Cómo moldear geles más rápidamente con el sistema de moldeo de geles mPAGE^® Lux para geles SDS-PAGE

Descubra el sistema de colada mPAGE^® Lux para geles SDS-PAGE listos para usar en 3 minutos. Geles SDS-PAGE frescos listos cuando los necesite. ¿Le interesa? Solicite información a continuación.

El moldeado de gel simplificado

¿Cómo se moldea un gel para SDS-PAGE? El moldeado de geles suele implicar verter geles de resolución y apilamiento en un proceso paso a paso que requiere mucho tiempo. Tradicionalmente, los investigadores tienen pocas opciones para satisfacer sus necesidades de moldeado de geles y electroforesis. Nuestro innovador sistema de moldeado de gel mPAGE^® Lux SDS-PAGE está diseñado para proporcionar la flexibilidad de los geles moldeados a mano y la fiabilidad de los geles prefabricados, sin la pérdida de calidad, el tiempo o el coste significativamente más alto que acompañan a las opciones alternativas. Moldee geles en menos de tres minutos con nuestro sistema de moldeado mPAGE^® Lux. Puede decir adiós a los métodos convencionales y a sus laboriosos pasos manuales para la creación de geles. Eso sí que es novedad.

Descripción general de la sección

• Características y ventajas del sistema de moldeo en gel mPAGE^® Lux
• ¿Cuáles son los pasos del moldeado en gel?
• Sistema de colada mPAGE^® Lux y kit de reactivos Bis-Tris
• Protocolo de moldeado de gel mPAGE^® Lux SDS-PAGE
• Geles mPAGE^® Lux Bis-Tris con tampones de migración MOPS y MES
• Moldeado de gel sostenible con el sistema de moldeado mPAGE^® Lux
• Visualización rápida de la detección de proteínas en gel sin tinción utilizando el sistema mPAGE^® Lux
• Solicite el sistema de moldeado mPAGE^® Lux y los reactivos relacionados

Características y ventajas del sistema de moldeo en gel mPAGE^® Lux

El sistema de moldeo de gel mPAGE^® Lux sustituye el proceso de moldeo de gel de proteínas por métodos más rápidos, sencillos y seguros, con resultados más reproducibles. El sistema de moldeo mPAGE^® Lux cura un mini gel en 90 segundos, frente a los más de 90 minutos que tardan los métodos convencionales. Nuestro rápido flujo de trabajo de moldeado con irradiación UV acelera el curado de los reactivos mPAGE^® Lux Bis-Tris, mientras que la química del gel Bis-Tris permite tiempos de ejecución más cortos en comparación con los métodos convencionales. Vea cómo hacer geles de proteínas con este sistema de moldeado en el vídeo a continuación.

La fotopolimerización en un solo paso, que utiliza controles precisos del sistema y requiere menos pasos de preparación, reduce las posibilidades de error. Nuestro mPAGE^® Caster evita las fugas y el uso de geles Bis-Tris proporciona una calidad de banda superior en comparación con los geles Tris-Glicina moldeados a mano. Además, el kit de reactivos mPAGE^® Lux, el kit de reactivos mPAGE^® TurboMix y los geles prefabricados mPAGE^® utilizan todos ellos la química Bis-Tris y comparten los mismos tampones de funcionamiento y tintes para geles. Nuestro sistema de colado mPAGE^® Lux no utiliza APS ni TEMED y ofrece una opción más segura con menos productos químicos tóxicos.

Para mejorar aún más la compatibilidad y sus necesidades de flujo de trabajo, ahora ofrecemos nuestra máscara clip-on mPAGE®. Con la máscara clip-on mPAGE^®, se pueden utilizar las placas cortas, las placas espaciadoras y los peines Bio-Rad Mini-PROTEAN^®, así como las placas cortas, las placas espaciadoras y los peines mPAGE^® Mini, al curar un gel con el sistema de curado mPAGE^® Lux Curing Station.

