단백질 전기영동 젤 염색
전기영동으로 분리한 후 단백질 밴드는 일반적으로 겔 염색으로 시각화됩니다. 단백질 겔 염색은 염료 결합 또는 색상 생성 화학 반응을 활용하여 단백질과 선택적으로 반응하여 염색된 겔을 생성합니다. 단백질 겔 염색은 일반적으로 초기 샘플 크기, 원하는 검출 방법 및 다운스트림 분석을 위한 호환성 요구 사항에 따라 선택됩니다.
제품
고정 솔루션
젤 전기영동 후 단백질은 일반적으로 염색 전에 단백질의 분산을 방지하기 위해 젤에 '고정'됩니다. 특정 젤 염색에는 염색 전에 젤을 고정할 필요가 없는 화학 물질이 포함되어 있습니다.
비색 단백질 젤 염색
- Coomassie Brilliant Blue는 단백질 아미노 및 카르복실 그룹과의 정전기 상호작용을 통해 폴리 아크릴아미드 젤의 단백질을 염색하는 데 사용됩니다.
- ReadyBlue™ 단백질 젤 염색은 즉시 사용 가능한 솔루션으로 제공되는 폴리아크릴아미드 젤용 빠르고 민감한 콜로이드성 쿠매시 염색으로, 보다 빠르고 간소화된 프로토콜을 가능하게 합니다. 이 안전한 제형에는 유기 용매나 인산이 포함되어 있지 않으며 최대 3회까지 재사용할 수 있습니다. 밴드당 2ng까지의 감도는 ReadyBlue™로 입증되었습니다.
- EZBlue™ 젤 염색 시약은 편리하고 민감하며 안전한 쿠마시 브릴리언트 블루 G-250 콜로이드 단백질 염색으로 단백질 전기영동 결과를 개선하는 동시에 염색 시간을 크게 줄여줍니다. 콜로이드성 염색으로서 젤 자체가 아닌 단백질과만 반응합니다. 배경 염색이 감소하므로 폴리크릴아미드 겔과 PVDF 멤브레인에서 단백질 밴드를 거의 즉시 시각화할 수 있습니다. 물 세척으로 밴드가 강해지고 배경이 선명해질 수 있지만 탈염 단계가 필요하지 않습니다. EZBlue™ 시약은 매우 민감하여 최소 5ng의 단백질을 검출합니다.
- 양면 단백질 검출 키트는 나일론, 니트로셀룰로스, PVDF 멤브레인 또는 PAGE 젤의 단백질 염색을 위해 설계된 독특한 검출 시스템으로 쿠마시 염색과 유사한 검출 감도를 가지고 있습니다. 대부분의 다른 염색은 멤브레인과의 강한 전하 상호 작용으로 인해 나일론 멤브레인에서 높은 배경을 생성합니다. 염색은 EDTA 용액으로 쉽게 되돌릴 수 있으므로 웨스턴 블롯팅이나 아미노산 서열 분석에 블롯을 재사용할 수 있습니다.
- 나프톨 블루 블랙 염료는 폴리크릴아미드 젤, 아가로스 젤 및 니트로셀룰로스 막의 단백질을 염색하는 데 사용할 수 있습니다. 전기 영동 후 젤에 단백질을 고정하는 것이 좋습니다. 그런 다음 젤을 7%(v/v) 아세트산에 0.1% 나프톨 블루 블랙으로 2시간 이상 염색하고 7%(v/v) 아세트산 용액으로 목적지를 지정합니다. 검출 감도는 쿠마시 블루의 약 20%입니다
- 가장 높은 감도를 제공하는 ProteoSilver™ 실버 염색 키트는 3-12분의 배양 시간으로 밴드당 ≥0.1ng의 단백질을 검출할 수 있는 감도를 제공합니다. 이 염색은 매우 낮은 농도의 단백질에 권장되며 MALDI-TOF 응용 분야와 호환됩니다.
형광 단백질 겔 염색
- EZFluor™ 1단계 형광 단백질 겔 염색은 고정 없이 5~30분 동안 단 한 번의 염색 단계만 거치면 바로 사용할 수 있는 형광 단백질 겔 염색으로 밴드당 약 1~10ng의 단백질을 검출할 수 있습니다. 염색은 질량 분석법 및 Edman 기반 시퀀싱과 완벽하게 호환됩니다.
- EZFluor™ UV 1단계 형광 단백질 겔 염색은 질량 분석법과 호환되는 UV 트랜스일루미네이터와 에티듐 브로마이드 필터를 사용하여 이미징하도록 설계된 즉시 사용 가능한 단백질 겔 염색입니다.
- SYPRO® 루비 단백질 겔 염색은 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE)으로 분리된 단백질을 검출하기 위해 바로 사용할 수 있는 초감도 형광 염색입니다. 이 염색은 특히 2-D PAGE에 사용하도록 설계되었으며, 1-D PAGE 및 등전초점(IEF) 겔에도 탁월한 선택임이 입증되었습니다. SYPRO® 루비 단백질 겔 염색은 많은 은 염색 기술에 필적하는 감도를 달성합니다.
- SYPRO® Orange는 다소 밝고 배경 형광이 약간 더 높지만 SYPRO® Red와 유사합니다. 이 염료는 UV 또는 광대역 조명에 의해 효율적으로 여기됩니다. 블롯이나 IEF 겔의 단백질 염색에는 적합하지 않으며 2D 겔의 단백질 염색 시 감도가 떨어집니다.
탈색 시약
- 코잽은 코마시 블루 염색의 신속한 제거를 위해 사용됩니다. 독특한 CoZap 패드는 탈염 트레이에 직접 배치되어 용액의 모든 유리 염료를 흡수하므로 탈염 용액을 교체할 필요가 없습니다.
관련 리소스
- Protein Staining Reagents Selection Guide
Sigma offers EZBlue™ and ProteoSilver™ reagents for protein visualization, suitable for proteomics and traditional PAGE formats.
- Handbook: Protein Blotting Tips and Tricks
This handbook represents the collective experience of our application scientists, who are actively engaged in advancing the science of protein blotting and detection.
- Brochure: Rethink Western Blotting
Explore our products designed to improve each step of the Western blotting workflow.
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