[Przejdź do zawartości](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl) Produkty Koszyk0 PLPL Produkty ProduktyZastosowaniaUsługiZasobyWsparcie [Zaloguj się / Zarejestruj się](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [Wyszukiwanie zamówienia](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/order-lookup) [Szybkie zamówienie](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/quick-order) Koszyk0 [Strona główna](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl)[qPCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/applications/genomics/qpcr)RT-qPCR - ilościowy PCR z odwrotną transkrypcją # RT-qPCR - ilościowy PCR z odwrotną transkrypcją RT-qPCR, czyli ilościowy PCR z odwrotną transkrypcją, łączy efekty odwrotnej transkrypcji i ilościowego PCR lub PCR w czasie rzeczywistym w celu amplifikacji i wykrywania określonych celów. RT-qPCR ma wiele zastosowań, w tym ilościowe określanie poziomów ekspresji genów, walidację interferencji RNA (RNAi) i wykrywanie patogenów, takich jak wirusy. Powszechne podejścia do generowania sygnału fluorescencyjnego wykorzystywanego do pomiaru ilości DNA w tej technice polegają na użyciu sond hydrolizujących, takich jak sondy TaqMan® lub dwuniciowego barwnika wiążącego DNA, takiego jak barwnik SYBR® Green. ## Co to jest RT-qPCR? Quantitative reverse transcription PCR (RT-qPCR) obejmuje wykrywanie i kwantyfikację RNA. Proces ten odbywa się poprzez odwrotną transkrypcję całkowitego RNA lub mRNA do komplementarnego DNA (cDNA) za pomocą enzymu odwrotnej transkryptazy, a następnie amplifikację i wykrywanie określonych celów tego cDNA przy użyciu techniki zwanej ilościowym PCR (qPCR) lub PCR w czasie rzeczywistym. W każdym cyklu podczas tego PCR ilość DNA jest mierzona w czasie rzeczywistym przy użyciu różnych chemikaliów fluorescencyjnych. Najpopularniejszymi metodami generowania sygnału fluorescencyjnego jest użycie sond hydrolizujących, takich jak sondy TaqMan® lub dwuniciowego barwnika wiążącego DNA, takiego jak barwnik SYBR® Green. Wybór chemii fluorescencyjnej zależy od takich czynników, jak zastosowanie, koszt i to, czy test jest testem typu singleplex czy multipleks. Barwniki wiążące DNA są preferowane w przypadku testów typu singleplex o niskiej przepustowości, ponieważ są łatwiejsze do zaprojektowania, mają krótszy czas konfiguracji i są bardziej opłacalne. Sondy fluorescencyjne są częściej stosowane w wysokoprzepustowych testach multipleksowych, które wymagają wyższej specyficzności. Aby uzyskać więcej informacji na temat qPCR, zobacz nasze [Przewodnik techniczny ilościowego PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/quantitative-pcr) ## Zastosowania RT-qPCR RT-qPCR ma wiele zastosowań. Technika RT-qPCR jest wykorzystywana do: - kwantyfikacji poziomów ekspresji genów - walidacji RNAi w celu badania utraty funkcji selektywnych genów - wykrywania patogenów, takich jak wirusy, w celu diagnozowania chorób zakaźnych - wykrywanie organizmów modyfikowanych genetycznie (GMO) ## Jednoetapowy RT-qPCR vs Dwuetapowy RT-qPCR RT-qPCR jest wykonywany w teście jednoetapowym lub dwuetapowym. Ważne jest, aby wziąć pod uwagę różne czynniki, takie jak koszt, zastosowanie i rodzaj testu przy wyborze odpowiedniego rodzaju metody RT-qPCR.  __Rysunek 1.__ Schemat porównujący jednoetapowy przepływ pracy RT-qPCR z dwuetapowym przepływem pracy RT-qPCR. __Jednostopniowy RT-qPCR__ W jednostopniowym RT-qPCR, odwrotna transkrypcja lub synteza cDNA i qPCR są przeprowadzane w jednej probówce przy użyciu starterów specyficznych dla sekwencji w celu amplifikacji określonego celu. Genetycznie zmodyfikowane odwrotne transkryptazy są powszechnie stosowane w testach jednoetapowych, ponieważ tolerują wyższe temperatury niezbędne do wyżarzania starterów specyficznych dla sekwencji. Test jednoetapowy jest preferowany, gdy przeprowadzana jest wielokrotna kwantyfikacja tego samego genu, szczególnie w zastosowaniach o wysokiej wydajności i diagnostycznych. Innym czynnikiem branym pod uwagę przy wyborze testów jednoetapowych jest jakość i niedobór RNA. Ponieważ cDNA zsyntetyzowanego podczas reakcji nie można zapisać oddzielnie jako alikwot, do powtórzenia testu może być wymagane więcej próbek oryginalnego RNA. __Dwuetapowy RT-qPCR__ W dwuetapowym RT-qPCR reakcje odwrotnej transkrypcji i qPCR są przeprowadzane w oddzielnych probówkach z oddzielnymi buforami i odczynnikami. W testach dwuetapowych można stosować losowe heksamery, startery oligo-dT i/lub startery specyficzne dla genów. Posiadanie oddzielnych buforów i odczynników pozwala na większą elastyczność w wyborze enzymów odwrotnej transkryptazy i odczynników PCR, z większą liczbą opcji optymalizacji i poprawy wydajności amplifikacji trudnych szablonów. Bardziej stabilny cDNA, który jest syntetyzowany w pierwszym etapie, może być dalej zatężany i/lub oczyszczany w celu przechowywania do przyszłego użytku lub może być używany do ilościowego oznaczania wielu genów z tej samej próbki. Typ testuUżyte starteryKluczowe cechy One-Step RT-qPCRSequence-specific primers - Zmniejszona zmienność eksperymentalna - Łatwa obsługa z niskim ryzykiem zanieczyszczenia - Szybszy protokół z mniejszą liczbą kroków - Łatwa automatyzacja - Zwiększona specyficzność - Idealny dla aplikacji o wysokiej wydajności Dwuetapowa RT-qPCRStartery oligo (dT), losowe heksamery i/lub startery specyficzne dla sekwencji - Flexibility to optimize RT and PCR reactions separately - Umożliwia wielokrotne reakcje PCR z pojedynczej próbki RNA/RT bez multipleksowania - Większy wybór starterów RT - Stabilne cDNA może być przechowywane do wykorzystania w przyszłości Tabela 1. Kluczowe cechy i startery stosowane w jedno- i dwuetapowych testach RT-qPCR. Dowiedz się więcej na temat optymalizacji testów PCR w naszym  [Strona optymalizacji i walidacji testów](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/assay-optimization-and-validation) ## Jednoetapowe produkty RT-qPCR do zastosowań wysokoprzepustowych .Nasze jednoetapowe produkty RT-qPCR łączą działanie odwrotnej transkryptazy z przeciwciałem kierowanym przez Taq w wygodnych mieszaninach reakcyjnych ReadyMixTM PCR do zastosowań opartych na sondach lub SYBR® Green. Niezależnie od trudnych struktur drugorzędowych lub chemii wykrywania, nasze mieszaniny reakcyjne ReadyMixTM PCR są specjalnie opracowane, aby pomóc osiągnąć doskonałe wyniki w mniejszej liczbie kroków. Nasze produkty z łatwością wpasują się w Twój przepływ pracy PCR, a dzięki różnorodności niezawodnych produktów do jednoetapowych eksperymentów RT-qPCR - nie dokonasz złego wyboru. Odkryj KiCqStart® produkty i znajdź mieszankę wzorcową ReadyMix™ zoptymalizowaną dla Twojego urządzenia lub poznaj nasze [opcje JumpStart™](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/quantitative-rt-pcr) dla zestawów zoptymalizowanych pod kątem potrzeb eksperymentalnych. Do wysokowydajnej, szybkiej, jednoetapowej kwantyfikacji RNA przy użyciu specyficznych dla sekwencji sond fluorogenicznych wybierz uniwersalny zestaw [KAPA PROBE FAST](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/kk4752). Wybierz dowolny z naszych produktów RT-qPCR bez kompromisów w zakresie jakości. __One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ KiCqStart®. -__  Kompatybilny ze wszystkimi głównymi urządzeniami qPCR Nasz KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ charakteryzują się rygorystycznym mechanizmem gorącego startu dla większej specyficzności i są opracowane tak, aby były wysoce tolerancyjne na inhibitory PCR w próbkach. Te wysoce czułe, gotowe do użycia mieszanki wzorcowe zostały zaprojektowane z myślą o wygodzie i zawierają wszystkie wymagane podstawowe składniki do qPCR lub RT-qPCR. Wystarczy dodać startery, sondę i wodę, aby uzupełnić koktajl testowy. Ten produkt jest idealny do szybkiego lub konwencjonalnego qPC | | | | |-------------------------------------------------------------------|-------------------------------------------------------|------------------------------------------------------------------------------| | | | | | Nr kat. | Nazwa produktu | Właściwości | | [KCQS07](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/KCQS07) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ | For Bio-Rad®, Cepheid®, Eppendorf®, Illumina®, Corbett® i Roche® Instruments | | [KCQS08](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/KCQS08) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™, Low ROX™ | For Applied Biosystems® (ABI) i Stratagene® instruments | | [KCQS09](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/KCQS09) | KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ROX | Dla urządzeń Applied Biosystems® (ABI) | Dowiedz się więcej o kompatybilności urządzeń z tymi produktami w naszym  [Pełna karta kompatybilności urządzeń](https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/marketing/global/documents/343/143/one-step-probe-rt-qpcr-kicqstart-compatibility-list.pdf) lub odkryj nasze [Niestandardowe sondy qPCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/PROBES). *JumpStart™ Taq ReadyMix™* - Zoptymalizowany dla wszystkich głównych instrumentów qPCR Nasz JumpStart™ Taq ReadyMix™ do RT-qPCR łączy w sobie zalety odwrotnej transkryptazy wirusa białaczki Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV RT) i naszej JumpStart™ polimerazy Taq inaktywowanej przeciwciałem. Solidna M-MLV RT ma zdolność transkrypcji przez trudne struktury drugorzędowe, nawet w podwyższonych temperaturach, podczas gdy nasza polimeraza JumpStart™ Taq zapewnia większą specyficzność i czułość niż standardowa polimeraza Taq. Produkty te są kompatybilne zarówno z aparatami probówkowymi i płytkowymi, jak i kapilarnymi. Zaoszczędź 20% na RT-qPCR ReadyMix™ ([QR0200](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/QR0200)), używając kodu SGX przy kasie. Ważny do 31 stycznia 2021 r. | | | | |--------------------------------------------------------------------|-----------------------------------------------------|-----------------------------------------------------------------------| | Nr kat. | Nazwa produktu | Właściwości | | [.QR0100](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/QR0100) | SYBR® Green RT-qPCR | Wysoka specyficzność, niskie ryzyko kontaminacji, łatwa odtwarzalność | | [QR0200](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/QR0200) | RT-qPCR ReadyMix™ dla aplikacji opartych na sondach | Wysoka specyficzność, niskie ryzyko kontaminacji, łatwa odtwarzalność | __*KAPA PROBE FAST*__ - Kompatybilny ze wszystkimi technologiami opartymi na sondach fluorogenicznych Zestaw KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix Universal Kit to czułe i wygodne rozwiązanie do PCR w czasie rzeczywistym z wykorzystaniem RNA jako matrycy. Zestaw został zaprojektowany do wysokowydajnej, szybkiej, jednoetapowej kwantyfikacji RNA przy użyciu sond fluorogenicznych specyficznych dla sekwencji. Jest kompatybilny ze wszystkimi technologiami opartymi na sondach fluorogenicznych, w tym sondami hybrydyzacyjnymi (np. sondami FRET), sondami hydrolizy (np. sondami TaqMan® ) i sondami wypierającymi (np. sondami molekularnymi), Zestaw ten jest gotowym do użycia koktajlem zawierającym wszystkie składniki z wyjątkiem starterów, sond i matrycy do szybkiej cyklicznej reakcji PCR w czasie rzeczywistym opartej na sondach. Zestaw zawiera KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix, barwniki referencyjne ROX High i ROX Low, KAPA RT Mix i dUTP. | | | | |-------------------------------------------------------------------|----------------------------------------------------------------|---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | Nr kat. | Nazwa produktu | Właściwości | | [KK4752](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/kk4752) | KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) Universal Kit | Wysokowydajna, szybka, jednoetapowa kwantyfikacja RNA przy użyciu specyficznych dla sekwencji sond fluorogenicznych | __*ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit*__ - Kompatybilny ze wszystkimi głównymi instrumentami qPCR Odwrotna transkryptaza ABScript II w zestawie zapewnia niezawodną odwrotną transkrypcję RNA. Po odwrotnej transkrypcji, polimeraza Taq w wersji hot-start jest aktywowana w temperaturze 95 °C, a odwrotna transkryptaza ABScript II jest