Nota: La placa corta enmascarada mPAGE^® Lux ya no es necesaria cuando se utiliza la máscara acoplable, aunque la placa corta enmascarada también se puede seguir utilizando.

Flujo de trabajo tradicional de fundición manual

Figura 1. Infografía sobre el proceso tradicional de moldeo manual para geles SDS-PAGE, que muestra los pasos ampliados y el tiempo de polimerización de 90 minutos o más.

Flujo de trabajo mPAGE^®Lux

Figura 2. Moldeado de gel tradicional frente al flujo de trabajo mPAGE^® Lux. El sistema de moldeado mPAGE^® Lux tiene menos pasos en general, reduce el tiempo de polimerización y genera menos residuos tóxicos en comparación con la tecnología tradicional de moldeado de gel. Los geles creados por el sistema de moldeado mPAGE^® Lux son compatibles con el tanque de minigel mPAGE^® y las celdas Bio-Rad Mini-PROTEAN®. Para obtener una resolución excepcional y tiempos de ejecución reducidos, utilice nuestros tampones mPAGE®. Los geles mPAGE^® Lux son compatibles con tampones y reactivos de tinción compatibles con Bis-Tris.

¿Cuáles son los pasos del moldeado en gel?

El moldeado de un gel SDS-PAGE suele incluir el pesaje, la mezcla previa de las soluciones de gel, el moldeado y el tiempo de espera para la polimerización. Aunque a menudo se citan como una solución más económica, los métodos convencionales de moldeado manual de geles requieren mucho tiempo y muchos pasos prácticos, lo que puede dar lugar a formulaciones de gel inconsistentes. La calidad de los geles moldeados a mano y los datos que pueden ayudar a generar dependen de la consistencia de la formulación en las recetas de geles proteicos, de modo que no se desperdicien reactivos y tiempo valiosos con fallos en los geles.

Figura 3. Comparación de la calidad de los datos con el gel mPAGE^® Lux Bis-Tris y el gel tris-glicina moldeado a mano. Calidad de las bandas del gel mPAGE^® Lux Bis-Tris (izquierda) en comparación con el gel tris-glicina moldeado a mano (derecha). Ambos geles son de acrilamida al 10 % y se cargan con una titulación de lisado celular humano A431. El tiempo de electroforesis es de 42 minutos a 200 V (gel Lux) y de 119 minutos a 120 V (gel tris-glicina). Los geles se tiñen con el colorante para gel ReadyBlue™ Coomassie.

El sistema de colada mPAGE^® Lux ofrece una solución innovadora para su proceso de colada de gel. Ya no tendrá que elegir entre ahorrar tiempo o recursos. Nuestro novedoso sistema de colada de gel permite a los investigadores colar fácilmente sus geles de forma rápida cuando los necesitan, a una fracción del coste de las tecnologías de geles prefabricados. Mejore la eficiencia de su laboratorio y actualice su flujo de trabajo de electroforesis en gel con el sistema de colada mPAGE^® Lux.

Figura 4. Comparación de métodos de transferencia húmeda, rápida y semiseca mediante Western blotting. Las comparaciones se realizaron utilizando geles mPAGE^® Lux Bis-Tris al 12 % que se procesaron con una titulación de lisado de células humanas A431 y con diversos métodos de transferencia a membranas Immobilon^®-P. Las membranas se transfirieron con anticuerpos anti-EGFR y anti-ErK1/2 y, a continuación, se detectaron con sustrato Immobilon^® ECL Ultra Western HRP. Método Turbo = transferencia utilizando el sistema de transferencia Bio-Rad Trans-Blot^® Turbo™ y los paquetes de transferencia Trans-Blot^® Turbo™.

Figura 5. Reproducibilidad de los geles mPAGE^® Lux Bis-Tris. A. Se prepararon cuatro geles al 8 % y se procesaron con titulación de lisado celular humano A341, que posteriormente se tiñó con el colorante para geles ReadyBlue™ Coomassie. B. Se calculó la distancia de migración relativa (Rf) para el marcador de peso molecular sin teñir en cada gel. Se muestra la desviación estándar para cada banda de proteína.

Figura 6. Análisis de la vida útil del reactivo mPAGE^® Lux Bis-Tris. Geles mPAGE^® Lux Bis-Tris moldeados con reactivos (A) de 0 meses, (B) de 6 meses, (C) de 12 meses o (D) de 24 meses. No se observan diferencias en el patrón de ejecución ni en el tiempo de ejecución.

Sistema de moldeo mPAGE^® Lux y kits de reactivos Bis-Tris

Añada el sistema de moldeo mPAGE^® Lux a su laboratorio y disponga de geles para Western blot y geles para electroforesis listos para usar en menos de 3 minutos. Respire hondo y acostúmbrese a un proceso de moldeo de geles rápido, con menos residuos y sin preocuparse por posibles fallos. Eso sí que es novedad. Aproveche nuestros kits del sistema de moldeo mPAGE^® Lux, que incluyen la estación de curado mPAGE^® Lux, el tubo de mezcla mPAGE^® Lux, el moldeador de gel mPAGE^®, el peine mPAGE^® con 10 y 15 pocillos, la placa espaciadora mPAGE^® Mini y las placas cortas enmascaradas mPAGE^® Lux con 10 y 15 pocillos. A continuación se incluyen las descripciones y configuraciones de los kits de moldeo:

*Disponible con enchufe NEMA 5-15P (YP12), CEE 7/7 (YP22), tipo G (YP61), YP18 o tipo I (YP03).

Descripción del kit	Artículos/Cantidades	N.º de pieza incluido	N.º de producto del kit
Sistema de moldeo mPAGE® Lux, 1 mm*	Estación de curado mPAGE® Lux (1) Tubo mezclador mPAGE® Lux (5) Molde para gel mPAGE® (2) Peine mPAGE® de 1,0 mm, 10 pocillos (5) Peine mPAGE® de 1,0 mm, 15 pocillos (5) Placa espaciadora mPAGE® de 1,0 mm (5) Mini placas cortas mPAGE® (10) Máscara con clip mPAGE® Lux de 10 pocillos (2) Máscara con clip mPAGE® Lux de 15 pocillos (2)	LUXGCS LUXMIXTB GCR2 C1M10W C1M15W MSPA10 MSHRT LUXCLP10W LUXCLP15W	LUXCSYS-1M
Sistema de moldeo mPAGE® Lux, 0,75 mm*	Estación de curado mPAGE® Lux (1) Tubo mezclador mPAGE® Lux (5) Moldeador de gel mPAGE® (2) Peine mPAGE® de 0,75 mm, 10 pocillos (5) Peine mPAGE®, 0,75 mm, 15 pocillos (5) Placa espaciadora mPAGE®, 0,75 mm (5) Mini placas cortas mPAGE® (10) Máscara con clip mPAGE® Lux, 10 pocillos (2) Máscara con clip mPAGE® Lux, 15 pocillos (2)	LUXGCS LUXMIXTB GCR2 C75M10W C75M15W MSPA75 MSHRT LUXCLP10W LUXCLP15W	LUXCSYS-75M
Sistema de moldeo mPAGE® Lux, 1,5 mm*	Estación de curado mPAGE® Lux (1) Tubo mezclador mPAGE® Lux (5) Rueda mPAGE® (2) Peine mPAGE®, 1,5 mm, 10 pocillos (5) Peine mPAGE®, 1,5 mm, 15 pocillos (5) Placa espaciadora mPAGE®, 1,5 mm (5) Placas cortas mPAGE® mPAGE® (10) Máscara con clip mPAGE® Lux 10 pocillos (2) Máscara con clip mPAGE® Lux 15 pocillos (2)	LUXGCS LUXMIXTB GCR2 C15M10W C15M15W MSPA15 MSHRT LUXCLP10W LUXCLP15W	LUXCSYS-15M

Figura 7. Estación de curado mPAGE^® Lux.

El kit de reactivos mPAGE^® Lux Bis-Tris es un kit de reactivos específico para el sistema de colada mPAGE^® Lux. El kit de reactivos mPAGE^® Lux Bis-Tris consta de tres componentes: solución de resolución, diluyente y solución de apilamiento. El kit es compatible con una amplia variedad de geles de acrilamida entre el 8,0 % y el 13,5 %. A continuación se incluye la descripción y la configuración del kit de reactivos mPAGE^® Lux:

Descripción del kit	Artículos/Cantidades	N.º de pieza incluido	N.º de producto del kit
Kit de reactivos mPAGE® Lux Bis-Tris	Solución de resolución mPAGE® Lux Bis-Tris (1) Solución de apilamiento mPAGE® Lux Bis-Tris (1) Diluente mPAGE® Lux Bis-Tris (1)	LUXRGTRES LUXRGTSTK LUXRGTDIL	LUXRGTKIT

 Protocolo de moldeado de gel SDS-PAGE mPAGE^® Lux

Todas las soluciones deben protegerse de la luz solar para evitar la polimerización. Antes de moldear los geles, deje que todas las soluciones alcancen la temperatura ambiente.

Gel de resolución

1. Prepare la solución de gel de resolución mezclando la solución de resolución y el diluyente. Consulte la tabla siguiente para conocer los volúmenes de mezcla. La solución de gel de resolución se puede preparar en grandes cantidades para hacer varios geles de forma secuencial.
2. Con una pipeta limpia, añada la solución de resolución a un tubo de mezcla negro u otro recipiente opaco.
3. Con una pipeta limpia, añada el diluyente al mismo tubo de mezcla.
4. Mezcle girando suavemente el recipiente de un extremo a otro. No utilice un vórtex.

Volúmenes de la solución de gel de resolución

Utilice los volúmenes que se indican a continuación para preparar un solo gel de 1,0 mm. Para volúmenes de solución de 0,75 mm y 1,5 mm, consulte la guía del usuario completa disponible en la página del producto.

Porcentaje de gel	Solución de resolución		Diluyente		Volumen total
8	2 ml	+	3 ml	=	5 ml
10	2,5 ml	+	2,5 ml	=	5 ml
12	3 ml	+	2 ml	=	5 ml
13,5	3,3 ml	+	1,7 ml	=	5 ml

Gel de apilamiento

La solución de apilamiento está lista para usar directamente desde el frasco. Utilice 1,5 ml de solución de apilamiento para un gel de 1,0 mm. Importante: No diluya la solución de apilamiento.

