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Citometría de flujo

Introducción a la citometría de flujo

La citometría de flujo es una tecnología en la que se utilizan uno o varios láseres para proporcionar un análisis multiparamétrico de células individuales. Cada célula o partícula se analiza por dispersión de la luz visible o por fluorescencia a medida que las células pasan rápidamente por cada láser. Con independencia del análisis de dispersión de la luz, las mediciones de fluorescencia se obtienen mediante transfección y expresión de proteínas fluorescentes comunes (proteína fluorescente verde, GFP) y mediante tinción con anticuerpos conjugados con fluorescencia o con colorantes fluorescentes. La citometría de flujo es una potente tecnología que se utiliza de manera habitual en aplicaciones de investigación en biología molecular y celular, como la inmunología, la biología del cáncer y la investigación de enfermedades.


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Anticuerpos y etiquetas para citometría de flujo

La realización del análisis mediante citometría de flujo implica el uso de varios anticuerpos y etiquetas para citometría de flujo. Los anticuerpos para citometría de flujo se utilizan para unirse específicamente a diferentes marcadores celulares, lo que ayuda a caracterizar el tipo de célula y evaluar cualquier cambio en la expresión de proteínas como parte del experimento. Pueden utilizarse numerosos tipos de etiquetas para visualizar los anticuerpos con el fin de detectarlos en el citómetro de flujo en función del diseño experimental: colorantes de ácidos nucleicos, colorantes de viabilidad celular, colorantes de polímeros, puntos cuánticos, moléculas orgánicas pequeñas, y proteínas fluorescentes. Los anticuerpos se etiquetan normalmente mediante la conjugación directa (ya sea como productos comercializados o kits de conjugación que permiten al usuario final realizar la reacción) o mediante el uso de anticuerpos secundarios. Una nueva tecnología patentada de citometría de flujo permite a los usuarios finales mezclar y combinar con flexibilidad anticuerpos y colorantes seleccionados de forma independiente para reunirlos en cualquier combinación, sin utilizar kits de conjugación ni anticuerpos secundarios.

Aplicaciones de la citometría de flujo

En numerosos campos de estudio se utiliza citometría de flujo y a menudo se analizan múltiples parámetros dentro de diversas poblaciones de células. Entre las aplicaciones comunes de la biología molecular se incluyen el análisis de proteínas fluorescentes recombinantemente expresadas que han inducido la expresión en varios tipos de células para dilucidar la función génica o para el seguimiento celular in vivo. Mientras que la tinción del ADN permite el análisis del ciclo celular, el uso de anticuerpos permite una amplia gama de análisis, como la transducción de señales, el ARN y la expresión de proteínas. Sin embargo, la inmunofenotipado es una de las aplicaciones más utilizadas de la citometría de flujo. Con el inmunofenotipado, los anticuerpos conjugados con fluorocromo se dirigen a múltiples antígenos de la superficie celular para identificar células inmunitarias específicas dentro de la población de células.

Análisis de datos de la citometría de flujo

El análisis de los datos de la citometría de flujo a menudo implica la identificación de una región específica de las células o de un grupo celular y la aplicación de más parámetros dentro del experimento, como investigar si hay más factores de identificación celular para obtener más información sobre la identidad celular. Se dispone de numerosos programas informáticos que se utilizan comúnmente para facilitar este tipo de análisis de datos y otros análisis del ciclo celular.

Equipo de citometría de flujo

Un resumen de los componentes primarios utilizados en los citómetros de flujo abarca electrónica, óptica y fluídica. La fluídica actúa como el sistema de suministro de líquidos que dirige la muestra hacia los componentes ópticos, los cuales constan de la óptica de excitación (láser) y la óptica de recogida compuesta por fotodiodos y tubos fotomultiplicadores (PMT). Es importante destacar que los componentes electrónicos convierten la información de los detectores en señales digitales que son interpretadas por los ordenadores. Combinaciones con otros sistemas facilitan análisis más avanzados de las muestras. Esos sistemas pueden ser los clasificadores celulares, para purificar y recoger las muestras, y los citómetros de obtención de imágenes que combinan la citometría de flujo con la microscopia de fluorescencia.