[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Zastosowania reakcji łańcuchowej polimerazy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/pcr)HighPrep™ Zestaw do oczyszczania PCR i protokół systemu oczyszczania # HighPrep™ Zestaw do oczyszczania PCR i protokół systemu oczyszczania ## Kulki do oczyszczania PCR i zestaw do konstruowania bibliotek po PCR i NGS System oczyszczania PCR HighPrep™ wykorzystuje chemię opartą na kulkach magnetycznych bez wirowania lub filtracji w prostej 3-etapowej procedurze, która obejmuje etap wiązania, płukania i elucji. Po dodaniu HighPrep™ PCR do próbki reakcji PCR, protokół wykorzystuje płytkę magnetyczną (stojak magnetyczny) do przetwarzania próbki reakcji PCR. Podczas tego procesu zanieczyszczenia i sole są wymywane, a czyste DNA jest eluowane i gotowe do użycia w kolejnych zastosowaniach. ## HighPrep™ Materiały do protokołu PCR __HighPrep™ Zestaw do oczyszczania PCR__ - HighPrep™ Roztwór kulek paramagnetycznych do PCR - Przechowywać w temperaturze 4 °C. NIE ZAMRAŻAĆ. Odczynnik HighPrep™ PCR jest stabilny przez 12 miesięcy, gdy jest przechowywany w temperaturze 4 °C. - Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep™ PCR, aby ponownie zawiesić kulki przed użyciem. __Sprzęt i odczynniki dostarczane przez użytkownika:__ - 80% etanol (przygotowany z niedenaturowanego etanolu) - 10mM TRIS-HCL pH 8.0 (Elucja DNA) - Woda odczynnikowa - 1mM EDTA __Płytka reakcyjna:__ - Dla formatu 96-dołkowego, użyj 96-dołkowej płytki reakcyjnej - Dla formatu 384-dołkowego, użyj 384-dołkowej płytki reakcyjnej __Specyfikacje produktu__ Nr kat. Nr Opis produktuNo. reakcjiwarunki przechowywania AC-60005HighPrep™ PCR (5 mL)2784-8 °C NIE ZAMRAŻAĆ AC-60050HighPrep™ PCR (50 mL)2,776 AC-60250HighPrep™ PCR (250 mL)13,890 AC-60500HighPrep™ PCR (500 mL)27,780 Liczba reakcji jest oparta na typowej objętości reakcji PCR wynoszącej 10 µl. Objętość odczynnika HighPrep™ PCR na reakcję = 1.8 x (objętość reakcji PCR) ## HighPrep™ PCR 96-Well Protocol Przed użyciem należy doprowadzić odczynnik HighPrep™ PCR do temperatury pokojowej na co najmniej 30 minut. 1. Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep™ PCR, aby całkowicie zawiesić kulki magnetyczne. 2. Przenieść reakcję PCR na odpowiednią 96-dołkową płytkę. 3. Dla reakcji 50µl, dostosować objętość przy użyciu sterylnej wody. . | | | |---------------------------|------------------------------------------| | Objętość reakcji PCR (µL) | Objętość reakcji PCR HighPrep™ przy 1.8X | | 10 | 18 | | 20 | 36 | | 50 | 90 | Formuła używana do obliczania objętości odczynnika HighPrep™ PCR potrzebnego do reakcji PCR: HighPrep™ Objętość odczynnika PCR na reakcję = 1,8 X objętość reakcji PCR. 4. Dodaj odczynnik HighPrep™ PCR zgodnie z objętością reakcji PCR. 5. Patrz tabela poniżej, aby określić odpowiednią objętość. 6. Dokładnie wymieszaj odczynnik HighPrep™ PCR i próbkę PCR, mieszając pipetą w górę i w dół 6-8 razy. 7. Inkubuj mieszaninę przez 5 minut w temperaturze pokojowej. 8. Umieść płytkę z próbką na urządzeniu do separacji magnetycznej 96 na 3 minuty lub do momentu oczyszczenia roztworu. Kulki będą przyciągane do boku studzienki. 9. Z płytką z próbką nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie. __WAŻNE: Nie przeszkadzaj przyciąganym kulkom podczas zasysania supernatantu.__ 10. Po umieszczeniu płytki z próbką na magnesie, dodaj 200 µl 80% etanolu do każdego dołka i inkubuj przez 30 sekund w temperaturze pokojowej. 11. Po umieszczeniu płytki nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie. 12. Powtórzyć kroki 8-9 dla łącznie dwóch płukań 80% etanolem. 13. Suszyć kulki przez inkubację płytki przez 10-15 minut w temperaturze pokojowej z płytką nadal na urządzeniu do separacji magnetycznej. __WAŻNE: Krytyczne jest całkowite usunięcie wszystkich śladów alkoholu, ale należy zachować ostrożność, aby nie przesuszyć kulek, ponieważ zmniejszy to wydajność.