Western Blotting
Western blotting to ugruntowana technika analityczna służąca do wykrywania, analizy i ilościowego oznaczania białek. Metoda ta jest szeroko stosowana do wykrywania określonych cząsteczek białek w złożonych próbkach, takich jak homogenaty tkankowe i lizaty komórkowe. Western blotting zazwyczaj obejmuje separację białek za pomocą elektroforezy żelowej, a następnie przeniesienie ich na membranę z polifluorku winylidenu (PVDF) lub nitrocelulozy. Po przeniesieniu białek można je wybarwić w celu wizualizacji i bezpośrednio zidentyfikować za pomocą sekwencjonowania N-końcowego, spektrometrii masowej lub immunodetekcji.
Powiązane produkty
Nagrodzone kategorie
Wybieraj spośród różnych membran PVDF Immobilon®, aby uzyskać optymalną wydajność Western blotting i immunoblottingu białek w oparciu o rozmiar białka docelowego, zastosowanie, metodę wykrywania i wygodę.
Podnieś poziom badań w naukach przyrodniczych dzięki narzędziom do wykrywania białek opartym na enzymach. Zapoznaj się z naszą ofertą substratów i enzymów do testów ELISA, IHC, WB i innych.
Prefabrykowane poliakrylamidowe żele białkowe, bufory robocze i odczynniki do ręcznego wylewania żeli poliakrylamidowych do elektroforezy białek w żelach PAGE i SDS-PAGE.
W immunodetekcji Western blot białka są identyfikowane poprzez ich wiązanie ze specyficznymi przeciwciałami. Zazwyczaj przeciwciało pierwotne jest stosowane w połączeniu z przeciwciałem wtórnym sprzężonym z HRP lub AP do wykrywania chemiluminescencyjnego lub kolorymetrycznego przy użyciu odpowiedniego substratu. Alternatywnie, do bezpośredniej wizualizacji można użyć fluorescencyjnie znakowanego przeciwciała pierwotnego lub wtórnego.
Western blotting jest szeroko stosowany w biochemii do wykrywania obecności określonych białek, do określania zakresu modyfikacji potranslacyjnych, do weryfikacji ekspresji białek w zastosowaniach klonowania, do analizy poziomów ekspresji białek i biomarkerów, w mapowaniu epitopów przeciwciał oraz do testowania markerów chorób w warunkach klinicznych.
Potrzeba jednoczesnej analizy większej liczby białek w ograniczonych próbkach doprowadziła do ciągłych badań nad poprawą czułości i szybkości technik blottingu. Podwójne blotowanie eliminuje fałszywie pozytywne wyniki spowodowane niespecyficznymi interakcjami. Blotting daleko-zachodni umożliwia wykrywanie specyficznych interakcji białko-białko. Southwestern blotting służy do identyfikacji białek, które oddziałują z określonymi sekwencjami DNA. Multistrip blotting zwiększa przepustowość, jednocześnie minimalizując zmienność między blotami. Nowe technologie są opracowywane w celu zmniejszenia ilości białka wymaganego do wytworzenia sygnału i poprawy możliwości ilościowych Western blotting.
Przepływ pracy
Elektroforeza żelowa
Elektroforeza żelowa białek służy do oddzielania i rozdzielania białek przed blottingiem. Przygotowana mieszanina białek jest poddawana działaniu żelu poliakrylamidowego w celu sortowania białek według masy cząsteczkowej i ładunku.
Transfer do membrany
Białka rozdzielone na żelu w procesie elektroforezy są unieruchamiane poprzez przeniesienie na membranę PVDF lub nitrocelulozową. Transfer wykorzystuje prąd elektryczny do ściągnięcia białek z żelu na membranę (elektroblotting).
Wykrywanie
Białko docelowe jest wykrywane przy użyciu przeciwciała pierwszorzędowego w połączeniu z przeciwciałem drugorzędowym sprzężonym z HRP lub AP i odpowiednim substratem chemiluminescencyjnym lub kolorymetrycznym, lub przy użyciu fluorescencyjnie znakowanego przeciwciała pierwszorzędowego lub drugorzędowego.
Odwiedź naszą wyszukiwarkę dokumentów, aby znaleźć arkusze danych, certyfikaty i dokumentację techniczną.
Powiązane artykuły
- Explore the basics of working with antibodies including technical information on structure, classes, and normal immunoglobulin ranges.
- Oferujemy szeroką gamę enzymów fosfatazy alkalicznej i substratów, które są zoptymalizowane pod kątem koniugacji z przeciwciałami i innymi białkami dla konkretnych potrzeb aplikacyjnych.
- Kontrole ładowania w aplikacji western blotting.
- Gelatin is a heterogeneous mixture of water-soluble proteins extracted by boiling skin, tendons, ligaments, bones, etc. in the water.
- Rozwiązywanie problemów z transferem białek w Western blotting poprzez zrozumienie przyczyn i optymalizację warunków transferu.
- Zobacz wszystkie (44)
Powiązane protokoły
- Protokół przygotowania próbki do lizy komórek i wydajnej ekstrakcji białek z hodowanych tkanek i komórek do późniejszego Western blottingu.
- Protokół Western blot szczegółowo opisuje przenoszenie białek z żeli na nitrocelulozę, co ma kluczowe znaczenie dla procedur immunoblottingu w badaniach naukowych.
- BCIP/NBT substrate produces stable, intense color for alkaline phosphatase assays, ideal for visual observation.
- This page describes chemiluminescence detection of GST-tagged proteins with Amersham ECL, Amersham ECL Prime, and Amersham ECL Select from Cytiva.
- The SNAP i.d. 2.0 Protein Detection System is the second generation of the SNAP i.d. method for detecting immunoreactive proteins on Western blots.
- Zobacz wszystkie (21)
Znajdź więcej artykułów i protokołów
Jak możemy pomóc
W przypadku jakichkolwiek pytań, prosimy o przesłanie prośby o wsparcie klienta
lub rozmowę z naszym zespołem obsługi klienta:
Email [email protected]
lub zadzwoń +1 (800) 244-1173
Dodatkowe wsparcie
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Kalkulatory i aplikacje
Web Toolbox - narzędzia naukowe i zasoby dla chemii analitycznej, nauk przyrodniczych, syntezy chemicznej i materiałoznawstwa.
- Customer Support Request
Obsługa klienta, w tym pomoc przy zamówieniach, produktach, kontach i kwestiach technicznych związanych z witryną.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Nie masz konta użytkownika?Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim.