[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content)
[](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)
Produkty
Koszyk0
PLPL
Produkty
ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie
[Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in)
[Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup)
[Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order)
Koszyk0
[Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Zastosowania reakcji łańcuchowej polimerazy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/pcr)Standardowy protokół odwrotnej transkrypcji
# Standardowy protokół odwrotnej transkrypcji
### Odwrotna transkrypcja
Odwrotna transkrypcja (RT) to proces przekształcania RNA w cDNA przy użyciu enzymu odwrotnej transkryptazy i dNTP.
Etap RT może być wykonywany na całkowitym RNA, dzięki czemu wytwarzany jest globalny cDNA, który jest reprezentatywny dla wszystkich transkryptów RNA w próbce (zwykle za pomocą protokołu dwuetapowego) lub w podejściu specyficznym dla genu, w którym tylko RNA będący przedmiotem zainteresowania jest przekształcany w cDNA (zwykle zgodnie z protokołem jednoetapowym).
Poniższe eksperymenty można wykorzystać jako podstawowe protokoły RT, które można modyfikować w celu spełnienia określonych wymagań. Zwyczajowo albo przygotowuje się cDNA przy użyciu dwuetapowego procesu z późniejszym rozcieńczeniem cDNA przed dodaniem go do PCR/qPCR, albo przygotowuje się jednoetapową reakcję, w której oba procesy są przeprowadzane sekwencyjnie.
## Sprzęt
- Standardowy aparat PCR lub blok grzewczy
- Okap z przepływem laminarnym do konfiguracji RT (opcjonalnie)
## Odczynniki
- RNA (roztwór podstawowy około 1 μg/μL).
- ReadyScript® dwuetapowy zestaw do syntezy cDNA (RDRT). Alternatywne zestawy do odwrotnej transkrypcji mogą być również używane w połączeniu ze starterami oligo-dT i/lub starterami losowymi.
- Woda klasy PCR: Woda klasy PCR (W1754 lub W4502) w podwielokrotnościach 20 ml; zamrozić; użyć świeżej podwielokrotności do każdej reakcji.
### Dostawy
- Filtr sterylny [końcówki do pipet](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/labware/liquid-handling-and-dispensing/pipette-tips)
- [Sterylne 1.5 ml zakręcane probówki do mikrowirówki (CLS430909)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/CLS430909)
- Probówki i płytki do PCR, wybierz jeden z formatów:
\- Pojedyncze cienkościenne probówki PCR o pojemności 200 μL (Z374873 lub P3114)
\- Płytki
- Płytki 96-dołkowe (Z374903)
- Płytki 384-dołkowe (Z374911)
\- Uszczelki lub zakrętki do płytek
- Folie uszczelniające ThermalSeal RTS™ (Z734438)
- Folia ThermalSeal RT2RR™ (Z722553)
## Metoda
### Przygotowanie
1. Umieść składniki zestawu ReadyScript® i próbki RNA na lodzie.
2. Wymieszaj, a następnie krótko odwiruj, aby zebrać zawartość na dnie probówki.
### Reakcja
1. Określ liczbę wymaganych reakcji, w tym kontroli. Oblicz objętość każdego składnika wymaganą dla wszystkich reakcji (pozostaw 10% więcej na błędy pipetowania) i połącz odczynniki zgodnie z __Tabelą P10-26__ używając probówek o pojemności 0,2 ml lub 96-dołkowej płytki z lodem. Jeśli używasz płytki PCR, postępuj zgodnie ze schematem płytki, aby upewnić się, że odczynniki są dodawane do odpowiednich studzienek.
OdczynnikObjętość (μL) na
pojedynczą reakcję 20 μL
ReadyScript®cDNA Synthesis Mix (5× RT blend)4
Total RNA template-variable (1 μg to 10 pg)1
PCR grade water15
Tabela P10-26. Mieszanina wzorcowa do syntezy cDNA ReadyScript®
2. Po zamknięciu każdej reakcji, delikatnie wymieszaj zawartość. Odwiruj krótko, aby zebrać składniki na dnie probówki reakcyjnej.
3. Inkubuj mieszaninę reakcyjną zgodnie z __Tabelą P10-27.__
.
| | |
|------------------|------------|
| Temperatura (°C) | Czas (min) |
| 25 | 5 |
| 42 | 30 |
| 85 | 5 |
| 4 | Hold |
Tabela P10-27. Profil temperatury inkubacji reakcji syntezy cDNA ReadyScript®
4. Po zakończeniu syntezy cDNA użyj 1:5 do 1:10 reakcji pierwszej nici (2-4 μL) do amplifikacji PCR.
__*Uwaga:*__ przy użyciu odczynników ReadyScript®, 2-4 μL nierozcieńczonego cDNA można dodać do PCR bez powodowania inhibicji. W razie potrzeby produkt cDNA można rozcieńczyć 10 mM Tris-HCl (pH 8,0), 0,1 mM EDTA i przechowywać w temperaturze -20 °C.
