Preparación de los medios
La preparación de los medios de cultivo celular influye de manera significativa en el crecimiento de las células de mamíferos y en los resultados experimentales. Del mismo modo, existen medios específicos formulados para facilitar el cultivo de microorganismos in vitro. Los medios de cultivo proporcionan una fuente de energía para el crecimiento celular y compuestos que regulan los procesos celulares. Tanto los cultivos procarióticos como los eucarióticos pueden tener requisitos de crecimiento específicos. La selección del medio depende del tipo de cultivo, la finalidad del mismo y los requisitos de densidad celular.
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Preparación de los
medios de cultivo
Los medios de cultivo comerciales se suministran en forma deshidratada o en polvo, en concentrado líquido o como soluciones de trabajo. Los medios deshidratados para cultivos en caldo deben prepararse disolviéndolos en agua destilada y ajustando el pH final antes de la esterilización. Los medios en polvo para cultivos en agar deben disolverse en agua destilada, agitarse y, a continuación, hervirse o esterilizarse en autoclave antes de verterlos en placas de Petri estériles utilizando técnicas asépticas. Los medios de cultivo suministrados como concentrados líquidos deben diluirse de forma aséptica en agua destilada, ajustarse el pH y verterse en recipientes estériles para su almacenamiento. Los medios de cultivo suministrados como soluciones de trabajo están listos para su uso tras añadir el suero u otros suplementos necesarios bajo condiciones de filtración estéril y/o asépticas, y calentarlos a la temperatura adecuada para el crecimiento celular.
Esterilización de los
medios de cultivo
Los medios de cultivo preparados a partir de polvos deben esterilizarse mediante filtración, calentamiento o autoclave antes de su uso. Aunque los medios líquidos suelen suministrarse estériles y en concentración lista para su uso, se recomienda la filtración estéril, especialmente si se van a añadir sueros u otros suplementos antes de su uso. Tras la esterilización, deben utilizarse técnicas asépticas al manipular los medios de cultivo para evitar la contaminación cruzada o el crecimiento de microorganismos no deseados.
Suplementos de los medios de cultivo
Ciertos suplementos necesarios para el cultivo o la regulación celular son inestables o termolábiles; por lo tanto, el usuario debe añadirlos al medio de cultivo basal esterilizado por calor antes de su uso. El suero, normalmente de origen bovino (FBS), es un suplemento habitual en los medios de cultivo de células animales. Para el crecimiento de ciertos tipos de células pueden ser necesarias hormonas, factores de crecimiento y moléculas de señalización específicas. Se utilizan aditivos como el IPTG para inducir la expresión de proteínas. También se pueden añadir antibióticos a los medios de cultivo para controlar el crecimiento de contaminantes bacterianos y fúngicos, aunque la contaminación se puede controlar adecuadamente con una manipulación y un almacenamiento adecuados de los medios.
Almacenamiento y uso de los
medios de cultivo
Los medios de cultivo comerciales y preparados, ya sean en forma líquida, de agar vertido o de soluciones de trabajo, se almacenan normalmente a 4 °C en la oscuridad para inhibir el crecimiento de microorganismos oportunistas y evitar la degradación de los componentes de los medios de cultivo inducida por la luz. Antes de la inoculación con cultivos, los medios deben calentarse a una temperatura adecuada para el crecimiento celular.
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