Moldeado del gel

1. Limpie las placas de vidrio con un detergente suave y enjuague con agua desionizada. Limpie con etanol al 70 % antes de usar.
2. Monte el molde para gel mPAGE^® utilizando la placa espaciadora mPAGE^® y la placa corta enmascarada mPAGE^® Lux para formar un casete de vidrio. La placa corta enmascarada debe orientarse con el texto en el lado izquierdo del casete. Asegúrese de que ambas placas de vidrio estén alineadas en la parte inferior del marco del molde antes de cerrar las abrazaderas. Nota: La placa corta enmascarada mPAGE^® Lux debe utilizarse con la estación de curado mPAGE®.
3. Encienda la estación de curado mPAGE^® Lux pulsando el botón de encendido. La estación de curado iniciará una autocomprobación. Una vez completada la autocomprobación, aparecerá la pantalla de preparación.
4. Abra la puerta y coloque el molde de gel en la estación de curado, alineando el molde detrás de los topes.
5. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada la solución de gel de resolución preparada hasta la línea de llenado indicada en el bastidor del molde para gel mPAGE®.
6. Con una pipeta limpia de 5 ml, añada lentamente la solución de apilamiento hasta la parte superior de la placa corta.
7. Inserte lentamente el peine mPAGE^® en ángulo para evitar la formación de burbujas de aire debajo de los dientes. Importante: mezclar diferentes formatos de pocillos puede dar lugar a una formación incorrecta de los mismos. Utilice:
   • Peines de 10 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE^® Lux de 10 pocillos
   • Peines de 15 pocillos con placas cortas enmascaradas mPAGE^® Lux de 15 pocillos
8. Limpie el exceso de solución de la parte delantera de la placa corta para evitar un curado incompleto donde haya exceso.
9. Instale la máscara con clip sobre la placa corta y el marco de moldeo.
   • La parte delantera de la máscara debe quedar bien ajustada contra la placa corta, cubriendo completamente los dientes del peine.
10. Cierre la puerta de la estación de curado y seleccione el grosor del gel.
11. Pulse Start para iniciar el curado del gel. Consejo: Si va a moldear varios geles, comience el proceso de moldeo de gel con el segundo moldeador de gel ahora, mientras se cura el primer gel.
12. Una vez completado el curado, abra la puerta y retire el moldeador de gel. Retire el casete del moldeador de gel bajando el clip de tensión para liberar el marco del moldeador. A continuación, abra los laterales del marco y deslice el casete hacia fuera desde la parte superior.
13. Utilice el gel inmediatamente o envuelva el casete en una toalla de papel húmeda y guárdelo en posición horizontal en una bolsa con cierre hermético u otro recipiente hermético a una temperatura de entre 2 y 8 °C durante un máximo de 2 semanas. No deje los casetes sin envolver, ya que el gel se secará.

Geles mPAGE^® Lux Bis-Tris con tampones de migración MOPS y MES

Los geles mPAGE^® Lux Bis-Tris están diseñados para funcionar exclusivamente con tampones de migración MOPS o MES. Dependiendo del tampón de migración que se utilice, se pueden obtener patrones de separación muy distintos. El tampón MOPS se puede utilizar para ajustar con precisión la separación de proteínas grandes y medianas, mientras que el tampón MES proporciona una separación óptima de las proteínas más pequeñas. Consulte las tablas de migración (Figura 8) para determinar qué sistema de tampones de migración de gel es el más adecuado para el rango de separación deseado.

Figura 8. Gráficos de migración de geles mPAGE^® Lux Bis-Tris con tampón de migración MOPS SDS y tampón de migración MES SDS (kDa).

Cómo retirar el gel después de la electroforesis

Retire el gel del casete de vidrio con un rascador de gel. Corte a lo largo de los bordes del gel (derecha) para evitar que se rompa. Los geles mPAGE^® Lux Bis-Tris SOLO deben utilizarse con tampón de migración MOPS-SDS o MES-SDS. Los geles Bis-Tris NO son compatibles con el tampón de migración Tris-Glicina.

Moldeado sostenible de gel con el sistema de moldeado de gel mPAGE^® Lux

Para cuantificar el impacto sostenible de nuestro sistema de moldeado mPAGE^® Lux, se realizaron cálculos comparativos con el uso de un kit de moldeado rápido representativo para el moldeado manual de geles de poliacrilamida para electroforesis de proteínas. Ambos sistemas requieren el uso de kits de moldeado reutilizables y kits de reactivos para moldeado manual. El sistema de moldeo mPAGE^® Lux requiere además el uso de la estación de curado de gel mPAGE^® Lux, mientras que el sistema de referencia requiere el uso de APS y TEMED, que se venden por separado del kit de reactivos para moldeo manual.

