タンパク質電気泳動法用ゲル染色剤

電気泳動により分離した後のタンパク質バンドは、通常、ゲル染色剤で可視化できます。色素結合または発色のいずれかの化学反応を利用するタンパク質ゲル染色剤は、タンパク質と選択的に反応して染色ゲルを生成します。タンパク質ゲル染色剤は、一般に、初期のサンプル数、望ましい検出法、下流の分析との適合性要件に基づいて選択されます。




固定液

ゲル電気泳動後のタンパク質は、一般に、染色前のタンパク質の分散を防ぐためにゲル内に「固定」されます。ゲル染色剤の中には、染色の前のゲル固定を不要にする化学薬品を含むものもあります。

比色タンパク質ゲル染色剤

  • クマシーブリリアントブルーは、タンパク質アミノ基とカルボキシル基との静電相互作用によってポリアクリルアミドゲル上のタンパク質を染色するために使用されます。
  • ReadyBlue®タンパク質ゲル染色剤は、ポリアクリルアミドゲル用の迅速かつ高感度なコロイド状クマシー染色剤です。調製不要ですぐに使用できる製品なので、迅速かつ簡素化されたプロトコルを可能にします。ReadyBlue® は、比色法またはIR蛍光法で画像化できます。 有機溶媒やリン酸を含まない、この安全な製剤は3回まで再使用できます。ReadyBlue® の最低感度は、バンドあたり2 ngであることが示されています。
  • InstantBlue™タンパク質染色剤は、タンパク質を迅速・高感度・安全に検出できるように特別に調製された、すぐに使用できる染色剤溶液です。InstantBlue™を使用すれば、数分でタンパク質ゲルを染色でき、洗浄、固定および脱染は必要ありません。InstantBlue™製剤は非毒性で、メタノールを一切含みません。
  • EZBlue™ゲル染色試薬は、利便性、感度および安全性に優れたクマシーブリリアントブルーG-250コロイド状タンパク質染色剤で、タンパク質電気泳動の結果を改善しながら、染色時間を大幅に短縮します。コロイド状染色剤のため、タンパク質のみと反応し、ゲル自体とは反応しません。バックグラウンド染色が少ないため、ポリアクリルアミドゲルおよびPVDFメンブレン上でほとんど瞬時にタンパク質バンドを可視化できます。水洗浄によりバンドを増強させバックグラウンドをきれいにするおそれがありますが、脱染のステップは不要です。EZBlue™試薬は極めて高感度で、わずか5 ngのタンパク質を検出します。
  • 可逆性タンパク質検出キットは、ナイロン製、ニトロセルロース製、PVDFのメンブレン上、またはPAGEゲル上のタンパク質を染色するために設計された独自の検出システムで、検出感度はクマシー染色剤と同等です。他のほとんどの染色剤は、メンブレンとの強い電荷相互作用によってナイロン製メンブレン上に高いバックグラウンドを生成します。EDTA溶液を用いると染色はすぐに可逆変化を起こすため、ブロットをウェスタンブロッティングやアミノ酸配列分析に再使用できます。
  • ナフトールブルーブラック色素は、ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲルおよびニトロセルロースメンブレン上でタンパク質を染色するために使用できます。電気泳動後は、ゲル内にタンパク質を固定することが推奨されます。その後ゲルは、7%(v/v)酢酸中の0.1%ナフトールブルーブラックで少なくとも2時間染色されてから、7%(v/v)酢酸溶液で脱染されます。検出感度は、クマシーブルーの約20%です。
  • 最高感度をもたらすProteoSilver™ Silver染色キットのバンドあたりのタンパク質感度は0.1 ng以上で、インキュベーション時間は3~12分です。この染色剤は、ごく微量のタンパク質用として推奨され、MALDI-TOFアプリケーションに適合します。

蛍光タンパク質ゲル染色剤

  • EZFluor™ワンステップ蛍光タンパク質ゲル染色剤はすぐに使える染色剤であり、5~30分の染色ステップ1回だけで済み、固定が不要で、バンドあたり約1~10 ngのわずかなタンパク質を検出できます。染色は、質量分析やエドマン法を用いたシーケンシングに完全適合します。
  • EZFluor™ UVワンステップ蛍光タンパク質ゲル染色剤は、UVトランスイルミネーターとエチジウムブロマイドフィルターを使用して画像化するために設計された、すぐに使えるタンパク質ゲル染色剤で、質量分析に適合します。
  • SYPRO® Rubyタンパク質ゲル染色剤は、すぐに使える超高感度の蛍光染色剤で、ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAGE)によって分離されたタンパク質の検出に適しています。特に2-D PAGEで使用するために設計されたこの染色剤は、1-D PAGEや等電点電気泳動法(IEF)ゲルに対しても優れた選択肢であることが実証されています。SYPRO® Rubyタンパク質ゲル染色剤で得られる感度は、多くの銀染色法と同等です。
  • SYPRO® OrangeはSYPRO® Redに類似していますが、やや明るく、わずかに高いバックグラウンド蛍光を示します。色素は、UVまたは広帯域照射により効率的に励起されます。ブロットやIEFゲルでのタンパク質染色には適しておらず、2-Dゲルでタンパク質を染色すると感度が低下します。

脱染試薬

  • CoZapは、クマシーブルー染色剤を迅速に除去するために使用されます。独自のCoZapパッドが脱染トレイに直接配置され、溶液中の遊離色素をすべて吸収するため、脱染溶液の交換は必要ありません。