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FLAG®精製

ラボ内のクローズアップ。主な焦点は、ピンク色の液体で部分的に満たされた小さなガラス製容器に液体1滴を分注している青色のピペットである。背景はぼやけているが、さまざまな他のラボ器具や容器があることがわかる。

FLAG®タグは、遺伝子組換え融合タンパク質の優れた検出や安定した精製を可能にし、結合や活性の測定から構造解析に至るまで多くの下流アプリケーションでの利用が実証されています。FLAG®エピトープタグは、短い親水性の8アミノ酸ペプチド（DYKDDDDKタグ）で、エンテロキナーゼ（EK）によってすぐに切断できます。親水性でサイズが小さい性質から、FLAG®タグは一般に融合タンパク質の表面上に存在し、融合タンパク質の機能、分泌、輸送への影響を最小限に抑えます。私たちは、ご使用の最終アプリケーションを問わず、FLAG® 融合タンパク質の発現、精製および検出に必要なツールを取り揃えています。 

セクションの概要

黄色の背景に相互に結合した紫色の円や線のパターンが描かれたグラフィック。このデザインは単純化された分子構造やネットワーク図に似ており、相互接続性や関係といったテーマが示唆されている。

FLAG®タグタンパク質発現

FLAG®タグタンパク質発現ポートフォリオには、細菌系および哺乳類系で遺伝子組換え融合タンパク質の優れた発現をもたらすベクターが含まれています。SnapFast™ベクター技術を用いると、ターゲットの遺伝子をあるベクターから別のベクターへ簡単に移動でき、より有効で費用効率の高いクローニングが得られます。

  • 標準のFLAG®ペプチド（配列：DYKDDDDK）は、立体障害のおそれや、タンパク質溶解性への悪影響のリスクを最小限に抑えて導入できる小型のタグです。
  • 3xFLAG™のタグ配列は、3つのタンデムFLAG®エピトープを融合して融合タンパク質の検出を強化します（最大で200倍）。
鮮やかな黄色の背景の中央に、角が丸い紫色の正方形。正方形の内部には、対称的なデザインの3本の水平な矢印が描かれている：上部の矢印は左から右に向かい、中央の矢印は中心から両側に向かい、下部の矢印は上部の矢印と反対の向きになっている。上部から下部の矢印まで、対称点を通って縦の線が走っている。これらの矢印の周りには、円形やダイヤモンド形または菱形の幾何学的な形状の図形が散らばっている。

FLAG®  タグタンパク質精製

私たちは、FLAG®タグ付タンパク質の単離・精製のための、さまざまなアガロースアフィニティー精製ゲル、磁気ビーズ、精製キットおよびコーティングプレートを取り揃えています。

  • アガロースアフィニティーゲル は、アガロースビーズに架橋した抗 FLAG®  抗体による融合タグ付タンパク質精製を可能にし、小～大規模精製に適しています。これらのレジンは、自然落下カラムによる精製に向いています。
  • Anti-FLAG® M2 磁気ビーズ は、磁気ラックまたはプラットフォームによって遺伝子組換え融合タグ付タンパク質を精製することで、ビーズの分離およびタンパク質の単離を迅速に処理するために使用されます。
  • Anti-FLAG®  高感度 M2 コーティング 96 ウェルプレート は、発現スクリーニング、タンパク質間相互作用の研究および ELISA アッセイに適しています。
黄色を背景として、紫色の線の描画。「K」の文字の抽象的表現のように見える。デザインはすっきりとした線で構成された単純なもので、追加の装飾や色調はない。

FLAG®タグ検出

FLAG®  および 3xFLAG™  タグは、高度に特異的な Anti-FLAG®  モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、複合体のための結合部位を有し、ELISA、ブロッティングアプリケーション、免疫蛍光、免疫細胞、免疫組織染色（IHC）、ブロッティングおよびフローサイトメトリーに有用です。

  •  M2 Anti-FLAG®  抗体 は、N-末端 FLAG®、C-末端 FLAG®、Met-FLAG®  の融合タンパク質と結合します。
  •  M1 Anti-FLAG®  抗体 結合は、カルシウム依存性およびFLAG®  タグのN-末端に対する特異性を示します。
  •  M5 Anti-FLAG®  抗体 は、N-末端 FLAG® 、Met-FLAG®  の融合タンパク質と結合します。
 マウスで産生されたモノクローナル抗 FLAG® M1 抗体マウスで産生されたモノクローナル抗 FLAG® M2
抗体		マウスで産生されたモノクローナル抗 FLAG® M5 抗体
カタログ番号F3040F1804F3165F4042
クローンM1M2M2M5
フォーム緩衝水溶液緩衝グリセリン水溶液（アジ化ナトリウム不含有）緩衝水溶液（アジ化ナトリウム含有）緩衝水溶液
免疫原配列DYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDKDYKDDDDK
抗体精製法Protein Aセファロースで精製独自の FLAG®  ペプチド-アガロースで精製Protein Aセファロースで精製Protein Aセファロースで精製
KD53.4 nM9.3 nM9.3 nM入手不可
特異性高特異性。遊離 N-末端に配置されると FLAG®  エピトープのみを認識。N-末端、Met-N-末端、
C-末端、または FLAG®  融合タンパク質のあらゆる内部部位で、FLAG®  配列を認識。		Met-N FLAG®  融合タンパク質を強く認識。N-またはC-末端融合タンパク質と弱く結合。
感度1 ngのFLAG-BAP™融合タンパク質をドットブロットで検出2 ngのタンパク質をドットブロットで検出1 ng 未満の Met-FLAG®  融合タンパク質をドットブロットで検出
推奨用途：哺乳動物・植物・細菌の発現系での FLAG®  融合タンパク質の検出に推奨。アフィニティー精製に極めて有用。細胞質発現タンパク質の検出には推奨しない。 E. coli、
植物または哺乳動物の
未精製細胞溶解液で発現した標的タンパク質のウェスタンブロット検出。		哺乳動物・ショウジョウバエ細胞溶解液で発現した標的タンパク質のウェスタンブロット検出。特に、細胞質発現Met-FLAG融合タンパク質の検出に有用。 E. coli で発現した融合タンパク質の検出には推奨しない。
アプリケーション*IP、IC、WB、EIAIP、IC、WB、EIAIP、IC、WB、EIAWB
特殊な要求事項結合にはカルシウムが必要（カルシウムイオン非存在下では複合体が解離する）該当なし該当なし該当なし
*IP=免疫沈降、IC=免疫染色、WB=ウェスタンブロット、EIA=酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）

抗体・結合特性

Anti-FLAG® M1

マウス
IgG2b MAb

Anti-FLAG® M2

マウス
IgG1 MAb

Anti-FLAG®
M5

マウス
IgG1 MAb

未処理のN-末端FLAG®融合タンパク質：
シグナルペプチド－FLAG®－タンパク質		-+測定されず
Met-N-末端FLAG®融合タンパク質：
Met－FLAG®－タンパク質		-+++
N-末端FLAG®融合タンパク質：
FLAG®－タンパク質		++弱い
内部FLAG®ペプチド：
タンパク質－FLAG®－タンパク質		-+測定されず
C-末端FLAG®融合タンパク質：
タンパク質－FLAG®		-+弱い
カルシウム依存性結合
（複合体はEDTA含有バッファー中で解離する）		+--

関連資料

  • Brochure: Refine Protein Preparation

    Today, researchers are challenged to create high quality samples for meaningful protein analysis, often using cumbersome traditional sample preparation methods. With over 50 years of experience in developing protein sample preparation technologies, Merck is constantly innovating new tools to offer you rapid and efficient solutions that can be smoothly integrated into your workflow.

  • User Guide: FLAG - Proven System for Detection and Purification of Proteins

    The FLAG Expression System is an established way to express, purify, and detect recombinant fusion proteins. FLAG and 3×FLAG® have proven utility in numerous applications such as Western blotting, immunocytochemistry, immunoprecipitation, flow cytometry, protein purification, and in the study of protein-protein interactions, cell ultrastructure, and protein localization. These small hydrophilic tags facilitate superior detection and purification of recombinant fusion proteins when using our highly specific and sensitive ANTI-FLAG® antibodies.

  • Application Note: EZview™ Red Protein A and ANTI-FLAG® M2 Affinity Gels - Immunoprecipitation with Enhanced Visibility Affinity Beads

    The strength and specificity of interactions between biomolecules have been exploited for years in biochemical research. Affinity-based protein purification techniques have been used extensively to isolate and purify specific proteins or classes of proteins from complex biochemical mixtures, such as cell lysates..

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