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Benzonase®ヌクレアーゼのQ&A

Benzonase®ヌクレアーゼはどの種類の核酸に作用しますか? RNAの単離に使用できますか?

Benzonase®ヌクレアーゼはあらゆる形態のDNAとRNA(一本鎖、二本鎖、線状および環状)に作用し分解する非選択性エンドヌクレアーゼです。

Benzonase®ヌクレアーゼの使用目的は何ですか?

用途としては、サンプルの粘性低減(例えば、組換えタンパク質の精製、哺乳動物の細胞溶解物を使用する粘性に弱いアプリケーションなど)、保存された末梢血単核細胞(PBMC)の凝集低減、タンパク質再生を行うための封入体の調製、および2次元電気泳動用サンプルから負に帯電した核酸の除去などがあります。

どうすればBenzonase®ヌクレアーゼを不活化できますか? どうすれば除去できますか?

EDTAを使用して必須金属イオンをキレートすれば可逆的な阻害が可能です。不可逆的失活は、極端な条件(70℃の100 mM NaOHに30分間)でなければ達成できません。クロマトグラフィーを使用すれば、Benzonase®を目的産物から分離できます。ただし、本エンドヌクレアーゼは丈夫であることから、ヌクレアーゼを含まない最終産物が求められる場合、Benzonase®の使用は推奨しません。

Benzonase®ヌクレアーゼを実験台に出したままにしています。問題はありませんか?

メルクはBenzonase®ヌクレアーゼに広範囲の安定性試験を実施し、きわめて安定的であることを確認しています。37℃で長期培養しても、Benzonase®ヌクレアーゼは90%を超える活性を数か月間維持します。

別のバッファーを使用しようと考えています。Benzonase®ヌクレアーゼの活性を十分に得るためには、どのような条件が絶対に必要ですか? 活性を低下させるものは何ですか?

Benzonase®ヌクレアーゼの活性には、1~2 mMのMg2+が必要です。50%濃度を超える1価の陽イオン、20 mM濃度を超えるリン酸、および25 mM濃度を超える硫酸アンモニウムによってBenzonase®の活性は約50%阻害されます。

Benzonase®ヌクレアーゼはプロテアーゼ阻害剤カクテルに適合しますか?

はい。ただし、多くのプロテアーゼ阻害剤カクテルにはEDTAが含まれているため注意を要します。1 mM濃度を超えるEDTAは、Benzonase®の活性を阻害します。

目的タンパク質が不溶性のため、変性条件下で精製を行う必要があります。Benzonase®ヌクレアーゼは尿素中でも作用しますか?

尿素濃度が6 MまでであればBenzonase®ヌクレアーゼ活性は増加します。6 M尿素では、酵素活性は最初は増加しますが、時間が経つにつれて減少します。7 M尿素では、15分後にBenzonase®ヌクレアーゼは変性し、活性は失われます。しかし、失活する前にかなりの核酸が分解されます。Benzonase®ヌクレアーゼの使用濃度を高くすることで、7 M尿素の影響を一部補うことができます。

さまざまなBenzonase®ヌクレアーゼが用意されているのはなぜですか? HCの意味は何ですか? 純度90%と99%の2種類の製品が用意されている理由は?

できる限り幅広い処理条件やコスト要件に合うように、2種類の異なる純度グレードのBenzonase®ヌクレアーゼを用意しています。(純度グレードI(99%超)、純度グレードII(90%超))いずれのグレードも、25 U/μLと高濃度(HC)の250 U/μLがあります。大量購入については、テクニカルサービスにご相談ください。

Benzonase®ヌクレアーゼによる核酸分解が完全に進むと最終的にどうなりますか?

Benzonase®ヌクレアーゼは、末端が5'-モノリン酸で長さが2~5塩基のオリゴヌクレオチドにまで核酸を徹底的に分解します。

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