Procesado final de vectores víricos
Los procesos de purificación de vectores víricos se han venido basando históricamente en los sistemas utilizados para los anticuerpos monoclonales, que no están diseñados para proporcionar el nivel necesario de recuperación.
La introducción de nuevas tecnologías diseñadas de manera específica para el procesamiento final de los vectores víricos en la genoterapia ofrece la oportunidad de aumentar el rendimiento y la producción. Entre los enfoques que pueden aprovecharse para optimizar el procesamiento final de los vectores víricos se encuentran:
- Operaciones de ultrafiltración o diafiltración, particularmente con el uso de filtración de flujo tangencial (TFF) para la cosecha y purificación celular o vírica, concentración y diafiltración posteriores de proteínas, así como la formulación final
- Procesos cromatográficos intensificados que reducen el número y el tamaño de las operaciones unitarias mediante tecnologías adsorbentes de membrana para cromatografía de un solo uso y gran productividad
Estas tecnologías finales ofrecen el potencial de reducir los tiempos de purificación de los vectores víricos de horas a minutos, al tiempo que mejoran la recuperación. Además, pueden facilitar el escalado, reducir la huella del proceso y permitir una utilización más eficiente de las instalaciones.
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Clarificación primaria
El medio crudo que contiene vectores víricos se somete a filtración en profundidad o a una combinación de centrifugación y filtración en profundidad para eliminar grandes desechos celulares y otros contaminantes.
Clarificación secundaria
El medio clarificado de la clarificación primaria se purifica más a través de pasos añadidos.
Ultrafiltración/diafiltración
La ultrafiltración y la diafiltración se utilizan para la concentración y el cambio de tampones, respectivamente. El vector vírico se separa de las impurezas mediante filtración por tamaño. La diafiltración elimina la sal y otras moléculas, sustituyéndolas por el tampón de elección.
Cromatografía
Se utilizan al menos dos métodos cromatográficos para purificar el vector vírico, como el intercambio iónico, la afinidad y la exclusión por tamaño.
Filtración vírica
El vector vírico purificado se somete a nanofiltración con poros de 15 nanómetros para eliminar virus extraños, endotoxinas y cualquier otra impureza y agregado remanente.
Esterilización por filtración
La esterilización por filtración, o reducción de la biocarga, puede utilizarse varias veces en el proceso. Se hace pasar la corriente de alimentación por un filtro de calidad esterilizante de 0,4 o 0,2 micras para eliminar las bacterias y otros microorganismos que se hayan introducido durante el procesamiento.
Llenado final
El vector vírico purificado y estéril se llena en el recipiente final previsto. Aquí es necesario considerar cuidadosamente la formulación, los materiales de embalaje y las condiciones de almacenamiento para garantizar la estabilidad y la integridad.
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