[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[Zastosowania reakcji łańcuchowej polimerazy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/pcr)PCR kolonii # PCR kolonii Kolonijny PCR jest prostą i szybką metodą weryfikacji poprawności montażu sklonowanego konstruktu DNA. Tradycyjnie weryfikacja insercji DNA podczas klonowania była czasochłonna, po transformacji bakteryjnej z pracochłonnym oczyszczaniem DNA i późniejszym trawieniem enzymami restrykcyjnymi. Colony PCR to [Bezpośrednia metoda PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/molecular-biology-and-functional-genomics/pcr-and-amplification/pcr-reagents-and-kits), która omija zarówno izolację DNA, jak i trawienie enzymami restrykcyjnymi, zapewniając szybkie, łatwe i niedrogie rozwiązanie do sprawdzania sklonowanych konstruktów. Aplikacje PCR kolonii są również kompatybilne z badaniami przesiewowymi klonów utworzonych metodami niezależnymi od sekwencji i restrykcji. - [Protokół PCR kolonii](https://www.sigmaaldrich.com#pcr-protocol) - [Aplikacje PCR kolonii z bakteriami i drożdżami](https://www.sigmaaldrich.com#pcr-app) - [Effect of Growth Media on PCR Yield Using JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ Reagents](https://www.sigmaaldrich.com#growth-media) - [Colony PCR and Related PCR Products](https://www.sigmaaldrich.com#materials) * * * ## REDExtract-N-Amp™ PCR Ready Mix™ i Jump Start™ REDTaq® PCR Ready Mix™ dla Ckolonii PCR Aaplikacji Nadaje się do stosowania w koloniach PCR, REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™ ([Cat. R4775](https://www.sigmaaldrich.com#materials)) i JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ ([Cat. No. P0982](https://www.sigmaaldrich.com#materials)) dostarczają bufor, polimerazę, dNTP i stabilizatory jako pojedynczy 2x roztwór. Zostały one opracowane w celu umożliwienia bezpośredniego PCR, a następnie załadowania próbek na żel agarozowy po PCR bez potrzeby stosowania dodatkowych buforów lub barwników ładujących. Obojętny barwnik migruje z taką samą szybkością jak fragment o długości 125 par zasad, zapewniając wizualne potwierdzenie migracji DNA. __Features and Benefits__ - __Ultimate Flexibility__: Oczyszczanie DNA przed amplifikacją nie jest konieczne. Nadaje się do stosowania z popularnymi szczepami *E. coli*, takimi jak SIG10 5a, NovaBlue (K-12), BL21(DE3) i DH5α, a także z drożdżami *S. pombe*. Próbka może być również ponownie amplifikowana, na przykład w zagnieżdżonym PCR. - __Wysoka specyficzność i wydajność__: Polimeraza DNA JumpStart™   Taq, inaktywowany przeciwciałem enzym gorącego startu, został zaprojektowany w celu zminimalizowania niespecyficznej amplifikacji przy jednoczesnym zwiększeniu wydajności i specyficzności. JumpStart™ Taq amplifikuje cele o długości do 7 kb. - __Wygoda__: Funkcje gorącego startu w produktach JumpStart™  umożliwiają przygotowanie reakcji w temperaturze pokojowej, co jest korzystne podczas pracy z wieloma próbkami. REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™ i JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ są stabilne w temperaturze 4 °C lub -20 °C. - __Tolerancja na inhibitory__: Wykazano, że JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ toleruje stężenia LB do 20% i LB Agar lub Terrific Broth do 10%. - __Produkowalność__: Zmniejsza ryzyko zanieczyszczenia w wyniku wielokrotnego pipetowania i zapewnia stałą wydajność w wielu reakcjach. - __Gel-ready__: Nie trzeba dodawać buforu ładującego ani barwnika śledzącego. Produkt PCR jest ładowany bezpośrednio do żelu agarozowego po amplifikacji. Czerwony znacznik migruje w przybliżeniu z taką samą szybkością jak fragment 125bp (nieco szybciej niż błękit bromofenolowy). [](https://www.sigmaaldrich.com) * * * ## Ckolonia PCR Pprotokół Protokół PCR kolonii jest prosty: wystarczy dodać niewielką ilość kolonii z płytki lub gęstej płynnej kultury bakteryjnej do mieszanki wzorcowej PCR i przejść do termocyklingu. Liza komórek następuje podczas początkowej inkubacji w wysokiej temperaturze. Uzyskane produkty PCR można analizować za pomocą elektroforezy żelowej lub innych metod wykrywania DNA. Ta oszczędzająca czas metoda jest idealna do badań przesiewowych tylko kilku kolonii lub do wysokowydajnych badań przesiewowych wielu klonów. 