[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Ekstrakcja do fazy stałej (SPE)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/analytical-chemistry/sample-preparation/solid-phase-extraction)Ekstrakcja amfetaminy i pokrewnych narkotyków przy użyciu polimeru z odciskiem molekularnym SPE # Ekstrakcja amfetaminy i powiązanych z nią narkotyków przy użyciu polimeru z nadrukiem molekularnym SPE __Christine Widstrand, Staffan Bergström, Anna-Karin Wihlborg1, An Trinh2__ 1MIP Technologies AB, Scheelevägen 22, 220 07, Lund, Sweden, 2Supelco, 595 North Harrison Road, Bellefonte, PA, 16823, USA *Reporter US Volume 26.1* [[email protected]](mailto:[email protected]) __Przegląd sekcji__ - [Wprowadzenie](https://www.sigmaaldrich.com#wprowadzenie) - [Polimery z nadrukiem molekularnym](https://www.sigmaaldrich.com#molecularly-imprinted-polymers) - [Ekstrakcja i analiza amfetaminy i narkotyków pokrewnych amfetaminie](https://www.sigmaaldrich.com#ekstrakcja-analiza) - [Niższe granice oznaczalności osiągnięte przy użyciu SupelMIP SPE](https://www.sigmaaldrich.com#lower-limits-of-quantitation) - [Poprawa odzysku & Zmniejszona supresja jonów osiągnięta przy użyciu SupelMIP SPE](https://www.sigmaaldrich.com#improved-rocovery) - [Wnioski](https://www.sigmaaldrich.com#conclusion) - [Powiązane materiały](https://www.sigmaaldrich.com#related-materials) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Wprowadzenie Amfetamina i narkotyki związane z amfetaminą należą do klasy stymulantów i halucynogenów używanych przez studentów, sportowców i rekreacyjnych użytkowników narkotyków. W ciągu ostatnich 15 lat nadużywanie tych narkotyków stało się problemem globalnym. W 2004 r. w Stanach Zjednoczonych skonfiskowano ponad 17 000 laboratoriów metamfetaminy, w wyniku czego w 2006 r. podpisano ustawę z 2005 r. o zwalczaniu metamfetaminy (The Combat Methamphetamine Act of 2005) w celu uregulowania sprzedaży bez recepty efedryny, pseudoefedryny i fenylopropanolaminy, które są prekursorami wykorzystywanymi do nielegalnej produkcji amfetaminy i metamfetaminy (1). W raporcie z 2005 r. przeprowadzonym przez Europejskie Centrum Monitorowania Narkotyków i Narkomanii stwierdzono, że używanie amfetaminy i ecstacy rośnie w całej Europie (2). W ostatnich latach na rynku dostępne były różne techniki badań przesiewowych/wykrywania, takie jak testy ELISA i inne zestawy/urządzenia kolorymetryczne oparte na immunologii oraz zestawy/urządzenia POC (point of collection). Chociaż takie testy są szybkie i wydajne, wiele z nich zazwyczaj nie jest selektywnych klasowo i wykrywa tylko niektóre amfetaminy, a nie inne (3). Lub niektóre testy immunologiczne nie są wystarczająco selektywne i rozpoznają tak szeroki zakres amin sympatykomimetycznych, że dodatnia wartość predykcyjna (PPV) może wynosić od 0 do 90% (4). W obu przypadkach, aby zweryfikować wyniki badań przesiewowych opartych na testach immunologicznych, wymagany jest alternatywny i wysoce selektywny test potwierdzenia specyficzny dla danej klasy. W niniejszym raporcie opisujemy prostą, szybką i selektywną metodę ekstrakcji śladowych ilości narkotyków związanych z amfetaminą z próbek moczu przy użyciu molekularnie wdrukowanego polimeru SPE (SupelMIP™) specjalnie zaprojektowanego do selektywnej ekstrakcji narkotyków związanych z amfetaminą (__Rysunek 1__). Technika SupelMIP jest również porównywana z niedawno opublikowaną techniką ekstrakcji przy użyciu konwencjonalnej hydrofilowej polimerowej fazy SPE (5).  __Rysunek 1.