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Cromatografía de líquidos de baja presión

Columnas de LPLC rellenas con diferentes medios para la aplicación cromatográfica específica.

Los sistemas de cromatografía de líquidos de baja presión (LPLC) fuerzan la fase móvil a través de la columna a baja presión. La LPLC se realizó en columnas abiertas utilizando la gravedad para “bombear” el disolvente a través de la columna. Este tipo de LPLC se conoce como «cromatografía de líquidos de columna abierta». En la actualidad la LPLC se realiza normalmente con un equipo impulsado por bomba.

La LPLC es una técnica muy selectiva que se utiliza principalmente en el estudio de biomoléculas, como proteínas, péptidos y anticuerpos monoclonales. La LPLC es principalmente una técnica preparativa y no destructiva, por lo que es ideal para la separación de biomoléculas y la purificación de proteínas recombinantes etiquetadas. La LPLC también se utiliza para purificar principios activos, eliminar plaguicidas de las muestras y purificar moléculas pequeñas.

Equipo de LPLC

El equipo de LPLC es un sistema compuesto por una columna, una bomba de baja presión (a menudo peristáltica), un inyector, un detector y un colector de fracciones. La sencilla bomba peristáltica de rodillo extrae la fase móvil del depósito a un caudal fijo y la transfiere a la columna.

A continuación, el disolvente (fase móvil) atraviesa un inyector que contiene la muestra para liberarla en la columna donde se produce la separación. Los componentes de la muestra se separan a medida que atraviesan la columna y llegan al detector a diferentes velocidades. Un detector UV-Vis o de índice de refracción (RI) en línea controla el efluente de la columna, permitiendo la recogida de muestras con un colector de fracciones. Las muestras recogidas se organizan por tiempo de elución.

Adsorbentes y hardware de la LPLC

El material de la matriz de la columna debe tener una buena estabilidad mecánica y química, debe contener grupos funcionales para facilitar la fijación del analito y ser inerte. Los materiales de construcción de la columna suelen consistir en vidrio y materiales de plástico inertes, dependiendo del disolvente utilizado.


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