Testy migracji i inwazji komórek

Przegląd sekcji

• .Test komory Boydena
  
• Testy migracji komórek.
  
• Testy inwazji komórek
  
• Urządzenie do migracji mikrofluidycznej
  
• In Vitro Scratch Assay
  
• BiałkaECM
  
• Referencje

Przerzuty są skumulowanym wynikiem wielu zmian w komórki nowotworowe i ich mikrośrodowisko, które umożliwia migrację komórek i inwazję do zdrowej tkanki gospodarza. Gdy proliferujące komórki nowotworowe próbują uciec z pierwotnego miejsca guza, musi nastąpić miejscowa adhezja komórek i inwazja otaczającej tkanki¹. Przed przeniknięciem przez śródbłonek naczyń krwionośnych i uzyskaniem dostępu do krwiobiegu, komórki nowotworowe muszą zaatakować lokalne tkanki poprzez degradację białek ECM i ostatecznie przekroczyć błonę podstawną². Po wejściu do krążenia komórki te mogą tworzyć kolonie przerzutowe w drugorzędnych lokalizacjach.

Rysunek 1. Przerzuty nowotworowe to wieloetapowy proces obejmujący adhezję komórek nowotworowych, ich migrację i inwazję do sąsiednich tkanek i naczyń krwionośnych.

Test komory Boydena

Najszerzej akceptowaną techniką migracji komórek jest test komory Boydena³. The classic transwell migration assay system uses a hollow plastic chamber, sealed at one end with a porous membrane. Komora ta jest zawieszona nad większą studzienką, która może zawierać pożywkę i/lub chemoatraktanty. Komórki są umieszczane wewnątrz komory i migrują przez pory na drugą stronę membrany. Migrujące komórki są następnie barwione i liczone.

Rysunek 2. Protokół testu komory Boydena. Komórki mogą migrować przez monowarstwę komórek lub mieszaninę białek ECM, które zostały wysiane na półprzepuszczalną membranową wkładkę do hodowli komórkowej z chemoatraktantami dodanymi pod membraną. Migrujące komórki można następnie określić ilościowo poprzez barwienie komórek barwnikami DNA, takimi jak Calcein-AM lub CyQUANT GR Dyes

Zestawy do badania migracji i inwazji komórek

Millipore QCM™ zapewniają szybki i wydajny system do ilościowego oznaczania różnych czynników migracji, adhezji i inwazji komórek, w tym badań przesiewowych środków farmakologicznych, oceny integryn, chemoatraktantów lub innych receptorów adhezyjnych odpowiedzialnych za migrację komórek. Zestawy te zapewniają badaczom spójne wyniki od ponad dekady i zostały opublikowane w ponad 4000 publikacji.

Testy migracji komórek: Umożliwia wygodną i czułą kwantyfikację in vitro migracji komórek w kierunku gradientu stężeń chemicznych (chemotaksja) lub gradientu białek ECM (haptotaksja).

Testy inwazji komórek: Umożliwia wygodną i czułą kwantyfikację inwazji komórek przez białko ECM błony podstawnej lub warstwę komórek, takich jak komórki śródbłonka.

Jak wybrać odpowiedni rozmiar porów dla komórek:

• Rozmiar porów 3 μm jest odpowiedni dla migracji leukocytów lub limfocytów.
• Rozmiar porów 5 µm jest odpowiedni dla podzbioru komórek fibroblastów lub komórek nowotworowych, takich jak komórki NIH-3T3 i MDA-MAB 231. Nadaje się również do monocytów i makrofagów.
• Rozmiar porów 8 μm jest odpowiedni dla większości typów komórek. Ten rozmiar porów zapewnia optymalną migrację większości komórek nabłonkowych i fibroblastów. Uwaga - rozmiar porów 8 μm nie jest odpowiedni dla eksperymentów migracji limfocytów.

Cell Migration Assays

.

Opis	Rozmiar porcji	Format płytki	Powłoka ECM	Wykrywanie	Liczba testów	No. testów	Nr produktu.
Chemotaxis Cell Migration Assays	8 µm	24-dołkowe	Brak	Kolorymetryczne	24	ECM508
		24 studzienki		Fluorometryczne	24	ECM509
		96-dołkowy		Fluorometryczny	96	ECM510
	5 µm	24-dołkowy		Kolorymetryczny	24	ECM506
		24-dołkowy		Fluorometryczny	24	ECM507
		96-dołkowy		Fluorometryczny	96	ECM512
	3µm	24-dołkowe		Colorimetric	24	ECM504
		24-dołkowy		Fluorometryczny	24	ECM505
		96-dołkowe		Fluorometryczne	96	ECM515
Testy migracji komórek metodą haptotaksji	8 µm	24-dołkowe	Fibronektyna	Kolorymetryczne	24	ECM580
		24-dołkowe	Kolagen I	Fluorometryczne	24	ECM582
	5 µm	24-dołkowe	Laminin	Kolorymetryczny	24	ECM220
		24-dołkowy		Fluorometryczny	24	ECM221

 Cell Invasion Assays

.

Opis	Rozmiar porcji	Format płytki	Powłoka ECM	Wykrywanie	Liczba testów	No. testów	Nr produktu.
Cell Invasion Assays	8 µm	24-dołkowe	ECMatrix™	Colorimetric	12	ECM550
		24-studzienkowy		Kolorymetryczny	24	ECM554
		96-dołkowe		Kolorymetryczne	96	ECM555
		24-dołkowe	Kolagen I	Kolorymetryczne	24	ECM551
		24-studzienkowy		Fluorometryczny	24	ECM552
		96-dołkowy		Fluorometryczny	96	ECM556
Endothelial Cell Migration Assays	3 µm	24-dołkowe	Fibronektyna	Kolorymetryczne	24	ECM200
		24-dołkowe		Fluorometryczne	24	ECM201
Testy inwazji komórek śródbłonka		24-dołkowe	ECMatrix™	Kolorymetryczne	24	ECM210
		24-dołkowy		Fluorometryczny	24	ECM211
Migracja transendotelialna leukocytów	3 µm	24-dołkowa	Fibronektyna	Kolorymetryczny	24	ECM557
Migracja transendotelialna komórek nowotworowych	8 µm	24-dołkowe		Kolorymetryczne	24	ECM558
QCM™ Invadopodia Gelatin Degradation Assay (Green)	NA	NA	FITC-Gelatin*	Fluorometryczny	32	ECM670
QCM™ Invadopodia Gelatin Degradation Assay (Red)	&		Cy3-Gelatin*	Fluorometric	32	ECM671

Urządzenie do migracji mikrofluidycznej.

Millicell^® µ-Migration Assay Kit pokonuje ograniczenia tradycyjnych testów migracji w wielu komorach. Innowacyjna konstrukcja szkiełka µ-Migration Slide promuje stabilny gradient stężenia generowany przez dyfuzję, który jest konsekwentnie liniowy i utrzymuje się przez ponad 48 godzin. Wykonane z tworzywa sztucznego o wysokich właściwościach optycznych podobnych do szkła, szkiełko µ-Migration Slide jest specjalnie zaprojektowane do testów mikroskopii wideo. W określonych odstępach czasu można uzyskać obrazy obszaru obserwacji, umożliwiając monitorowanie w czasie rzeczywistym i ilościowe pomiary migracji komórek.

Rysunek 3. Migracja komórek HT1080 na żywo. Wpływ stężenia surowicy (0% lub 10%) na skłonność do migracji komórek HT1080 na powierzchni pokrytej kolagenem. Wyniki pokazują, że większość komórek migrowała w kierunku 10% gradientu FCS (kolor czarny).

In Vitro Scratch Assay

Test zadrapań jest popularną metodą badania migracji komórek⁴. Skalowanie tej techniki okazało się jednak wyzwaniem, utrudniając analizę biochemiczną zdarzeń molekularnych pośredniczących w naprawie ran. Cell Comb™ scratch assay zaspokaja potrzebę prostego narzędzia zdolnego do tworzenia wielu ran zadrapań w sposób o wyższej przepustowości.

Przeczytaj naszą notę aplikacyjną w Nature

Nr produktu	Opis produktu
17-10191	Cell Comb™ Scratch Assay

Rysunek 4. Za pomocą testu zarysowania CellComb, jednowarstwowe komórki NIH3T3 zostały zarysowane/zranione w jednym kierunku (po lewej) lub w dwóch kierunkach (po prawej). Z czasem migrujące komórki wypełnią zarysowane sekcje i zostaną określone ilościowo za pomocą prostego zliczania komórek. Obrazowanie żywych komórek na migrujących komórkach jest również możliwe przy użyciu testu migracji zarysowań.

Białka ECM

Białka macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) są wytwarzane wewnątrzkomórkowo, a następnie wydzielane do otaczającego środowiska komórkowego, aktywnie regulując różnorodne funkcje komórek, w tym adhezję komórek, różnicowanie, proliferację, migrację, inwazję i przeżycie. Podstawowym zastosowaniem ECM w hodowlach in vitro jest promowanie adhezji komórkowej przy jednoczesnym utrzymaniu żywotności komórek i maksymalizacji proliferacji komórek dla dalszych zastosowań opartych na komórkach.

• Kolagen
• Lamina
• Fibronektyna
• Witronektyna
• Elastyna
• Wyciąg z błony podstawnej

Referencje

1. Friedl P, Alexander S. 2011. Cancer Invasion and the Microenvironment: Plasticity and Reciprocity. Cell. 147(5):992-1009. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011.11.016

2. Lu P, Takai K, Weaver VM, Werb Z. 2011. Extracellular Matrix Degradation and Remodeling in Development and Disease. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 3(12):a005058-a005058. https://doi.org/10.1101/cshperspect.a005058

3. Chen H. Boyden Chamber Assay.015-022. https://doi.org/10.1385/1-59259-860-9:015

4. Liang C, Park AY, Guan J. 2007. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat Protoc. 2(2):329-333. https://doi.org/10.1038/nprot.2007.30