__Badane struktury chemiczne amfetaminy i narkotyków pokrewnych ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Polimery wdrukowywane molekularnie Polimery wdrukowywane molekularnie (MIP) są klasą wysoce usieciowanych polimerowych elementów rozpoznawania molekularnego zaprojektowanych do wiązania jednego związku docelowego lub klasy strukturalnie powiązanych związków z wysoką selektywnością. Selektywność jest wprowadzana podczas syntezy MIP, w której cząsteczka szablonu, zaprojektowana tak, aby naśladować analit, kieruje tworzeniem określonych wnęk lub odcisków, które są sterycznie i chemicznie komplementarne do docelowego analitu (ów). W rezultacie między wnęką MIP a grupami funkcyjnymi analitu mogą zachodzić liczne interakcje (np. wiązania wodorowe, jonowe, Van der Waalsa, hydrofobowe). Silna retencja oferowana między fazą MIP a jej docelowym analitem (analitami) pozwala na stosowanie wyczerpujących procedur płukania podczas ekstrakcji w fazie stałej, co skutkuje doskonałym oczyszczaniem próbki przed analizą. Prowadzi to do czystszych ekstraktów, niższych limitów wykrywalności i bardziej wydajnego procesu oczyszczania próbki. Ilustrację wnęki selektywnej przedstawiono na __Rysunku 2__.  __Rysunek 2.__Ilustracja selektywnej wnęki MIP ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Ekstrakcja i analiza amfetaminy i narkotyków pokrewnych .Amfetamina i pokrewne narkotyki metamfetamina, fentermina, MDA, MDMA i MDEA zostały wyekstrahowane z moczu przy użyciu zarówno SupelMIP SPE, jak i konwencjonalnego hydrofilowego polimeru SPE za pomocą procedur opisanych w __Tabeli 1__. Ekstrakty były dalej analizowane za pomocą LC-MS-MS (__Tabela 2__). SupelMIP SPE- Metoda AmfetaminowaPublikowana metoda amfetaminy z wykorzystaniem konwencjonalnej hydrofilowej polimerowej fazy SPE (5) __Obróbka wstępna próbki____Obróbka wstępna próbki__ Próbki moczu ludzkiego zostały wzbogacone wzorcem wewnętrznym (metamfetamina-d3i MDM A-d5) i rozcieńczone 1:1 (v/v) z 10 mM buforem octanu amonu, pH 8. Dostosować do pH 7,5-8,5 za pomocą NH lub HAc __Procedura SPE__Próbki moczu ludzkiego zostały wzbogacone wzorcem wewnętrznym. Spikowany i ślepy mocz zakwaszono 100 µl 5 M HCI na 10 ml moczu. __Procedura SPE__ SupelMIP SPE - Amfetaminy, 25 mg/3 mL (53228-U) 1.Przygotować i wyrównać fazę MIP za pomocą 1 ml metanolu i 1 ml 10 mM buforu octanu amonu, pH 8 2\. Załadować 1 mL wstępnie oczyszczonej próbki do wkładu. 3\. Płukać (eluować interferencje) stosując następujący schemat płukania: \- 2 x 1 mL wody DI (Nie dopuścić do wyschnięcia kolumny!) \- 1 mL wody 60/40 MeCN/DI, a następnie 5-10 minut próżni (-1 bar, -20 inHg lub -70 kPA) w celu osuszenia kolumny \- 1 mL 1% HAc w MeCN 4\. Elucja amfetaminy za pomocą 2 x 1 ml 1% kwasu mrówkowego w metanolu. Zastosować - 0,4 bara (-12 in Hg) pomiędzy każdą frakcją. 5\. Odparować pod azotem do sucha i odtworzyć w 150 µl fazy ruchomej LC (90% A i 10% B) przed analizą LC-MS-MS Konwencjonalna hydrofilowa faza polimerowa SPE, 30 mg/1 mL 1.Przygotować i wyrównać fazę SPE za pomocą 1 mL metanolu i 1 mL wody DI 2\. Załadować 1 mL wstępnie oczyszczonej próbki do wkładu. 3\. Przemyć (usunąć zakłócenia) 1 ml 5% metanolu zawierającego 2% wodorotlenku amonu i 1 ml 20% metanolu zawierającego 2% wodorotlenku amonu 4\. Elucja amfetaminy za pomocą 0,5 ml 20% metanolu z 2% kwasem octowym 5\. Odparować pod azotem i ponownie rozcieńczyć 150 µl fazy ruchomej LC przed analizą LC-MS-MS Tabela 1.Porównanie metody SupelMIP SPE - amfetaminy i konwencjonalnej metody SPE z polimerem hydrofilowym (53228-U) Kolumna:Ascentis C18, 15 cm x 2.1 mm, cząstki 5µm, ([581304-U](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/supelco/581304U)) Instrument:Shimadzu LC-20/Applied Biosystems/MDS SCIEX APl3200 Faza mobilna:Rozpuszczalnik A - woda DI + 0.05% TFA