BIOshell™ Glycan HPLCカラム
タンパク質のグリコシル化は、最も一般的で構造的に多様なタイプのタンパク質翻訳後修飾（PTM）の1つです。グリコシル化の特定のパターンとPTMの位置は細胞発達、免疫、血液凝固、アポトーシスといった多くの生理的反応と病理的反応で大きな役割を果たすことが示されています。そのため、タンパク質のグリコシル化を理解することは糖タンパク質の細胞機能を解明する上で不可欠です。
しかし、糖タンパク質分析は構造的に極めて類似したものが多く、複雑にN-およびO-結合した糖分子の同定を伴うために困難です。親水性相互作用液体クロマトグラフィー（HILIC）は、蛍光標識による誘導体化後に単離したグリカンの分離と定量に実績がある技法です。
BIOshell™ Glycan HPLCカラムは、HILICクロマトグラフィーを使用して、高い分離能で再現性のあるグリカン分析向けカラムです。Fused-Core BIOshell™ Glycan HPLCカラムを糖タンパク質分析に使用する利点は以下の通りです。
- 分離能の向上、分離の迅速化、背圧の低下：Fused-Core粒子技術に基づくBIOshell™ HPLCカラムは、全多孔性粒子ベースのカラムを上回る性能上の利点をもたらす。
- 優れた再現性：保持時間とピーク幅の厳格な仕様により、ロット間再現性を確保する。
- 補完製品：糖タンパク質分析の各ステップ（遊離、標識化、クリーンアップ、および分析）に必要な、表1に示すすべての試薬と消耗品を取り揃えている。
BIOshell™ Glycan HPLCカラムを使用したアプリケーション
図1：プロカインアミドで標識したデキストランラダーの分離
デキストランラダーは、蛍光標識後の順相クロマトグラフィーでグリカンを分析するための外部標準として使用される。この標準物質をBIOshell™ Glycan HPLCカラムで分析すると、単糖のグルコースから約20量体のグルコースオリゴ糖まで、特徴的なラダープロファイルが得られる。このラダーは、より複雑なグリカンを保持特性に基づいて同定する助けになるキャリブレーション参照点を与える。
図2：プロカインアミドで標識したヒトIgGグリカンの分離
ヒトIgGグリカンの試料をBIOshell™ Glycan HPLCカラムで分析した結果、20個の明確なピークが同定できた。クロマトグラムには優れた分離と対称なピーク形状が見られる。
図3：プロカインアミドで標識したセツキシマブグリカンの分離
セツキシマブは上皮成長因子受容体に対するキメラマウス-ヒトIgG1モノクローナル抗体であり、頭部がん、頸部がん、および大腸がんの治療に使用される。この抗体はFc領域とFab領域の両方でN-グリコシル化され、医薬品の安全性と品質に影響を与えることが示されている。したがって、グリコシル化のパターンを理解することが重要である。本アプリケーションに示すように、BIOshell™ Glycanカラムは高分子創薬における複雑なグリコシル化を解明できるため、医薬品の効能理解を深めることができる。
| 製品内容 | 製品番号 |
|---|---|
| ステップ1：グリカン放出
| |
| ヒト血清からのIgG | I4506 |
| トリズマHCl | T5941 |
| 尿素 | U0631 |
| 重炭酸アンモニウム | 09830 |
| PNGase F | P7367 |
| 30k遠心分離フィルターユニット | MRCF0R030 |
| ステップ2：ラベリング
| |
| シアノ水素化ホウ素ナトリウム | 156159 |
| プロカインアミド塩酸塩 | P9391 |
| ジメチルスルホキシド | D8418 |
| 酢酸 | 320099 |
| クロマトグラフィー用の水（LC-MSグレード）LiChrosolv™ | 1.15333 |
| デキストラン加水分解物 | 31417 |
| ステップ3：クリーンアップ
| |
| アセトニトリル | 34851 |
| Discovery Glycan SPE 50 mgカートリッジ | 55465-U |
| ステップ4：UPLC-FLR-MS分析
| |
| BIOshell™ Glycan、15 cm × 2.1 mm、2.7 µm | 50994-U |
| ぎ酸アンモニウム | 17843 |
| ぎ酸 | 94318 |
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