En esta evaluación se han tenido en cuenta todos los componentes necesarios para el moldeado de geles de electroforesis durante la vida útil mínima de la estación de curado mPAGE^® Lux, que es de 5 años. Esto incluye la producción, el embalaje, la distribución, el uso y el impacto al final de la vida útil del kit de moldeado manual, los reactivos necesarios y todo el material de laboratorio consumible requerido. Los cálculos se realizaron suponiendo una producción de 250, 500 o 1000 geles al año y se afirmó la diferencia mínima con respecto al sistema de referencia.

Atributos de sostenibilidad de los materiales y productos

Aunque se trata de una solución innovadora para el moldeado manual de geles de poliacrilamida, el sistema de moldeado mPAGE^® Lux sigue requiriendo el uso de algunos consumibles plásticos y reactivos peligrosos. Si bien no existe un sustituto adecuado para la acrilamida en esta aplicación, se han eliminado todos los demás riesgos químicos de este sistema y se ha reducido significativamente la cantidad de consumibles plásticos necesarios en comparación con el sistema de referencia.

La masa adicional de la estación de curado de geles que requiere el sistema de moldeado mPAGE^® Lux se compensa con la reducción de los productos necesarios en el flujo de trabajo de moldeado de geles, como se muestra en el gráfico. A lo largo de la vida útil del instrumento, la masa total del sistema se reduce al menos en un 20 % en comparación con los sistemas de moldeado rápido.

Masa del sistema durante su vida útil (kg) para moldear 500 geles al año:

Figura 9. Comparación de la masa del sistema a lo largo de su vida útil (kg) para el moldeado de 500 geles al año entre el sistema mPAGE^® Lux Casting y el sistema de referencia. Azul oscuro = sistema de referencia. Azul claro = sistema mPAGE^® Lux Casting.

Además, este producto cumple con los principios de SMASH Packaging, nuestra estrategia que impulsa mejoras en la sostenibilidad de los envases mediante la reducción de los mismos, el uso de materiales más sostenibles y un reciclaje más fácil.

• El embalaje de los productos y los artículos adicionales necesarios para una unidad funcional se reduce en un 30 % con respecto al sistema de referencia.
• El 100 % de los envases de fibra del sistema cuentan con certificación forestal sostenible.
• Todos los insertos protectores de espuma están fabricados con polietileno 100 % reciclado.
• El embalaje no contiene ningún material que impida el reciclaje, tal y como se define en nuestras directrices SMASH.

Distribución y uso del producto del sistema de fundición mPAGE^® Lux

La reducción de los consumibles necesarios y la eliminación de ciertos reactivos dan como resultado una disminución significativa de los impactos asociados al transporte. La reducción de masa de los componentes que se envían regularmente y del embalaje asociado es de al menos un 24 % durante la vida útil mínima del instrumento.

Tabla 1.El ahorro total de masa en 5 años para el sistema mPAGE^® Lux.

Ahorro total en 5 años
Geles/año	Reactivos	Material de laboratorio
250	4,7 kg	12,8 kg
500	8,4 kg	12,8 kg
1000	16,1 kg	22,1 kg

Aunque el instrumento añadido requiere energía durante su funcionamiento, la estación de moldeo mPAGE^® Lux se ha diseñado teniendo en cuenta la eficiencia energética. Gracias al uso de iluminación LED y a una interfaz de usuario sencilla e intuitiva, el consumo energético total sigue siendo muy bajo. El consumo energético acumulado necesario para curar 1000 geles es de solo 1,65 kWh, lo que equivale aproximadamente a 33 horas de uso de un ordenador portátil. La cantidad de residuos plásticos de un solo uso generados a lo largo del proceso de moldeo de geles se reduce en al menos un 25 %. Además, los reactivos mPAGE^® Lux se autopolimerizan bajo la exposición a la luz ambiental, lo que elimina los residuos de acrilamida no polimerizada en los flujos de residuos.

Al moldear geles frescos y listos para usar según sea necesario, se elimina el riesgo de preparar geles de antemano que no se vayan a utilizar. El sistema mPAGE^® Lux elimina la necesidad de almacenar kits de reactivos o geles premoldeados en diferentes porcentajes, lo que reduce la cantidad de residuos generados debido a la caducidad de los componentes. La estación de curado mPAGE^® Lux es un equipo electrónico y, como tal, debe desecharse de acuerdo con todas las normativas aplicables. Para obtener más información sobre la eliminación de residuos electrónicos, visite nuestra página de cumplimiento de la normativa RAEE.

Este producto ha demostrado mejoras significativas con respecto al sistema de referencia a lo largo de todo su ciclo de vida y ha sido designado como producto alternativo más ecológico. Para obtener más información, visite nuestra página sobre nuestro marco de diseño para la sostenibilidad y nuestros productos alternativos más ecológicos.

Visualización rápida de la detección de proteínas en gel sin tinción utilizando el sistema mPAGE^® Lux

El SDS-PAGE es una técnica común utilizada para separar proteínas y otras biomoléculas por tamaño. Las proteínas dentro del gel pueden detectarse utilizando tintes colorimétricos o fluorescentes bien establecidos, como el azul brillante de Coomassie (CBB), el tinte de plata y el SYPRO™ Ruby. Estos métodos de tinción varían en sensibilidad y a menudo requieren varios pasos de incubación que consumen mucho tiempo.

Descrito inicialmente como un apagador de fluorescencia, el tricloroetanol (TCE) es un compuesto que desplaza la fluorescencia del triptófano de su emisión nativa (~350 nm) hacia la luz visible (~512 nm) al producir un nuevo fluoróforo tras su activación con luz UV.^1-3 Kazmin et. al. aprovecharon esta propiedad del TCE y otros compuestos tricloro para desarrollar una solución de tinción de gel rápida y sensible en un solo paso.⁴ Más tarde, el TCE se incorporó directamente a los geles SDS-PAGE durante la preparación del gel, lo que permitió la detección de proteínas sin necesidad de realizar laboriosos pasos de tinción.^5,6 A continuación describimos la preparación de geles mPAGE^® Lux con TCE para permitir la detección de proteínas en el gel sin necesidad de tinción.

Comparación entre el método de tinción y el método sin tinción

Se realizó una comparación entre los métodos de visualización con TCE y de tinción con gel Coomassie. La sensibilidad de la detección fue similar entre los dos métodos (Figura 10). Sin embargo, la detección basada en TCE no requiere el paso de tinción, lo que ahorra al menos de dos a varias horas de tiempo de preparación, dependiendo de su método de tinción actual.

Figura 10. Visualización de proteínas con TCE en comparación con el colorante para gel Coomassie READYBLUE®. Se cargan tres proteínas purificadas (lisozima (14,4 kDa), BSA (66 kDa) y fosforilasa b (97 kDa)) se cargan con 4 µg, 1 µg, 0,25 µg, 0,0625 µg, 0,0156 µg, 0,004 µg, 0,0009 µg y 0 µg, respectivamente, en un gel mPAGE^® Lux al 12 % preparado con TCE al 1 %. El gel se procesó durante 42 minutos a 200 V en tampón de procesamiento MOPS-SDS. (A) Visualización de proteínas tras 45 segundos de activación con TCE. (B) Imagen correspondiente del gel teñido con READYBLUE^® Coomassie. Se observa una sensibilidad de detección de proteínas similar entre el gel teñido con TCE y el teñido con Coomassie.

Compatibilidad del método

También se evaluó la compatibilidad de este método con el análisis posterior, en este caso el Western blotting. La figura 11 muestra una comparación entre un Western blot preparado con y sin TCE. Se observó una sensibilidad de inmunodetección similar cuando los geles de Western blot se activaron durante 45 segundos y se obtuvieron imágenes antes de la transferencia, como se muestra aquí.

