[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [![Merck](https://www.sigmaaldrich.com/static/logos/purple/merck.svg)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Ekstrakcja w fazie stałej (SPE)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/analytical-chemistry/sample-preparation/solid-phase-extraction)Ekstrakcja do fazy stałej: Metodologia odwróconej fazy # Ekstrakcja do fazy stałej: Metodologia odwróconej fazy ## Matryca próbki wodnej/środowisko fazy ruchomej SPE w fazie odwróconej jest uważana za najmniej selektywny mechanizm retencji w porównaniu do SPE w fazie normalnej lub SPE z wymianą jonową. Innymi słowy, metoda odwróconej fazy lub chemia wiązań może być trudna do rozróżnienia między cząsteczkami, które są strukturalnie podobne. Jednakże, ponieważ faza odwrócona zatrzyma większość cząsteczek o dowolnym charakterze hydrofobowym, jest bardzo przydatna do ekstrakcji analitów o bardzo zróżnicowanej strukturze w tej samej próbce. SPE w odwróconej fazie Mechanizm retencji: Oddziaływania niepolarne lub hydrofobowe - Siły Van der Waalsa lub dyspersyjne Matryca próbki: Próbki wodne - Płyny biologiczne (surowica, osocze, mocz) - Wodne ekstrakty tkanek - Próbki wody środowiskowej - Wino, piwo i inne próbki wodne Charakterystyka analitu: Anality wykazujące niepolarne właściwości funkcjonalne - Większość analitów organicznych - Alkilowe, aromatyczne, alicykliczne grupy funkcyjne Schemat elucji: Zakłócić interakcję fazy odwróconej z rozpuszczalnikiem lub mieszaninami rozpuszczalników o odpowiednim niepolarnym charakterze - Metanol, acetonitryl, dichlorometan - Mieszaniny bufor/rozpuszczalnik Wspólne zastosowania: - Leki i metabolity w płynach biologicznych - Zanieczyszczenia środowiskowe w wodzie - Wodne ekstrakty tkanek i ciał stałych ## Podstawowe kroki 1. __Obróbka wstępna próbki__ W przypadku próbek obciążonych zakłóceniami (np. płyny biologiczne) należy rozcieńczyć próbki w stosunku 1:1 buforem. Manipulacja pH może być ważna w przypadku związków jonizowalnych. Stan jonizacji związku może drastycznie zmienić jego charakterystykę retencji i elucji na danym sorbencie SPE. Gdy analit jest w postaci obojętnej, staje się bardziej hydrofobowy, a retencja wzmacnia się w warunkach fazy odwróconej. Dostosowanie pH próbki do 2 jednostek pH powyżej lub poniżej pKa związku (w zależności od grupy funkcyjnej) skutecznie zneutralizuje związek. W przypadku tkanek i innych ciał stałych należy przeprowadzić ekstrakcję ciało stałe-ciecz lub homogenizację przy użyciu buforu. Rozpuszczalniki o charakterze niepolarnym (w tym metanol i izopropanol) zakłócają interakcję między związkiem a grupami funkcyjnymi sorbentu. Aby uniknąć zatykania, może być konieczne odwirowanie, rozcieńczenie i/lub wstępne przefiltrowanie próbki przed wprowadzeniem jej do fazy SPE. 2. __Kondycjonowanie/Equilibration__ Kondycjonowanie zwilża lub aktywuje fazy związane, aby zapewnić spójną interakcję między analitem a grupami funkcyjnymi sorbentu. Sorbenty o odwróconej fazie są często kondycjonowane 1-2 objętościami rozpuszczalnika mieszalnego z wodą, takiego jak metanol lub acetonitryl. Wyrównanie wprowadza roztwór podobny do ładunku próbki pod względem siły rozpuszczalnika i pH w celu maksymalizacji retencji. 1-2 objętości buforu (używanego do wstępnej obróbki próbki) lub wody są dobrym wyborem do wyrównania fazy odwróconej. 3. __Załadunek próbki__ Nałóż próbkę (z kroku 1) przy stałym i zmniejszonym natężeniu przepływu ~1-2 kropli/sekundę, aby zapewnić optymalną retencję. 4. __Płukanie__  Interferencje próbki są często zatrzymywane razem ze związkami będącymi przedmiotem zainteresowania podczas ładowania próbki. Etap płukania jest niezbędny do elucji zakłóceń bez przedwczesnej elucji związków będących przedmiotem zainteresowania. 