Inicio Productos Biología de las proteínas Anticuerpos: primarios, secundarios y recombinantes monoclonalesAnticuerpos secundarios

Anticuerpos secundarios

Figura 2.Micrografías fluorescentes de células mitóticas de pulmón de tritón. Microtúbulos teñidos con Monoclonal Anti-^.

Aplicaciones de los anticuerpos secundarios

Los anticuerpos secundarios se utilizan en muchas aplicaciones, entre las que se incluyen:

Immunopurificación
ELISA
Western blotting
Inmunohistoquímica
Ensayos basados en células
Citometría de flujo

Inmunohistoquímica.

Sección congelada de nervio óptico de rata teñida con Mouse Anti-neurofilament H y CF568 Goat Anti-Mouse (procesos neuronales, rojo), Rabbit Anti-GFAP y CF488A Goat Anti-Rabbit, altamente adsorbidos en cruz (células gliales, verde). Los núcleos se tiñen con RedDot2 (cian).

Figura 3.Inmunocitoquímica. Sección congelada de nervio óptico de rata teñida con Mouse Anti-neurofilament H y CF568 Goat Anti-Mouse (procesos neuronales, rojo), Rabbit Anti-GFAP y CF488A Goat Anti-Rabbit, altamente adsorbidos (células gliales, verde). Los núcleos se tiñen con RedDot2 (cian).

Anticuerpos conjugados y sondas

Ofrecemos una amplia cartera de anticuerpos conjugados. Un anticuerpo conjugado es un anticuerpo monoclonal o policlonal unido a una etiqueta y utilizado para la detección en una amplia gama de técnicas de ensayo. La utilidad específica de un anticuerpo secundario depende de su(s) sonda(s) conjugada(s). Las sondas son moléculas que soportan diversas tecnologías de detección. Los sistemas de detección más comunes para anticuerpos secundarios conjugados son colorimétricos o fluorescentes.

Los ensayos colorimétricos se basan típicamente en el uso de fosfatasa alcalina (ALP) o peroxidasa de rábano picante (HRP) o sus derivados. El sistema de unión del conjugado de biotina avidina (estreptavidina) se utiliza a menudo para amplificar la señal colorimétrica de la ALP o la HRP. Los ensayos fluorescentes más comunes utilizan isotiocianato de fluoresceína (FITC), rodamina o su derivado, isotiocianato de tetrametilrhodamina (TRITC), cianina (Cy3) o ficoeritrina (R-PE).

Ofrecemos anticuerpos conjugados unidos a una variedad de etiquetas colorimétricas y fluorescentes para su uso en aplicaciones de detección, purificación, clasificación y microscopía. Los anticuerpos conjugados se producen en una variedad de animales hospedadores, lo que los hace compatibles con una amplia gama de reactivos inmunoquímicos. Para aquellos usuarios cuya investigación requiera el etiquetado de sus propios reactivos, ofrecemos kits de etiquetado de anticuerpos para la conjugación de diversas etiquetas (biotina, FITC, etiquetas CF™) con anticuerpos monoclonales y policlonales.

Etiquetas de anticuerpos conjugados.

Proteínas A, G y L

La proteína A procede del Staphylococcus aureus. La proteína G procede de una especie de Streptococcus. Ambas tienen sitios de unión para la porción Fc de la IgG de mamífero. La afinidad de estas proteínas por la IgG varía según la especie animal. La proteína G tiene una mayor afinidad por las IgG de rata, cabra, oveja y bovino, así como por la IgG1 de ratón y la IgG3 humana. La proteína A tiene una mayor afinidad por las IgG de gato y cobaya (Tabla 1). Además de los sitios de unión a Fc de IgG, la proteína G nativa contiene sitios de unión a albúmina, la región Fab de Igs y regiones de unión a membrana, que pueden dar lugar a tinciones inespecíficas. Estos problemas se han abordado mediante la creación de formas recombinantes de la proteína. La proteína G recombinante se ha diseñado para eliminar la región de unión a la albúmina, y la proteína G′ recombinante es una proteína truncada que carece de los sitios de unión a la albúmina, Fab y membrana, mientras que conserva el sitio de unión Fc, por lo que es más específica para IgG que la forma nativa.

Cuadro 1.Capacidades de unión de las proteínas A, G y L a diversas especies.
Especies	Immunoglobulina	Fijación - Proteína A1-4	Fijación - Proteína G5-8	Fijación - Proteína L9-10
Humanos	lgG (normal)	++++	++++	++++
	lgG1	++++	++++	++++
	lgG2	++++	++++	++++
	lgG3	-	++++	++++
	lgG4	++++	++++	++++	++++++++
	lgM	-	-	++++
	lgA	-	-	++++
	lgE	-	-	++++
	lgD	-	-	++++
	Fab	++	++	++++
	k cadenas ligeras	-	-	++++
	L cadenas ligeras	-	-	-
	ScFv	++	-	++++
Ratón	lgG1	+	++++	++++
	lgG2a	++++	++++	++++	++++
	lgG2b	+++	+++	++++
	lgG3	++	+++	++++
Rata	lgG1	-	+	++++
		-	++++	++++
	lgG2b	-	++	++++
	lgG2c	+	++	++++
Bovino	lgG	++	++++	-
Gato	lgG	++++	-	N/A
Pollo	lgG	-	+	++
Perro	lgG	++++	++++	+
Cabra	lgG	+/-	++	-	-
Conejillo de Indias	lgG	++++	++	++
Hámster	lgG	+	++	++++
Caballo	lgG	++	++++	+/-
Cerdo	lgG	+++	+++	++++
Conejo	lgG	++++	+++	+
Oveja	lgG	+/-	++	-
Cabe señalar que la proteína L está restringida a subclases específicas del dominio VL. Así pues, la afinidad indicada en la tabla no es general para la subclase lgG, sino que corresponde únicamente a los anticuerpos portadores de la cadena ligera kappa correcta.