Sin embargo, debido a la naturaleza de la polimerización del gel mPAGE^® Lux, unos tiempos de activación y exposición más largos pueden alterar la eficiencia de la transferencia de proteínas. Es posible que sea necesario optimizar la transferencia de proteínas. Si se va a realizar un Western blotting después de la visualización con TCE, se recomienda utilizar el tiempo de activación más corto posible, ya que la activación puede afectar a la eficiencia de transferencia de los geles mPAGE^® Lux.

Figura 11. Western Blot tras visualización con TCE. Se cargó una serie de diluciones 2x de lisado celular A431 estimulado con EGF (10 ng – 0,3 ng) en un gel mPAGE^® Lux al 8 % preparado (B) con o (A) sin TCE al 1 %. El gel se procesó durante 38 minutos a 200 V en tampón de procesamiento MOPS-SDS, luego el gel que contenía TCE se activó durante 45 segundos y se obtuvo una imagen. A continuación, ambos geles se transfirieron a una membrana Immobilon^® P PVDF. Las membranas se analizaron para detectar EFGR, MAPK 1/2 e histona H3 utilizando métodos de inmunodetección patrón.

Tecnología sin manchas con activación TCE

Dado que este método de activación con TCE no requiere un paso adicional de tinción, ahorra tiempo y puede realizarse inmediatamente después de la electroforesis. Los resultados aquí también muestran que la sensibilidad de la detección de proteínas es similar a la de otros métodos convencionales que utilizan tinción.

En general, con los geles mPAGE^® Lux y otros productos de electroforesis mPAGE^®, se pueden preparar y ejecutar geles de forma rápida y reproducible. Además, los geles mPAGE^® Lux son compatibles con la tecnología sin tinción descrita aquí que utiliza TCE, por lo que se reducen aún más los pasos de los protocolos actuales. Esto proporciona a los investigadores una herramienta valiosa para seguir confiando en la facilidad y flexibilidad de la tecnología de moldeo mPAGE^® Lux, al tiempo que ahora también obtienen la ventaja añadida de una rápida visualización de las proteínas.

Solicite el sistema de moldeado mPAGE^® Lux y los reactivos relacionados.

Sistema de moldeo mPAGE^® Lux

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Accesorios y reactivos mPAGE^® Lux

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Referencias

1. Eftink MR, Zajicek JL, Ghiron CA. 1977. A Hydrophobic Quencher of Protein Fluorescence: 2,2,2-Trichloroethanol. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure. 491(2):473-481. https://doi.org/10.1016/0005-2795(77)90290-2

2. Edwards RA, Jickling G, Turner RJ. The Light-induced Reactions of Tryptophan with Halocompounds¶. 75(4):362-368. https://doi.org/10.1562/0031-8655(2002)0750362tlirot2.0.co2

3. Pichlo C, Toelzer C, Chojnacki K, Öcal S, Uthoff M, Ruegenberg S, Hermanns T, Schacherl M, Denzel MS, Hofmann K, et al. 2018. Improved protein-crystal identification by using 2,2,2-trichloroethanol as a fluorescence enhancer. Acta Crystallogr F Struct Biol Commun. 74(5):307-314. https://doi.org/10.1107/s2053230x18005253

4. Kazmin D, Edwards RA, Turner RJ, Larson E, Starkey J. 2002. Visualization of Proteins in Acrylamide Gels Using Ultraviolet Illumination. Analytical Biochemistry. 301(1):91-96. https://doi.org/10.1006/abio.2001.5488

5. Ladner CL, Yang J, Turner RJ, Edwards RA. 2004. Visible fluorescent detection of proteins in polyacrylamide gels without staining. Analytical Biochemistry. 326(1):13-20. https://doi.org/10.1016/j.ab.2003.10.047

6. Ladner-Keay CL, Turner RJ, Edwards RA. 2018. Fluorescent Protein Visualization Immediately After Gel Electrophoresis Using an In-Gel Trichloroethanol Photoreaction with Tryptophan.179-190. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-8745-0_22