HighPrep^™ Zestaw do oczyszczania PCR i protokół systemu oczyszczania

Kulki do oczyszczania PCR i zestaw do konstruowania bibliotek po PCR i NGS

System oczyszczania PCR HighPrep^™ wykorzystuje chemię opartą na kulkach magnetycznych bez wirowania lub filtracji w prostej 3-etapowej procedurze, która obejmuje etap wiązania, płukania i elucji. Po dodaniu HighPrep^™ PCR do próbki reakcji PCR, protokół wykorzystuje płytkę magnetyczną (stojak magnetyczny) do przetwarzania próbki reakcji PCR. Podczas tego procesu zanieczyszczenia i sole są wymywane, a czyste DNA jest eluowane i gotowe do użycia w kolejnych zastosowaniach.

HighPrep^™ Materiały do protokołu PCR

HighPrep^™ Zestaw do oczyszczania PCR

• HighPrep^™ Roztwór kulek paramagnetycznych do PCR
• Przechowywać w temperaturze 4 °C. NIE ZAMRAŻAĆ. Odczynnik HighPrep^™ PCR jest stabilny przez 12 miesięcy, gdy jest przechowywany w temperaturze 4 °C.
• Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep^™ PCR, aby ponownie zawiesić kulki przed użyciem.

Sprzęt i odczynniki dostarczane przez użytkownika:

• 80% etanol (przygotowany z niedenaturowanego etanolu)
• 10mM TRIS-HCL pH 8.0 (Elucja DNA)
• Woda odczynnikowa
• 1mM EDTA

Płytka reakcyjna:

• Dla formatu 96-dołkowego, użyj 96-dołkowej płytki reakcyjnej
• Dla formatu 384-dołkowego, użyj 384-dołkowej płytki reakcyjnej

Specyfikacje produktu

Liczba reakcji jest oparta na typowej objętości reakcji PCR wynoszącej 10 µl. Objętość odczynnika HighPrep^™ PCR na reakcję = 1.8 x (objętość reakcji PCR)

HighPrep^™ PCR 96-Well Protocol

Przed użyciem należy doprowadzić odczynnik HighPrep^™ PCR do temperatury pokojowej na co najmniej 30 minut.

1. Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep^™ PCR, aby całkowicie zawiesić kulki magnetyczne.
2. Przenieść reakcję PCR na odpowiednią 96-dołkową płytkę.
3. Dla reakcji 50µl, dostosować objętość przy użyciu sterylnej wody.

.

Formuła używana do obliczania objętości odczynnika HighPrep^™ PCR potrzebnego do reakcji PCR: HighPrep^™ Objętość odczynnika PCR na reakcję = 1,8 X objętość reakcji PCR.

4. Dodaj odczynnik HighPrep^™ PCR zgodnie z objętością reakcji PCR.
5. Patrz tabela poniżej, aby określić odpowiednią objętość.
6. Dokładnie wymieszaj odczynnik HighPrep^™ PCR i próbkę PCR, mieszając pipetą w górę i w dół 6-8 razy.
7. Inkubuj mieszaninę przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
8. Umieść płytkę z próbką na urządzeniu do separacji magnetycznej 96 na 3 minuty lub do momentu oczyszczenia roztworu. Kulki będą przyciągane do boku studzienki.
9. Z płytką z próbką nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie.

WAŻNE: Nie przeszkadzaj przyciąganym kulkom podczas zasysania supernatantu.

10. Po umieszczeniu płytki z próbką na magnesie, dodaj 200 µl 80% etanolu do każdego dołka i inkubuj przez 30 sekund w temperaturze pokojowej.
11. Po umieszczeniu płytki nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie.
12. Powtórzyć kroki 8-9 dla łącznie dwóch płukań 80% etanolem.
13. Suszyć kulki przez inkubację płytki przez 10-15 minut w temperaturze pokojowej z płytką nadal na urządzeniu do separacji magnetycznej.

WAŻNE: Krytyczne jest całkowite usunięcie wszystkich śladów alkoholu, ale należy zachować ostrożność, aby nie przesuszyć kulek, ponieważ zmniejszy to wydajność.

14. Usuń płytkę z próbką z urządzenia do separacji magnetycznej. Dodaj 40 µl buforu elucyjnego (woda klasy odczynnikowej, TRIS-HCl pH 8,0 lub bufor TE) do każdego dołka i pipetuj w górę i w dół 5 razy, aby wymieszać. Wstępne ogrzanie buforu elucyjnego w temperaturze 55°C może zwiększyć wydajność.
15. Inubuj przez 2 minuty w temperaturze pokojowej.
16. Umieść płytkę z próbkami z powrotem na urządzeniu do separacji magnetycznej i odczekaj 3 minuty lub do momentu, aż kulki magnetyczne zostaną usunięte z roztworu.
17. Przenieś eluat (oczyszczony supernatant) na nową płytkę do przechowywania lub do kolejnych zastosowań.

HighPrep^™ PCR 384-Well Protocol

1. Dokładnie wstrząśnij odczynnikiem HighPrep™ PCR, aby w pełni zawiesić kulki magnetyczne.
2. Przenieś reakcję PCR do odpowiedniej płytki 384-dołkowej. W przypadku reakcji 50 µl, dostosuj objętość za pomocą sterylnej wody.
3. Dodaj objętość odczynnika HighPrep™ PCR zgodnie z reakcją PCR

.

Formuła używana do obliczania objętości odczynnika HighPrep™ PCR potrzebnej do reakcji PCR: Objętość odczynnika HighPrep™ na reakcję = 1,8 X objętość reakcji PCR.

4. Patrz tabela poniżej, aby określić odpowiednią objętość.
5. Dokładnie wymieszaj odczynnik HighPrep™ PCR i próbkę PCR, mieszając pipetując w górę i w dół 6-8 razy.
6. Inkubować mieszaninę przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
7. Umieścić płytkę z próbką na urządzeniu do separacji magnetycznej 384 na 2 minuty lub do momentu oczyszczenia roztworu. Kulki zostaną przyciągnięte do boku studzienki.
8. Z płytką z próbką nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie.

WAŻNE: Nie przeszkadzaj przyciągniętym kulkom podczas odsysania supernatantu.

9. Po umieszczeniu płytki z próbką na magnesie, dodaj 30 µl 80% etanolu do każdego dołka i inkubuj przez 30 sekund w temperaturze pokojowej.
10. Po umieszczeniu płytki nadal na magnesie, usuń i wyrzuć supernatant przez pipetowanie.
11. Powtórzyć kroki 8-9 dla łącznie dwóch płukań 80% etanolem.
12. Suszyć kulki przez inkubację płytki przez 3-5 minut w temperaturze pokojowej z płytką nadal na urządzeniu do separacji magnetycznej.

WAŻNE: Krytyczne jest całkowite usunięcie wszystkich śladów alkoholu, ale należy zachować ostrożność, aby nie przesuszyć kulek, ponieważ zmniejszy to wydajność.

13. Usuń płytkę z próbką z urządzenia do separacji magnetycznej. Dodaj 30 µl buforu elucyjnego (woda klasy odczynnikowej, TRIS-HCl pH 8,0 lub bufor TE) do każdego dołka i pipetuj w górę i w dół 5 razy, aby wymieszać. Wstępne ogrzanie buforu elucyjnego w temperaturze 55°C może zwiększyć wydajność.
14. Inubuj przez 2 minuty w temperaturze pokojowej.
15. Umieść płytkę z próbkami z powrotem na urządzeniu do separacji magnetycznej i odczekaj 2 minuty lub do momentu, aż kulki magnetyczne zostaną usunięte z roztworu.
16. Przenieść eluat (oczyszczony supernatant) na nową płytkę do przechowywania lub do kolejnych zastosowań.