Badania sterylności

Procedury badania sterylności stosuje się w odniesieniu do produktów w wielu branżach, w tym w przemyśle spożywczym i napojowym, jednak głównymi branżami są sektor farmaceutyczny i medyczny, gdzie badanie sterylności produktów pozostaje kluczowym i rutynowym zadaniem mikrobiologów.

• Metody badania sterylności w przemyśle farmaceutycznym
• Metody badania sterylności wyrobów medycznych
• Przebieg badania sterylności

Metody badania sterylności produktów farmaceutycznych

Metody farmakopealne stosowane w badaniach sterylności produktów farmaceutycznych wymagają hodowli próbek w dwóch oddzielnych pożywkach. W badaniach sterylności stosuje się dwa różne rodzaje pożywek hodowlanych, aby sprzyjać rozwojowi resztkowych bakterii beztlenowych, a także bakterii tlenowych i grzybów. Płynna pożywka tioglikolanowa (FTM) jest zazwyczaj stosowana do hodowli bakterii beztlenowych i niektórych bakterii tlenowych, natomiast pożywka sojowo-kazeinowa (SCDM) jest zazwyczaj stosowana do hodowli grzybów i bakterii tlenowych. Przed badaniem próbki inkubuje się przez 14 dni w temperaturze odpowiednio 32,5 °C i 22,5 °C. Jakiekolwiek zmętnienie w pożywkach hodowlanych może wskazywać na wzrost i musi zostać zbadane. Istnieją dwie zalecane metody badania sterylności produktów farmaceutycznych: filtracja membranowa i bezpośrednie zaszczepianie.

Badanie sterylności metodą filtracji membranowej

Badanie sterylności metodą filtracji membranowej jest preferowaną metodą regulacyjną dla produktów farmaceutycznych podlegających filtracji, zgodnie z USP <71>, Farmakopeą UE < 2.6.1> i Farmakopeą JP <4.06>. Próbki przepuszcza się przez filtr membranowy o wielkości porów 0,45 µm w pojemniku filtracyjnym, a następnie dodaje się pożywkę w celu inkubacji. Ta metoda badania sterylności może zapewnić większą czułość w porównaniu z innymi metodami, ponieważ cała próbka lub próbka złożona jest przepuszczana przez jeden filtr. Filtracja daje również możliwość wypłukania składników próbki, które mogą powodować zmętnienie lub hamować wzrost, takich jak antybiotyki lub środki konserwujące.

Badanie sterylności metodą bezpośredniego zaszczepiania

W przypadku bezpośredniego zaszczepiania niewielką objętość próbki pobiera się aseptycznie z jednostki próbkowania i zaszczepia bezpośrednio do odpowiedniej objętości pożywki przed inkubacją. Chociaż metoda ta jest prosta, może mieć pewne istotne ograniczenia. Do pożywki hodowlanej można zaszczepić tylko niewielkie objętości produktu, co ogranicza czułość badania. Jeśli po zaszczepieniu próbka wydaje się mętna lub zmętniona, wykrycie zmętnienia spowodowanego wzrostem mikroorganizmów pod koniec okresu inkubacji może być trudne. Ponadto, jeśli produkt ma właściwości przeciwbakteryjne, próbkę należy zneutralizować, aby nie hamować wzrostu mikroorganizmów.

Metody badania sterylności wyrobów medycznych

Do badania sterylności wyrobów medycznych zaleca się stosowanie metody bezpośredniego przenoszenia. Badany wyrób pozostaje w bezpośrednim kontakcie z pożywką testową przez cały okres inkubacji, podczas którego wszelkie mikroorganizmy znajdujące się w wyrobie lub na jego powierzchni będą rosnąć i namnażać się. Ponadto w przypadku produktów z rurkami, takich jak zestawy do transfuzji i infuzji, w których droga przepływu płynu jest oznaczona jako sterylna, preferowane jest badanie sterylności metodą przepłukiwania produktu. Światło produktu przepłukuje się płynem płuczącym, eluat filtruje się przez membranę i umieszcza w odpowiednim podłożu do inkubacji.

Przebieg badania sterylności

1. Przygotowanie do badania — umieść rurkę urządzenia do filtracji membranowej w pompie

2. Wstępne zwilżenie filtra — należy wstępnie zwilżyć urządzenie do filtracji membranowej, aby zoptymalizować filtrację i zminimalizować wiązanie produktu z filtrem.

3. Filtracja próbki — przefiltrować równą ilość produktu do obu pojemników. Mikroorganizmy są zatrzymywane przez filtr o wielkości porów 0,45 µm.

4. Płukanie — wszystkie związki hamujące są wypłukiwane przy użyciu odpowiedniego roztworu (roztworów) płuczącego.

5. Napełnianie pożywek hodowlanych — Urządzenia do filtracji membranowej napełnia się sterylnymi pożywkami hodowlanymi TSB i FTM.

6. Czas inkubacji — 14 dni.

7. Końcowe wyniki badania — wizualna kontrola zmętnienia / braku zmętnienia.