは、知られている最も活性なエンドペプチダーゼの1つであり、顕著な切断特異性を示しません。プロテイナーゼKは、以下のようにタンパク質を切断します：X-↓-Y, X = 脂肪族、芳香族、または疎水性アミノ酸、Y = 任意のアミノ酸。本酵素は、大過剰でかつ長いインキュベーション期間にわたって使用すると、タンパク質材料を遊離アミノ酸に分解することがあります。

Features and Benefits

プロテイナーゼＫは、顕著な切断特異性を示さないセリンプロテアーゼです。これは、アミノ酸XとYの間のタンパク質を切断します（X-↓-Y）、X = 脂肪族、芳香族、または疎水性アミノ酸、Y = 任意のアミノ酸。この酵素は天然のタンパク質に対して非常に効果的であるため、RNaseおよびDNaseのような内因性ヌクレアーゼを迅速に不活性化させることに使用できます。

• テンプレート調製に効果的なツールを選択してください。ほとんどの種のDNaseとRNaseを不活性化します。
• 一貫した品質とパフォーマンスを信頼してください。厳格な品質試験により、最適な安定性とハイレベルのロット間パフォーマンスを確保します。
• 幅広い条件でサンプルを調製してください。頑健な酵素は広いpH範囲で安定しているため、多様な用途に理想的です。
• さらに、酵素は汚染されていなので、ベネフィットが得られます。本酵素は、RNaseとDNaseが存在しないことを検査で確認され、実質的にDNAは含まれません。PCRテンプレートの分離に特に適しています。

注：本酵素は、長いインキュベーション期間にわたって大過剰に存在する場合、タンパク質を遊離アミノ酸に還元することがあります。

内容物
凍結乾燥PCRグレードのプロテイナーゼKも、溶液で利用できます。

Preparation Note

活性化剤：プロテイナーゼK活性を促進させるために、変性剤（SDSと尿素）を添加します。例えば、SDSは、プロテイナーゼＫの活性を、SDSの非存在下で示される活性と比べて７倍も増加させることができます。
ワーキング溶液：最良の結果を得るためには、組換え体でPCRグレードのプロテイナーゼKを再蒸留水またはトリス緩衝液に溶解してください。プロテイナーゼKに最適な緩衝液は、用途ごとに変わります。必ず、パラメータフィールドのpHと温度のガイドラインに従ってください。一般に、プロテイナーゼKは、尿素、ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）、およびグアニジニウム塩などの変性剤が含有された緩衝液中で安定で非常に活性があります。
保存条件（ワーキング溶液）：-15～-25℃

再蒸留水で少なくとも20 mg/mLまでの復元調製

Analysis Note

現在の品質管理手順に従い、この製剤にはRNase、DNase、およびDNAは含まれていません。

• ヌクレアーゼ不含：各ロットは、様々な基質で検査され、エンドヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼおよびニッキング活性がないことを確認します。
• DNA含量：=10 pg/mg 酵素（閾値により測定）
• バイオバーデン：<125 cfu/g（生存可能な好気性細菌、酵母、および真菌の総数を特定する欧州薬局方の最も厳密な検査により測定）

Other Notes

ライフサイエンス研究専用です。診断的処置に使用しないでください。
凍結乾燥PCRグレードプロテイナーゼKも、溶液で利用できます。

Legal Information

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm

安全性情報

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• 保管分類: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash
• hcodes: H315,H317,H319,H334,H335