La proteína L, de Peptostreptococcus magnus, tiene afinidad por las cadenas ligeras kappa (Tabla 2) de varias especies. Detectará IgG, IgA e IgM monoclonales o policlonales, así como Fab, F(ab′)2 y fragmentos recombinantes de Fv de cadena única (scFv) que contengan cadenas ligeras kappa. También se unirá a la IgG de pollo. Nota: Las especies como bovino, cabra, oveja y caballo cuyas Igs contienen casi exclusivamente cadenas lambda no se unirán bien, si es que lo hacen, a la Proteína L.

Proteína L.

Tabla 2.Unión de la proteína L a diversas cadenas ligeras de inmunoglobulina.
Especies	Fijación a la proteína L
Kappa humana I	Fijación a la proteína L++++
Kappa humana II	-
Kappa humana III	++++
Kappa humana IV	++++
Kappa humana I-IV	-
Esta tabla no pretende ser completa, sino que sólo cubre los subgrupos kappa conocidos en los que se ha probado la unión de la Proteína L. Debe tenerse en cuenta que la proteína L está restringida a subclases específicas del dominio VL. Por lo tanto, la afinidad indicada en la tabla no es general para la subclase IgG, sino que sólo tiene en cuenta los anticuerpos que llevan la cadena ligera kappa correcta.

Reactivos de detección

Las proteínas A y G se utilizan como reactivo general, no específico de especie, para la unión de anticuerpos primarios o IgG de superficie en tejidos de mamíferos. La proteína G se recomienda para la mayoría de las especies, incluidos el ratón y la rata. La proteína A se recomienda para gato y cobaya. Ninguna de las dos se recomienda para la detección de IgA o IgM, para la detección de fragmentos Fab o para la detección de IgG aviar. Cuando se unen a una resina como la agarosa, la proteína A y la proteína G pueden utilizarse para purificar por afinidad inmunoglobulinas a partir de suero o líquido de ascitis.

La proteína L se utiliza como reactivo general para unir anticuerpos primarios de mamífero o aviar o Igs de superficie de todas las clases. Especialmente útil para la detección de fragmentos Fab, F(ab′)₂ y fragmentos scFv recombinantes, para la detección de Igs unidas a receptores Fc o para la detección de anticuerpos monoclonales en presencia de Igs bovinas. Su uso está limitado a la detección de Igs que lleven cadenas ligeras kappa.

Resinas

La proteína A y la proteína G tienen sitios de unión para la porción Fc de la IgG de mamífero. La capacidad de estas proteínas para las IgG varía con la especie. En general, las IgG tienen una mayor afinidad por la proteína G que por la proteína A, y la proteína G puede unirse a IgG de una mayor variedad de especies. La afinidad de varias subclases de IgG, especialmente de ratón y humanas, por la Proteína A varía más que por la Proteína G. Por lo tanto, la Proteína A puede utilizarse para preparar IgG isotípicamente puras de algunas especies. La proteína L es adecuada para aislar anticuerpos monoclonales de ratón a partir de sobrenadantes de cultivos celulares sin contaminación por IgG bovina.

Proteína G.

Células HeLa teñidas con Mouse-Anti-tubulina y anticuerpo secundario CF488A Goat Anti-Mouse (microtúbulos, verde). Los filamentos de actina se tiñen con faloidina CF640R (púrpura). Los núcleos están teñidos con DAPI (azul).

Figura 4.Colorante CF™. Células HeLa teñidas con Mouse-Anti-tubulina y anticuerpo secundario CF488A Goat Anti-Mouse (microtúbulos, verde). Los filamentos de actina se tiñen con faloidina CF640R (púrpura). Los núcleos están teñidos con DAPI (azul).

Anticuerpos Etiquetados con Colorantes CF™

Los colorantes CF™ son una serie de colorantes fluorescentes altamente solubles en agua que abarcan el espectro visible e infrarrojo cercano (IR cercano) para el etiquetado de anticuerpos. Desarrollados por científicos que utilizan productos químicos innovadores, el brillo, la fotoestabilidad y la selección de colores de los colorantes CF™ rivalizan con la calidad de otros colorantes comerciales como resultado de un diseño racional de los colorantes.

Ofrecemos anticuerpos secundarios marcados con colorantes CF™ altamente validados en una variedad de opciones específicas para cada especie.

Cuerpos secundarios marcados con colorantes CF™.

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