.
## Materiały
Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd
Response not successful: Received status code 500
__Powiązane artykuły__
- [Reverse Transcription Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/PL/en/technical-documents/protocol/genomics/pcr/reverse-transcription-readymix-rdrt)
- [Instalacja i użytkowanie systemów oczyszczania wody Milli-Q® SQ *2Series*](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/wet-chemical-analysis/installation-use-of-milli-q-2series-water-purification-system)
- [Zoptymalizowane wykrywanie Mycoplasma metodą PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/cell-counting-and-health-analysis/optimized-pcr-based-mycoplasma-detection)
- [Ekstrakcja DNA i amplifikacja WGA z próbek gleby](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-of-dna-from-soil)
- [Protokół ekstrakcji policzkowego DNA i amplifikacji WGA](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-protocol-buccal-swab)
- [Protokół ekstrakcji roślinnego DNA i amplifikacji WGA](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-protocol-plant-tissues)
- [Tkanka FFPE](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/wga1-ffpe)
- [Protokół zestawu do amplifikacji DNA SeqPlex](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/next-gen-sequencing/seqxe-protocol)
- [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search)
__Powiązane kategorie produktów__
- [Folie i taśmy uszczelniające](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/labware/sealing-films-foils-and-tapes)
- [Końcówki do pipet](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/labware/liquid-handling-and-dispensing/pipette-tips)
- [Standard FAME dla optymalizacji wydajności systemu GC](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/fame-standard-for)
- [Indeks oleju węglowodorowego w próbkach](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/hydrocarbon-oil-index)
- [Analiza GC 37-składnikowej mieszaniny FAME na SP™-2560](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/c-analysis-of-a-37-component-fame-mix)
- [Oznaczanie triglicerydów i wosków w produktach spożywczych przy użyciu chłodnego wtrysku na kolumnie i kolumny kapilarnej MET-Biodiesel](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/determination-of-triglycerides)
- [Analizy GC FAME przez elucję w temperaturze wrzenia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/gc-analyses-of-fames)
- [Analizy GC wolnych kwasów tłuszczowych](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/gc-analyses-of-free)
- [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search)
Góra
__Zaloguj się, aby kontynuować__
Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować.
Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj
Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim.
Wsparcie[Obsługa klienta](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/customer-support)[Kontakt](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices)[FAQ](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[Karty charakterystyki (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=sds)[Certyfikaty (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=coa)[Jakość i przepisy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/quality-and-regulatory-management)[Kalkulatory i aplikacje](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/calculators-and-apps)[Webinaria](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/webinars)
Zamówienia[Wyszukiwanie zamówień](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup)[Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order)[Produkty niestandardowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/services/custom-products)[Rozwiązania eCommerce](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions)
Firma[O nas](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/about-us)[Odpowiedzialność](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ssbi)[Wydarzenia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/events)[Komunikaty prasowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/press)[Programy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/partnership-programs)[Kariera](https://careers.merckgroup.com/global/en)[Biura](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices)
Media społecznościowe
[](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science)
[](https://x.com/Merck_lifesci)
[](https://www.facebook.com/Merck.lifescience)
[](https://www.instagram.com/mercklifescience/)
[](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured)
Merck
__Badania. Rozwój. Produkcja.__
Jesteśmy wiodącym dostawcą dla globalnej branży Life Science, oferującym rozwiązania i usługi w zakresie badań, rozwoju i produkcji biotechnologicznej oraz rozwoju i produkcji leków farmaceutycznych.
[](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)
[Rozwiązania Sigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/sigma-aldrich)[Rozwiązania BioReliance®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/bioreliance)[Roztwory Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/millipore)[Rozwiązania SAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/safc)[Rozwiązania Milli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/milliq)[Rozwiązania Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/supelco)
© 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy i/lub jej podmioty stowarzyszone. Wszelkie prawa zastrzeżone, w tym eksploracja tekstu i danych na potrzeby szkolenia w zakresie sztucznej inteligencji i podobnych technologii.
Powielanie jakichkolwiek materiałów ze strony jest surowo zabronione bez zezwolenia.
[Warunki korzystania z witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/site-use-terms)|[Polityka prywatności](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/privacy-statement)|[Ogólne warunki sprzedaży](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/terms-and-conditions)|[Zgoda na prawa autorskie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/copyright-consent)|[Mapa witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/site-map)
An unknown error has occured.