Rozpuszczalnik B - Acetonitryl + 0.05% TFA Gradient:Initial: 90% A - 10% B 7 min 70% A - 30% B 10-11 min 10% A - 90% B 11.2 min 90% A - 10% B Temp. Czas otoczenia Szybkość przepływu:0.2 ml/min Tryb jonowy:Dodatni Źródło jonów:Turbospray Ion Spray Voltage:5500V Temperatura źródła.600 °C Gaz kolizyjny:6 psi Inj.20 µl Det.MS-MS Czasy przejścia i retencji MRM:Związek Amfetamina Metamfetamina Metamfetamina D8 Fentermina MDA MDMA MDMA D 6 MDEARt (min) 7.8 8.3 8.3 8.7 8.0 8.5 8.5 9.2Q1/Q3 136/119 i 136/91 1S0/119 i 1S0/91 1S8/124 i 1S8/93 1S0/133 i 1S0/91 180/163 i 180/10S 194/163 i 194/10S 199/16S i 199/136 208/163 i 108/105 Tabela 2.Warunki LC-MS-MS ([581304-U](https://www.sigmaaldrich.com/product/supelco/581304U)) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Niższe granice oznaczalności uzyskane przy użyciu SupelMIP SPE Narkotyki amfetaminowe wymienione na __Rysunku 1<Tabeli 1__ i __Tabeli 2__. Dolną granicę oznaczalności (LLOQ) dla każdego analitu oszacowano zarówno dla metody SupelMIP SPE, jak i konwencjonalnej metody hydrofilowej SPE (stosunek sygnału do szumu 10:1) i podsumowano w __Tabeli 3__. Stosując metodę SupelMIP, osiągnięto LLOQ w zakresie 2,5 - 43,0 pg/ml (o rząd wielkości niższe niż w przypadku konwencjonalnej metody hydrofilowego polimeru SPE). Aby dodatkowo zilustrować wysoką selektywność uzyskaną przy użyciu metody ekstrakcji SupelMIP SPE, mocz został wzbogacony amfetaminą o stężeniu 15 pg/ml i poddany ekstrakcji/analizie jak powyżej. Pik amfetaminy został łatwo wykryty przy użyciu metody ekstrakcji SupelMIP SPE. W przeciwieństwie do tego, nie zaobserwowano reakcji amfetaminy przy użyciu konwencjonalnej metody hydrofilowego polimeru SPE (__Rysunek 3__).  SupelMIP (pg/mL)Konwencjonalny Hydrofilowy Polimer SPE (pg/mL) Metamfetamina6.652 Amfetamina7.3138 Fentermina1.5141 MDA4.3261 MDMA3.056 MDEA2.552 Tabela 3.LLOQ dla SupelMIP SPE vs. konwencjonalny polimer hydrofilowy SPE  __Rysunek 3.__Próbki moczu z domieszką amfetaminy (15 pg/mL) oczyszczone za pomocą SPE SupelMIP w porównaniu z konwencjonalną SPE z polimerem hydrofilowym ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Improved Recovery & Reduced Ion-Suppression Achieved using SupelMIP SPE Próbki moczu zostały wzbogacone amfetaminą wymienioną na __Rysunku 1__ na poziomie 0.010, 0,015, 0,50, 1,0 i 5,0 ng/ml i ekstrahowano/analizowano przy użyciu metod opisanych w __Tabeli 1__ i __Tabeli 2__. Względny odzysk dla każdego stężenia spike'a określono względem deuterowanych wzorców wewnętrznych. Osiągnięto ponad 80% względny odzysk dla wszystkich badanych poziomów spike (z wyjątkiem MDA) przy użyciu metody SupelMIP SPE. W przeciwieństwie do tego, 0% odzysku zaobserwowano dla wszystkich narkotyków amfetaminy przy poziomach spike 0,010 i 0,015 ng / ml, a przy poziomach spike 0,5, 1,0 i 5,0 ng / ml, odzysk powyżej 80% zaobserwowano tylko dla metamfetaminy i MDMA przy użyciu konwencjonalnej metody polimeru hydrofilowego (dane nie pokazane). Puste próbki moczu oczyszczono zgodnie z obiema procedurami SPE. Ekstrakty SPE zostały wzbogacone mieszaniną leków amfetaminowych po ekstrakcji. Standardowe krzywe kalibracyjne zostały porównane z próbkami dopasowanymi do matrycy dla obu metod, bez użycia korekty standardu wewnętrznego. __Tabela 4__ podsumowuje procent tłumienia jonów przy 10 i 100 ng/ml dla metody SupelMIP SPE i hydrofilowego polimeru SPE. Z tabeli wynika, że tłumienie jonów jest znacznie mniejsze w przypadku SPE SupelMIP.  SupelMIP (ng/mL)Conventional Hydrophilic Polymer SPE (ng/mL)  __10____100____10____100__. Metamfetamina0%3%31%12% Amfetamina5%10%33%28% Fentermina3%2%36%22% MDA30%23%51%48% MDMA5%13%45%36% MDEA10%4%65%52% Tabela 4.