__ 14. Usuń płytkę z próbką z urządzenia do separacji magnetycznej. Dodaj 40 µl buforu elucyjnego (woda klasy odczynnikowej, TRIS-HCl pH 8,0 lub bufor TE) do każdego dołka i pipetuj w górę i w dół 5 razy, aby wymieszać. Wstępne ogrzanie buforu elucyjnego w temperaturze 55°C może zwiększyć wydajność. 15. Inubuj przez 2 minuty w temperaturze pokojowej. 16. Umieść płytkę z próbkami z powrotem na urządzeniu do separacji magnetycznej i odczekaj 3 minuty lub do momentu, aż kulki magnetyczne zostaną usunięte z roztworu. 17. Przenieś eluat (oczyszczony supernatant) na nową płytkę do przechowywania lub do kolejnych zastosowań. ## HighPrep™ PCR 384-Well Protocol 1. Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep™ PCR, aby w pełni zawiesić kulki magnetyczne. 2. Przenieś reakcję PCR do odpowiedniej płytki 384-dołkowej. W przypadku reakcji 50 µl, dostosuj objętość za pomocą sterylnej wody. 3. Dodaj objętość odczynnika HighPrep™ PCR zgodnie z reakcją PCR . | | | |---------------------------|------------------------------------------| | Objętość reakcji PCR (µL) | Objętość reakcji PCR HighPrep™ przy 1.8X | | 5 | 9 | | 7 | 12 | | 10 | 18 | Formuła używana do obliczania objętości odczynnika HighPrep™ PCR potrzebnej do reakcji PCR: Objętość odczynnika HighPrep™ na reakcję = 1,8 X objętość reakcji PCR. 4. Patrz tabela poniżej, aby określić odpowiednią objętość. 5. Dokładnie wymieszaj odczynnik HighPrep™ PCR i próbkę PCR, mieszając pipetując w górę i w dół 6-8 razy. 6. Inkubować mieszaninę przez 5 minut w temperaturze pokojowej. 7. Umieścić płytkę z próbką na urządzeniu do separacji magnetycznej 384 na 2 minuty lub do momentu oczyszczenia roztworu. Kulki zostaną przyciągnięte do boku studzienki. 8. Z płytką z próbką nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie. __WAŻNE: Nie przeszkadzaj przyciągniętym kulkom podczas odsysania supernatantu.__ 09. Po umieszczeniu płytki z próbką na magnesie, dodaj 30 µl 80% etanolu do każdego dołka i inkubuj przez 30 sekund w temperaturze pokojowej. 10. Po umieszczeniu płytki nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie. 11. Powtórzyć kroki 8-9 dla łącznie dwóch płukań 80% etanolem. 12. Suszyć kulki przez inkubację płytki przez 3-5 minut w temperaturze pokojowej z płytką nadal na urządzeniu do separacji magnetycznej. __WAŻNE: Krytyczne jest całkowite usunięcie wszystkich śladów alkoholu, ale należy zachować ostrożność, aby nie przesuszyć kulek, ponieważ zmniejszy to wydajność.__ 13. Usuń płytkę z próbką z urządzenia do separacji magnetycznej. Dodaj 30 µl buforu elucyjnego (woda klasy odczynnikowej, TRIS-HCl pH 8,0 lub bufor TE) do każdego dołka i pipetuj w górę i w dół 5 razy, aby wymieszać. Wstępne ogrzanie buforu elucyjnego w temperaturze 55°C może zwiększyć wydajność. 14. Inubuj przez 2 minuty w temperaturze pokojowej. 15. Umieść płytkę z próbkami z powrotem na urządzeniu do separacji magnetycznej i odczekaj 2 minuty lub do momentu, aż kulki magnetyczne zostaną usunięte z roztworu. 16. Przenieść eluat (oczyszczony supernatant) na nową płytkę do przechowywania lub do kolejnych zastosowań. ## Materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 __Powiązane artykuły__ - [Niestandardowe oligole cGMP](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/campaigns/cgmp-oligos) - [Projektowanie testów PCR/qPCR/dPCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/pcr/pcr-qpcr-dpcr-assay-design) - [Rozwiązywanie problemów z klonowaniem](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/troubleshooting-for-molecular-cloning) - [Optymalizacja i walidacja testów PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/assay-optimization-and-validation) - [PCR kolonii](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/colony-pcr) - [Oligonukleotydy na zamówienie zgodne z normami GMP](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/custom-cgmp-oligos) - [Niestandardowe startery LAMP we współpracy z New England Biolabs](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/custom-lamp-primers) - [Synteza oligonukleotydów DNA](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/dna-oligonucleotide-synthesis) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured.