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Merck
ホーム定量PCR（qPCR）両末端標識プローブ

両末端標識プローブ

両末端標識プローブは、qPCRにおいて最も一般的なプローブで、加水分解プローブとも呼ばれます。

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両末端標識プローブの用途

  • マイクロアレイバリデーション
  • 標的遺伝子・低コピー数ターゲットの検出
  • 病原体の検出
  • マルチプレックス
  • ウイルス量の定量化
  • 遺伝子発現解析
  • 遺伝子コピー数の決定

MISSION® siRNAおよびshRNAによるノックダウンのバリデーションに最適です。

両末端標識プローブを使用する利点

  • シーケンス特異性の設計が簡単に
  • レポーター／クエンチャーの組み合わせが豊富
  • 感度向上

Locked Nucleic Acid（LNA）／MGB:EDOの挿入

BHQ™と併せたLNCの利点

  • 熱安定性とハイブリダイゼーション特異性の向上
  • SNP検出、対立遺伝子識別、 in vitro 定量／検出における精度向上
  • 困難なターゲットシーケンスでも、より簡単で感度の高いプローブを設計可能 
  • 天然で蛍光を発しないため（光ではなく熱を放射）、バックグラウンドを低下
  • SN比が高く、感度が高い
  • マルチプレックスのための多くのレポーターを選択可能

MGB:EDQの利点

  • プローブと標的のハイブリダイゼーションの特異性が向上して、非特異的結合の可能性を低下
  • 感度が高いため短いプローブの使用が可能になり、qPCRアッセイの感度を向上
  • 融解温度調整によりプローブのTm調整が可能になり、最適なTm値を持つqPCRプローブの設計に有益
  • バックグラウンドシグナルの低減は、バックグラウンド蛍光の低減に貢献し、シグナル・ノイズ比（S:N）が改善
  • 安定性の向上により、プローブ・標的ハイブリッドの安定性が高まり、プローブ分解の可能性が低下
  • デザインの柔軟性によりプローブデザインの選択肢が拡大し、効率的なqPCRアッセイの作成を促進
  • ミスマッチの識別によるSNP検出の強化

両末端標識プローブのメカニズム

両末端標識プローブは、2種類の色素で標識した一本鎖オリゴヌクレオチドです。レポーター色素は5'末端、クエンチャー分子は3'末端に位置します。クエンチャー分子は、蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）によってレポーターの蛍光発光を阻害します。その仕組みを下に図示します。 

両末端標識プローブのメカニズム

ポリメラーゼによってプライマーが伸長し、特異的なDNA鋳型に結合します。加水分解によってプローブ／標的のハイブリッドからレポーターが放出され、蛍光が増強します。測定された蛍光シグナルは、標的DNAの量に正比例します。

両末端標識プローブの特長

  • 保証収量：1、3、5、10 OD
  • 精製：HPLC
  • 鎖長：15～40塩基
  • 品質管理：100%質量分析
  • 納品形態：遮光チューブ入り乾燥品
  • 納品形態のカスタマイズが可能（濃度調整、特殊プレートなど）

メルクのプローブは、実験を簡素化する納品形態でお届けします。

保証収量

保証収量（
OD ）		概量 
（nmol） 		概量 
（µg） 		 反応数
（概算） *
1432800
312962,400
5201604,000
10403208,000
*1ODで4 nmolまたは32 µg、25 µL反応で200 nM（5.0 pmol／反応）を基準に算出しています。平均鎖長25塩基を基準に算出しています。なお、日本では1.5 ODにて提供しています。
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スペクトル特性表

色素最大
励起 （nm）		最大
発光 （nm）		対応
クエンチャー
6-FAM™495520BHQ™-1、TAMRA™、MGB:EDQ
JOE™529555BHQ®-1、TAMRA™
TET™521536BHQ™-1、TAMRA™、MGB:EDQ
Cal Fluor® Gold 5401522544BHQ®-1
HEX™2535556BHQ™-1、TAMRA™、MGB:EDQ
Cal Fluor®Orange 5602 538
559BHQ®-1
TAMRA™557583BHQ®-2
Cyanine 3549566BHQ®-2
Quasar® 5703548566BHQ®-2
Cal Fluor® Red 5904569591BHQ®-2
ROX™586610BHQ®-2
TxRd (Sulforhodamine 101-X)597616BHQ®-2
Cyanine 5646669BHQ®-3
Quasar® 6705647670BHQ®-3
Cyanine 5.5675694BHQ®-3

1JOE/TETの代替
2VIC® の代替
3Cyanine 3 の代替
4TAMRA™ の代替
5Cyanine 5 の代替

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出荷予定

保証収量（OD）13510
標準色素による両末端標識プローブ9営業日～9営業日～9営業日～9営業日～
標準色素による両末端標識Locked Nucleic Acid™プローブ14営業日～14営業日～14営業日～14営業日～
6’-FAM™、HEX™、またはTET™ による両末端MGB:EDQプローブ（その他の色素についてはお問い合わせください）該当なし10～12営業日10～12営業日10～12営業日
合成後色素修飾した両末端標識プローブ
（LNA®あり／なし）
14営業日～7～10営業日7～10営業日16営業日～
*納品は国際輸送、通関の遅れなどの理由により遅れる場合があります。大規模プロジェクトは、プロジェクトのニーズに基づいて納品スケジュールに組み込まれます。
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