5-20% metanolu w wodzie lub buforze do wstępnej obróbki próbki jest typowym rozpuszczalnikiem do przemywania. 5. __Elucja__ Zakłóć hydrofobowe interakcje między analitem a grupami funkcyjnymi sorbentu za pomocą rozpuszczalnika organicznego lub kombinacji rozpuszczalników o wystarczającym charakterze niepolarnym. Przykładowe rozpuszczalniki do elucji to 1-2 objętości metanolu lub acetonitrylu. Manipulacja pH podczas elucji może często poprawić odzysk w przypadku związków jonizowalnych. W postaci jonowej związki zasadowe i kwaśne stają się bardziej polarne, osłabiając interakcję fazy odwróconej, co może pozwolić na słabsze rozpuszczalniki elucyjne i/lub zmniejszenie objętości elucji. 6. __Eluate Post-treatment__ Często konieczne jest odparowanie i odtworzenie eluatu SPE w fazie ruchomej przed analizą LC. Analiza GC często wymaga dalszego zagęszczenia eluatu SPE i/lub ewentualnej wymiany matrycy na bardziej lotny rozpuszczalnik. ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Wskazówki dotyczące SPE 1. Wiązanie lek-białko powinno zostać zakłócone podczas wstępnej obróbki próbki. Strategie obejmują: - 40 µL 2% EDTA disodowego na 100 µL osocza myszy - 40 µL 2% kwasu mrówkowego na 100 µL osocza myszy - Inne możliwe odczynniki (na 100 µL matrycy): 40 µL 2% TCA, 40 µL 2% kwasu octowego, 40 µL 2% TFA, 40 µL 2% kwasu fosforowego lub 200 µL MeCN (białko ppt.). 2. Jeśli eluat SPE musi zostać odparowany przed analizą, przepuść powietrze próżniowe przez rurkę SPE przez około 10 minut po elucji. Spowoduje to usunięcie resztkowej wilgoci, która może przedłużyć odparowanie. 3. Stałe i wolne natężenie przepływu (1-2 krople na sekundę) podczas ładowania próbki i elucji poprawi odzysk i powtarzalność. 4. Zmniejsz masę złoża, aby zminimalizować objętość elucji. 5. Zwiększ masę złoża, aby zatrzymać więcej związków polarnych. 6. Troska o przesuszenie sorbentu jest krytyczna tylko podczas kondycjonowania metanolem. 7. Rozpuszczalnik wstępnie kondycjonujący, taki jak dichlorometan (lub rozpuszczalnik używany do elucji), może być użyty przed kondycjonowaniem w celu usunięcia wszelkich zanieczyszczeń z rurki SPE, które mogą zakłócać późniejszą analizę. ## Materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 __Powiązane artykuły__ - [Technologia HybridSPE-fosfolipidów](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/small-molecule-hplc/hybridspe-precipitation-technology) - [Wpływ dodatków do fazy ruchomej na czułość LC-MS, zademonstrowany przy użyciu kannabinoidów Spice](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/small-molecule-hplc/lcms-spice-cannabinoids) - [Analiza narkotyków w moczu](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/analysis-of-drugs-of-abuse-in-urine-after-cleanup-with-hlb) - [Technologia fosfolipidowa HybridSPE®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/hybridspe-ppt) - [Metodologia wymiany jonowej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/ion-exchange-methodology) - [Metoda LC/MS/MS oznaczania glifosatu, AMPA i glufosynatu w zbożach](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/method-for-determination-of-glyphosate) - [Dwa różne podejścia do przygotowania próbki w celu przezwyciężenia efektu matrycy w LC/MS próbek surowicy lub osocza](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/sample-prep-overcome-matrix-effect) - [Ekstrakcja amfetaminy i pokrewnych narkotyków przy użyciu polimeru z odciskiem molekularnym SPE](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/the-extraction-of) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Powiązane kategorie produktów__ - [Ekstrakcja do fazy stałej (SPE) i QuEChERS](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/analytical-chemistry/analytical-sample-preparation/spe-and-quechers) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured.