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Purificación de proteínas biotiniladas

Las proteínas biotiniladas y los anticuerpos biotinilados se utilizan comúnmente en la investigación básica y en el descubrimiento de fármacos. Se dispone de varias resinas de cromatografía de afinidad y columnas precargadas y placas para unir, aislar y purificar proteínas y anticuerpos biotinilados.



Microesferas de agarosa y geles de afinidad

Las microesferas de agarosa y los geles de afinidad permiten la purificación de las proteínas biotiniladas y los anticuerpos biotinilados utilizando estreptavidina o avidina reticulada con agarosa granulada. Tanto la avidina como la estreptavidina se unen a la biotina con gran afinidad, aunque la avidina puede exhibir una elevada unión inespecífica. La Extravidin®-agarosa utiliza una avidina modificada con muy alta afinidad y especificidad para la biotina. Buenas para la purificación a escala pequeña o grande, estas resinas son adecuadas para purificación en columna de flujo por gravedad, centrifugación a baja velocidad en el procesamiento por lotes y procedimientos de cromatografía de baja presión. Los geles de afinidad EZView™ incorporan un colorante rojo que permite al usuario diferenciar fácilmente los sedimentos del sobrenadante, lo que produce una menor pérdida de proteínas durante la purificación por lotes.

Microesferas magnéticas

Las microesferas magnéticas de estreptavidina PureProteome™ proporcionan una forma rápida y reproducible de purificar las inmunoglobulinas de las mezclas complejas como muestras de suero, plasma o sobrenadantes de cultivos celulares. Las proteínas y los anticuerpos biotinilados se purifican utilizando una gradilla o plataforma magnética para separar las microesferas de las fracciones de lavado y elución. Este procedimiento es adecuado para un bajo rendimiento utilizando tubos individuales de microcentrífuga o para un rendimiento mayor utilizando placas de 96 pocillos con o sin automatización. Las partículas magnéticas de estreptavidina también pueden utilizarse para la purificación de proteínas biotiniladas y anticuerpos biotinilados.

Placas de gran capacidad recubiertas con estreptavidina SigmaScreen™

En las placas de gran capacidad recubiertas con estreptavidina SigmaScreen™ se utiliza una tecnología de recubrimiento patentada que proporciona una capacidad de unión a la biotina sustancialmente mayor que las placas recubiertas con estreptavidina convencionales o recubiertas con ExtrAvidin. Con capacidad de unión > 300 pmol/pocillo (formato de 96 pocillos) o >150 pmol/pocillo (formato de 384 pocillos), estas placas permiten la elución de la proteína capturada para el análisis poscaptura mediante varios métodos, como MALDI, ICAT o SDS-PAGE. Las placas de gran capacidad recubiertas con estreptavidina SigmaScreen™ se fabrican bajo la norma ISO 9002 en nuestras instalaciones GMP y ofrecen una gran uniformidad entre pocillos y placa a placa.

Columnas y medios de cromatografía Cytiva™ Amersham

Se dispone de una variedad de columnas para cromatografía y resinas Cytiva™ Amersham para una purificación fiable y de alta resolución a escala grande y pequeña de proteínas y anticuerpos biotinilados.

  • Las columnas SpinTrap™ son columnas de centrifugación precargadas de un solo uso para una purificación sencilla y a pequeña escala de proteínas biotiniladas y anticuerpos biotinilados.
  • Las columnas HiTrap™ HP están precargadas con resina de alto rendimiento estreptavidina Sepharose™ para la purificación preparativa sistemática de proteínas y anticuerpos biotinilados.
  • Las placas filtrantes de 96 pocillos MultiTrap™ proporcionan un formato rápido y fiable para la purificación a pequeña escala de proteínas y anticuerpos biotinilados utilizando placas filtrantes de 96 pocillos precargadas aptas para la centrifugación o la filtración al vacío, manualmente o utilizando sistemas robóticos automatizados.
  • Los medios Mag Sepharose™ estreptavidina constan de microesferas magnéticas de Sepharose™ diseñadas para simplificar el enriquecimiento de las proteínas diana mediante inmunoprecipitación o aplicaciones de extracción (pull-down), y pueden utilizarse para la purificación y el cribado rápidos a pequeña escala de proteínas y anticuerpos biotinilados de los sobrenadantes celulares.
  • La resina de alto rendimiento estreptavidina Sepharose™ también está disponible por separado para el escalado de la purificación.