1\. Przygotuj mieszankę wzorcową PCR (skalowaną w oparciu o liczbę próbek do analizy): 2\. | | | |----------------------------------------------------------------------|---------------------------| | __Odczynnik__ | __Objętość (na reakcję)__ | | REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™ lub JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ | 10 µL | | Forward Primer (20 µM) | 0.5 µL | | Reverse Primer (20 µM) | 0.5 µL | | Woda< | 9 µL | | Łącznie | 20 µL | 2\. Dozować mieszaninę wzorcową PCR (20 µL) do każdej probówki lub płytki PCR. 3\. Za pomocą sterylnej końcówki mikropipety lub sterylnej wykałaczki przenieś komórki z każdej kolonii do probówki PCR i krótko zamieszaj, aby ponownie zawiesić je w mieszaninie wzorcowej PCR. Mieszanina może wyglądać na lekko mętną. Uwaga: Nie należy pobierać zbyt wielu komórek. Przeładowanie komórek zakłóci PCR. 4\. Amplifikuj docelowe DNA w następujących warunkach termocyklingu: __Krok__ __Temperatura__ __Czas__ __Cykle__ Liza komórek 94 °C 5 do 10 minut 1 Denaturacja 94 °C 0.5 minut 30-40 Wygrzewanie 45 do 68 °C 0.5 minut Przedłużanie 72 °C 1-2 minuty (~ 1 kb/min) Hold 4 °C Indefinitely   __Uwaga__: Etap lizy komórek jest dłuższy niż typowa początkowa denaturacja, aby skutecznie rozbić ścianę bakterii 5.      Po PCR, załaduj 5 do 10 µl każdej reakcji bezpośrednio do 1% żelu agarozowego, pozostawiając pas dla odpowiedniej drabinki, i przeprowadź elektroforezę.[](https://www.sigmaaldrich.com) * * * ## Ckolonia PCR Azastosowania z Bbakteriami i Ydrożdżami Kolonię PCR przeprowadzono przy użyciu reprezentatywnych szczepów bakterii i drożdży. E. coli zostały przebadane pod kątem obecności wstawek przy użyciu REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™ i starterów flankujących, które amplifikowały 1 kbp wstawki. Wszystkie szczepy *E. coli* były kompatybilne z koloniami PCR, wytwarzając docelowe amplikony bezpośrednio z surowych danych wejściowych komórek bez etapu ekstrakcji DNA (__Rysunek 1__).  __Rysunek 1Żel agarozowy produktów PCR kolonii *E. coli*.__ PCR kolonii wstawki 1 kbp przeprowadzono przy użyciu REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™ i analizowano na 1% żelu agarozowym. Produkty zostały wykryte ze wszystkich transformowanych komórek zawierających pET28a(+) z insertami (próbki 3-10), podczas gdy żaden produkt nie został amplifikowany z komórek transformowanych pustym wektorem pET28a(+) (próbki 1-2). *Drożdże Schizosaccharomyces pombe* transformowano plazmidem pESP-1. PCR przeprowadzono na uzyskanych koloniach i kontroli plazmidu. Kolonie drożdży zostały przebadane pod kątem obecności insertów przy użyciu JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ i starterów flankujących, które amplifikowały 226 bp insertu. Podobnie jak w przypadku *E. coli*, sekwencje docelowe zostały amplifikowane z próbek drożdży bez oczyszczania DNA (__Rysunek 2__).  __Rysunek 2Żel agarozowy produktów PCR kolonii *S. pombe*__. PCR kolonii wstawki 226 bp przeprowadzono przy użyciu JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ i analizowano na 1% żelu agarozowym. Produkty wykryto ze wszystkich transformowanych komórek (kolonia 1-3) i matrycy plazmidu (kontrola). [](https://www.sigmaaldrich.com) ## Eefekt z Growth Media na PCR Ypolu Using Jump Start™ REDTaq® PCR Ready Mix Rodczynniki Aby określić ilościowo wpływ zanieczyszczenia pożywki wzrostowej na PCR, powszechne *E. coli* media LB, LB Agar i Terrific Broth (TB) zostały dodane do odczynników JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™. Amplifikację przeprowadzono z pBR322 jako matrycą, odpowiednimi starterami, α \[32P] dCTP i różnymi poziomami (0 - 50%) LB, LB Agar i TB. Wydajność PCR określono po wytrąceniu kwasu trichlorooctowego na szklanych filtrach, a następnie zliczeniu scyntylacyjnym. Wydajność znormalizowano do 0% dodanej pożywki. Reakcje przeprowadzono w trzech powtórzeniach. Wszystkie dodane pożywki miały wpływ na wydajność produktu, ale PCR z użyciem JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ był nadal stabilny przy do 20% mieszaniny reakcyjnej składającej się z LB i do 10% mieszaniny reakcyjnej składającej się z agaru TB lub LB (__Rysunek 3__). Poziomy te przekraczają to, co zanieczyściłoby typową kolonię PCR i wykazują wysoką tolerancję na inhibitory odczynników JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™.  __Rysunek 3Efekty dodawania LB, agaru LB i TB do odczynników PCR ReadyMix™.__ LB, różowe kwadraty; agar LB, niebieskie romby; TB, zielone trójkąty. ## Colony PCR Performance z Jump StartTM oraz REDTaq® Ready Mix™ Reagents REDExtract-N-Amp™ PCR ReadyMix™, JumpStart™ REDTaq® PCR ReadyMix™ i inne odczynniki JumpStart™ i REDTaq® ReadyMix™, takie jak R2523 i P1107, są solidnymi mieszaninami wzorcowymi, które umożliwiają bezpośrednią reakcję PCR kolonii i kultur z popularnych szczepów do klonowania i ekspresji, w tym *E. coli* i *S. pombe*, ułatwiając szybkie przesiewanie sklonowanych konstruktów. Mają wysoką tolerancję na powszechnie stosowane inhibitory PCR, w tym stężenia LB do 20% i LB Agar lub Terrific Broth do 10%, co skutkuje wysoką wydajnością w kolonii PCR. Mieszaniny wzorcowe mogą przezwyciężyć wpływ resztek komórkowych i mogą być stosowane bezpośrednio z surowymi koloniami lub zawiesinami do amplifikacji celów o długości do 7 kb. Dodatkowe ultraszybkie mieszanki wzorcowe PCR, w tym nasza [KOD One™ PCR Master Mix](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/kod-one-pcr-master-mix) są również dostępne i odpowiednie do zastosowań PCR w koloniach. Dodatkowe odczynniki i zasoby do PCR można znaleźć w naszym [centrum zasobów odczynników i zestawów do PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/molecular-biology-and-functional-genomics/pcr-and-amplification/pcr-reagents-and-kits).[](https://www.sigmaaldrich.com) ## Materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. Wsparcie[Obsługa klienta](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/customer-support)[Kontakt](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices)[FAQ](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[Karty charakterystyki (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=sds)[Certyfikaty (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/documents-search?tab=coa)[Jakość i przepisy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/quality-and-regulatory-management)[Kalkulatory i aplikacje](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/support/calculators-and-apps)[Webinaria](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/webinars) Zamówienia[Wyszukiwanie zamówień](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup)[Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order)[Produkty niestandardowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/services/custom-products)[Rozwiązania eCommerce](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) Firma[O nas](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/about-us)[Odpowiedzialność](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/ssbi)[Wydarzenia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/events)[Komunikaty prasowe](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/press)[Programy](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/partnership-programs)[Kariera](https://careers.merckgroup.com/global/en)[Biura](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/collections/offices) Media społecznościowe [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __Badania. Rozwój. Produkcja.__ Jesteśmy wiodącym dostawcą dla globalnej branży Life Science, oferującym rozwiązania i usługi w zakresie badań, rozwoju i produkcji biotechnologicznej oraz rozwoju i produkcji leków farmaceutycznych. [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) [Rozwiązania Sigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/sigma-aldrich)[Rozwiązania BioReliance®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/bioreliance)[Roztwory Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/millipore)[Rozwiązania SAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/safc)[Rozwiązania Milli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/milliq)[Rozwiązania Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy i/lub jej podmioty stowarzyszone. Wszelkie prawa zastrzeżone, w tym eksploracja tekstu i danych na potrzeby szkolenia w zakresie sztucznej inteligencji i podobnych technologii. Powielanie jakichkolwiek materiałów ze strony jest surowo zabronione bez zezwolenia. [Warunki korzystania z witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/site-use-terms)|[Polityka prywatności](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/privacy-statement)|[Ogólne warunki sprzedaży](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/terms-and-conditions)|[Zgoda na prawa autorskie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/legal/copyright-consent)|[Mapa witryny](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/site-map)