Merck

BGALS-RO

Roche

ββ-Glucuronidasa

from E. coli K 12

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Comisión internacional de enzimas:

biological source

Escherichia coli K12

Quality Level

form

solution

specific activity

~80 units/mg protein (Glucuronidase at 25 °C, or 140 U/mg at 37 °C, at pH 7 with 4-nitrophenyl-β-D-glucuronide as substrate; 1 ml β-Glucuronidase contains at least 140 U at 37 °C.)

mol wt

Mr ~220 kDa

packaging

pkg of 1 mL (03707580001)
pkg of 15 mL (03707601001)
pkg of 5 mL (03707598001)

manufacturer/tradename

Roche

storage condition

(Keep container tightly closed in a dry and well-ventilated place.)

parameter

48 °C optimum reaction temp.

technique(s)

activity assay: suitable

color

colorless

optimum pH

6.0-6.5

solubility

water: soluble

suitability

suitable for enzyme test

UniProt accession no.

application(s)

detection
sample preparation

storage temp.

2-8°C

Gene Information

Escherichia coli ... uidA(946149)

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Este artículo
BGALA-ROG7646G0251
ββ-Glucuronidasa from E. coli K 12

BGALS-RO

ββ-Glucuronidasa

ββ-Glucuronidasa/arilsulfatasa from Helix pomatia

BGALA-RO

ββ-Glucuronidasa/arilsulfatasa

β-Glucuronidase from bovine liver Type B-1, ≥1,000,000 units/g solid

G0251

β-Glucuronidase from bovine liver

specific activity

~80 units/mg protein (Glucuronidase at 25 °C, or 140 U/mg at 37 °C, at pH 7 with 4-nitrophenyl-β-D-glucuronide as substrate; 1 ml β-Glucuronidase contains at least 140 U at 37 °C.)

specific activity

10.8 U/mL, 25 °C (ß-Glucuronidase), 25 U/mL, 25 °C (with 4-NP-sulfate, Arylsulfatase)

specific activity

5,000,000-20,000,000 units/g protein, pH 6.8 (30 min assay)

specific activity

≥1,000,000 units/g solid

biological source

Escherichia coli K12

biological source

animal (Helix pomatia)

biological source

-

biological source

-

technique(s)

activity assay: suitable

technique(s)

ELISA: suitable

technique(s)

-

technique(s)

-

suitability

suitable for enzyme test

suitability

-

suitability

-

suitability

-

application(s)

detection
sample preparation

application(s)

life science and biopharma
sample preparation

application(s)

-

application(s)

-

General description

βGlucuronosohidrolasa del β-D-glucuronósido
La beta-glucuronidasa, también conocida como β-D-glucuronosido glucuronosohidrolasa, es una enzima lisosómica clasificada bajo la familia-2 glucosilhidrolasas. La β-glucuronidasa de E. coli comparte un 50% de similitud de secuencia con la β-glucuronidasa humana y exhibe la misma especificidad de sustrato. Ambas enzimas constan de tres dominios estructurales: el dominio de unión al azúcar, el dominio beta-sándwich inmunoglobulinoide y el dominio barril TIM. Estos dominios desempeñan un papel crucial en la actividad enzimática de la β-glucuronidasa.Características de la enzima
La enzima β-glucuronidasa de E. coli carece en esencia de actividad sulfatasa y escinde con especial eficiencia los conjugados de esteroides y benzodiacepinas.
β-D-glucuronósido glucuronosohidrolasa
EC 3.2.1.31

Specificity

Hidroliza el ácido glucurónico terminal que está unido mediante un enlace β a monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos o al fenol.

Application

Las β-glucuronidasas se han utilizado ampliamente en investigación y en laboratorios analíticos para la hidrólisis enzimática de los β-glucurónidos de esteroide. La β-glucuronidasa se utiliza:
  • para la hidrólisis de los conjugados de esteroides (glucurónidos) de la orina (pH 6,0–6,5)
  • en el análisis de dopaje
  • para la detección de benzodiacepinas en pequeñas dosis.
  • durante la preparación de la muestra para escindir los glucurónidos antes de la GC-MS, la HPLC, inmunoanálisis u otros métodos analíticos.
Se ha utilizado para la hidrólisis de enterolactona plasmática, testosterona y glucurónido de epitestosterona.

Biochem/physiol Actions

La glucuronidación es uno de los principios básicos del metabolismo. Muchas de las sustancias presentadas al cuerpo humano experimentan un procesamiento metabólico consistente en la conjugación con ácido glucurónico mediante las UDP-glucuronosiltransferasas (UGT). βLa β-glucuronidasa, también conocida como β-D-glucuronósido glucuronosohidrolasa, cataliza la transferencia de un grupo glucuronil a muchas moléculas endógenas y exógenas biológica y farmacológicamente activas. El glucurónido es, en general, más soluble, menos tóxico y excretado con mayor facilidad por el organismo humano que la molécula original. Para analizar esos conjugados con medicamento que están presentes en los líquidos corporales, como la orina y el plasma, es necesaria la desconjugación del glucurónido. La hidrólisis enzimática previa a la detección es esencial para conseguir una elevada sensibilidad durante el análisis. Después de la hidrólisis, la muestra puede analizarse mediante espectroscopia de masas, cromatografía de gases, HPLC, inmunoanálisis u otros métodos analíticos.

Features and Benefits

βLa β-glucuronidasa de E. coli es muy específica para los β-glucurónidos, y es capaz de hidrolizar muy deprisa los β-glucurónidos de esteroide, así como escindir muchos otros tipos de glucurónidos, como las benzodiacepinas, los opioides y los cannabinoides. βLa β-glucuronidasa se utiliza para la hidrólisis enzimática de los glucurónidos en los líquidos biológicos, principalmente la orina. Las sustancias utilizadas para dopaje se conjugan con glucurónidos, lo que significa que los análisis de dopaje eficaces dependen muy a menudo de la escisión enzimática de las moléculas de fármaco conjugadas mediante una β-glucuronidasa.

  • Realización de análisis rápidos debido a la elevada actividad específica de la enzima.
  • Cribado rápido de esteroides, benzodiacepinas, cannabinoides y opioides.
  • Ahorro de tiempo al desarrollar el procedimiento sin necesidad de limpiar la reacción ni de amortiguar la orina.

Unit Definition

La unidad internacional de actividad β-glucuronidasa es la actividad enzimática que aumenta la tasa de liberación del 4-nitrofenol del 4-nitrofenil-β-D-glucurónico (4NPG) a una temperatura de +25 ºC y un pH de 7,0 por 1 μM.
Antes se utilizaba la unidad Fishman. Esta unidad Se ajusta a la liberación de fenolftaleína de su glucurónido (PPG). No es posible medir las actividades relativas de diferentes preparaciones para los β-glucurónidos de esteroide comparando sus actividades con respecto al PPG. Muchas preparaciones no catalizan igualmente la hidrólisis del PPG, el 4NPG o los diversos β-glucurónidos de esteroide en orina. La elección del 4NPG como sustrato patrón se basa en las siguientes consideraciones:
  • Las concentraciones de Michaelis para los dos sustratos son similares (KM = 2 ×10-4 M para 4 NPG y KM = 6 ×10-5 M para PPG), pero las tasas correspondientes de hidrólisis difieren:
  • El 4NPG se hidroliza a una velocidad unas 5 veces mayor que el PPG;
  • Para el PPG, se produce inhibición por exceso de sustrato; esto no se observa utilizando 4NPG.

Physical form

Disolución en glicerol al 50%, pH aproximado de 6,5
(15 ml en un frasco)

Other Notes

La enzima β-glucuronidasa de E. coli carece en esencia de actividad sulfatasa y es especialmente eficiente en la degradación de conjugados de esteroides y benzodiacepinas.
Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos de diagnóstico.

Legal Information

La venta del Producto no agota ni otorga ningún derecho sobre patentes de terceros, incluidas las patentes de empresas del grupo F. Hoffmann - La Roche AG de empresas, en concreto, para el uso de los anticuerpos modificados obtenidos utilizando el producto.

Storage Class

12 - Non Combustible Liquids

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WGK 1

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LC-MS/MS-Based Assay for Free and Deconjugated Testosterone and Epitestosterone in Rat Urine and Serum.
Jenkinson C
Journal of Analytical and Bioanalytical Techniques , S5, doi-doi (2014)
T V Zenser et al.
Drug metabolism and disposition: the biological fate of chemicals, 27(9), 1064-1067 (1999-08-26)
Individuals exposed to carcinogenic aromatic amines excrete arylamine N- and O-glucuronide metabolites. This study assessed the susceptibility of selected glucuronides to hydrolysis by human and Escherichia coli beta-glucuronidase. N- or O-glucuronides were prepared with the following aglycones: benzidine, N-acetylbenzidine, N'-hydroxy-N-acetylbenzidine
Alan V Rincon et al.
Psychoneuroendocrinology, 120, 104774-104774 (2020-06-24)
Neuroendocrine research on the formation of social bonds has primarily focused on the role of nonapeptides. However, steroid hormones often act simultaneously to either inhibit or facilitate bonding. Testosterone is proposed to mediate a trade-off between male mating effort and
Alan V Rincon et al.
General and comparative endocrinology, 281, 117-125 (2019-05-31)
The development of methods to quantify hormones from non-invasively collected samples such as urine or feces has facilitated endocrinology research on wild-living animals. To ensure that hormone measurements are biologically meaningful, method validations are strongly recommended for each new species
Loganathan Arul et al.
Bioinformation, 2(8), 339-343 (2008-08-08)
Glycosyl hydrolases hydrolyze the glycosidic bond either in carbohydrates or between carbohydrate and non-carbohydrate moiety. The beta-glucuronidase (beta D-glucuronoside glucuronosohydrolase; EC 3.2.1.31) enzyme belongs to the family-2 glycosyl hydrolase. The E. coli borne beta-glucuronidase gene (uidA) was devised as a

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