% tłumienie jonów przez SPE SupelMIP vs. SPE z polimerem hydrofilowym ## [](https://www.sigmaaldrich.com)Conclusion[](https://www.sigmaaldrich.com) W niniejszym raporcie zademonstrowaliśmy użyteczność metody molekularnie wdrukowanego polimeru SPE (SupelMIP) zaprojektowanej do selektywnej klasowo ekstrakcji amfetaminy i pokrewnych narkotyków z moczu. W porównaniu do niedawno opublikowanej konwencjonalnej metody SPE z hydrofilowym polimerem, metoda SupelMIP oferuje zmniejszoną supresję jonów i osiąga niższe LOQ / LOD o rząd wielkości. Wysoce selektywna metoda SupelMIP oferowała również zwiększony odzysk i odtwarzalność, zapewniając lepszą czułość, precyzję i dokładność. ## Powiązane materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 ### Referencje 1\. The Combat Meth Act of 2005. Available at: . [http://www.deadiversion.usdoj. gov/meth/q\_a.html](http://www.deadiversion.usdoj.%20gov/meth/q_a.html) 2\. 2005\. European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction, Available at: .. Annual Report . . [http://www.emcdda.eu.int/](http://www.emcdda.eu.int/) 3\. Walsh, Forensic Science International, 2007. In Press . 4\. Woodworth A, Saunders AN, Koenig JW, Moyer TP, Turk J, Dietzen DJ. 2006. Differentiation of Amphetamine/Methamphetamine and Other Cross-Immunoreactive Sympathomimetic Amines in Urine Samples by Serial Dilution Testing. 52(4):743-746. [https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.060616](https://doi.org/10.1373/clinchem.2005.060616) 5\. Fuh M, Wu T, Lin T. 2006. Determination of amphetamine and methamphetamine in urine by solid phase extraction and ion-pair liquid chromatography?electrospray?tandem mass spectrometry. Talanta. 68(3):987-991. [https://doi.org/10.1016/j.talanta.2005.06.057](https://doi.org/10.1016/j.talanta.2005.06.057) __Powiązane artykuły__ - [Technologia HybridSPE-fosfolipidów](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/small-molecule-hplc/hybridspe-precipitation-technology) - [Wpływ dodatków do fazy ruchomej na czułość LC-MS, zademonstrowany przy użyciu kannabinoidów Spice](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/small-molecule-hplc/lcms-spice-cannabinoids) - [Analiza narkotyków w moczu](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/analysis-of-drugs-of-abuse-in-urine-after-cleanup-with-hlb) - [Technologia fosfolipidowa HybridSPE®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/hybridspe-ppt) - [Metodologia wymiany jonowej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/ion-exchange-methodology) - [Metoda LC/MS/MS oznaczania glifosatu, AMPA i glufosynatu w zbożach](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/method-for-determination-of-glyphosate) - [Ekstrakcja do fazy stałej: Metodologia odwróconej fazy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/reversed-phase-methodology) - [Dwa różne podejścia do przygotowania próbki w celu przezwyciężenia efektu matrycy w LC/MS próbek surowicy lub osocza](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/analytical-chemistry/solid-phase-extraction/sample-prep-overcome-matrix-effect) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Powiązane kategorie produktów__ - [Ekstrakcja do fazy stałej (SPE) i QuEChERS](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/analytical-chemistry/analytical-sample-preparation/spe-and-quechers) - [Kolumny HPLC](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/analytical-chemistry/analytical-chromatography/hplc-columns) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured. - Polski - PL - English - EN [Dowiedz się więcej](https://www.sigmaaldrich.com)