jednocześnie inaktywowana. W sekwencyjnej reakcji PCR aktywność egzonukleazy 5′-3′ polimerazy Taq rozszczepia zhybrydyzowaną sondę, oddzielając reporter od wygaszacza i uwalniając sygnał fluorescencyjny. Zestaw ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit jest gotowym do użycia zestawem do odwrotnej transkrypcji i późniejszego qPCR opartego na sondzie w jednej probówce. Elastyczny format tego zestawu obejmuje dwa oddzielne 50-krotne stężenia barwnika ROX (pasywne odniesienie), które należy dodać zgodnie z wymaganiami określonych instrumentów qPCR. | | | | |---------------------------------------------------------------------|----------------------------------------|-------------------------------------------------------------------------------| | Nr kat. | Nazwa produktu | Właściwości | | [RK20407](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/rk20407) | ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit | Analizuje próbki RNA o niskim poziomie wejściowym, niskie ryzyko kontaminacji | Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych. ## Dwuetapowe produkty RT-qPCR dla większej elastyczności Oferujemy wszystkie odczynniki potrzebne do przeprowadzenia odwrotnej transkrypcji, a następnie analizy PCR zsyntetyzowanego cDNA w oddzielnych probówkach dla większej elastyczności w eksperymentach. Bez obaw włącz nasze dwuetapowe produkty RT-qPCR do przepływu pracy PCR bez uszczerbku dla elastyczności. Dzięki różnym opcjom dostępnym dla naszych niezawodnych produktów PCR, nie dokonasz złego wyboru. *__Zestawy i mieszanki do syntezy cDNA__* Aby zaspokoić swoje potrzeby w zakresie odwrotnej transkrypcji, wybierz spośród różnych typów enzymów i kilku opcji pakowania. Wszystkie te produkty zawierają odczynniki niezbędne do syntezy pierwszej nici i są dostępne jako zestawy z oddzielnymi odczynnikami do optymalizacji lub jako kompletne mieszanki do szybkiej i wygodnej syntezy pierwszej nici. Nr kat.Nazwa produktuWłaściwości [STR1](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/STR1)Enhanced Avian First-Strand Synthesis Kit - Wysoko oczyszczony eAMV-RT - transkrybuje trudną strukturę drugorzędową w wysokiej temperaturze - Wykrywa mRNA o niskiej liczebności [11483188001](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/ROCHE/11483188001)Zestaw do syntezy pierwszej nici cDNA do RT-PCR - Zawiera AMV RT zapewniający wyższą termostabilność w porównaniu do M-MuLV RT - Zawiera inhibitor RNazy i mieszankę dNTP do PCR [RDRT](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/SIGMA/RDRT)ReadyScript™ cDNA Synthesis Mix - Czułe i łatwe w użyciu rozwiązanie do dwuetapowej reakcji RT-PCR - ReadyScript™ Enzym jest zmodyfikowanym przez RNazę H (+) M-MuLV RT [11117831001](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/11117831001)Zestaw do syntezy cDNA - Zoptymalizowana procedura jednorurowa do syntezy dwuniciowego cDNA do 3 kb z całkowitego RNA lub mRNA [THIFICDNARO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/thificdnaro)Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit - Zaprojektowany do odwrotnej transkrypcji RNA ze zwiększoną wiernością w porównaniu do innych odwrotnych transkryptaz - Zoptymalizowany do dwuetapowej RT-PCR [5893151001](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/05893151001)Transcriptor Universal cDNA Master - Wygodne, szybkie rozwiązanie do syntezy cDNA i analizy PCR w czasie rzeczywistym< - Niezależnie od używanego instrumentu PCR, ta mieszanka wzorcowa, dostarczana w dwóch fiolkach, wykorzystuje pełny potencjał testów qRT-PCR *__Enzymy RT - odwrotne transkryptazy__* Wybierz z naszej kolekcji enzymów RT i znajdź taki, który odpowiada złożoności transkryptu RNA. Nasze produkty obejmują standardowe odwrotne transkryptazy Avian Myeloblastosis Virus (AMV) i Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV), a także ich ulepszone wersje zapewniające wyższą czułość. Nr kat.Nazwa produktuWłaściwości [.A4464](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/STR1)Ulepszona ptasia odwrotna transkryptaza - Większa czułość dla mRNA o niskiej obfitości - Najlepszy enzym do transkrypcji przez trudną strukturę drugorzędową [ERT-RO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/ROCHE/ERTRO)Expand™ Reverse Transcriptase - Transkrybuje fragmenty cDNA do 13.5 kb - Może używać cDNA lub jednoniciowego DNA [M1302](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/M1302)M-MLV Reverse Transcriptase - Używa jednoniciowego RNA, DNA lub hybrydy RNA-DNA - Generuje pierwszą nić cDNA do 7 kb [10109118001](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/ROCHE/10109118001)Reverse Transcriptase AMV - Zawiera 5X bufor do syntezy pierwszej nici cDNA [11062603001](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/ROCHE/11062603001)Reverse Transcriptase M-MuLV - Brak aktywności endonukleazy i znacznie niższa aktywność RNazy H w porównaniu do AMV RT [TRANSRTRO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/transrtro)Transcriptor Reverse Transcriptase - Osiągnij wysoką czułość w dwuetapowym RT-PCR. Odwrotna transkryptaza Transcriptor jest stosowana w konwencjonalnych termocyklerach i urządzeniach do PCR w czasie rzeczywistym (np. LightCycler® Instruments). - Odwrotna transkrypcja trudnych szablonów. Enzym działa dobrze w podwyższonych temperaturach, pokonując w ten sposób drugorzędową strukturę RNA (np. szablony RNA bogate w GC) i ułatwiając optymalne warunki reakcji. Dowiedz się więcej o rozwiązywaniu problemów RT-qPCR w [stronie rozwiązywania problemów RT-PCR / RT-qPCR.](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting) ## qZestawy do qPCR Produkty ReadyMixTM zawierają wszystkie niezbędne składniki do qPCR. *__Probe Based qPCR__* Probe based qPCR opiera się na specyficznym dla sekwencji wykrywaniu pożądanego produktu PCR. W przeciwieństwie do metod qPCR opartych na SYBR® Green, które wykrywają wszystkie dwuniciowe DNA, qPCR oparty na sondach wykorzystuje sondę znakowaną fluorescencyjnie, co skutkuje zwiększoną specyficznością i czułością. Dodatkowo dostępne są różne barwniki fluorescencyjne, dzięki czemu można stosować wiele starterów do jednoczesnej amplifikacji wielu sekwencji. Nr kat.Nazwa produktuWłaściwości [D6442](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/d6442)JumpStart™ Taq ReadyMix™ for High Throughput Quantitative PCR - Gotowa do użycia mieszanina 2x do qPCR z ROX - Idealna do wysokoprzepustowych, ilościowych metod PCR z wykorzystaniem wykrywania sond fluorescencyjnych - JumpStart™ Taq zapobiega niespecyficznej amplifikacji i zwiększa wydajność docelową [D7440](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/d7440)JumpStart™ Taq ReadyMix™ for Quantitative PCR - Gotowa do użycia mieszanina 2x do wykonywania ilościowych testów PCR, które opierają się na sondzie fluorescencyjnej [L6669](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/l6669)LuminoCt® qPCR ReadyMix™ - Idealny do szybkich, wysokowydajnych 2-etapowych protokołów qPCR z wynikami testów w zaledwie 25 minut - Do szybkiej ilościowej reakcji PCR opartej na sondach [FSTMPMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/fstmpmmro)FastStart TaqMan® Probe Master - Używaj z dowolnym urządzeniem do qPCR w czasie rzeczywistym innym niż LightCycler® Instrumenty - Wybieraj spośród dwóch preparatów - jednego zawierającego barwnik referencyjny ROX i jednego bez ROX - Zawiera dUTP, aby zapobiec zanieczyszczeniu przez przeniesienie [FSUPMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/fsupmmro)FastStart Universal Probe Master (Rox) - Uzyskaj czułe, specyficzne wyniki w testach z użyciem uniwersalnych sond bibliotecznych lub innych sond hydrolizujących< - Aplikuj fragmenty o długości do 500 bp, w tym te, które są bogate w GC lub AT - Zawiera dUTP, aby zapobiec przenoszeniu zanieczyszczeń< [PFUKB](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/pfukb)KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix, uniwersalny - Kompatybilny ze wszystkimi technologiami opartymi na sondach fluorogenicznych, w tym z sondami hybrydyzacyjnymi (np.g., FRET), sondami hydrolizy (np. TaqMan® probes) i sondami przemieszczenia (np. molecular beacons). *__SYBR® Green Based qPCR__* SYBR® Green I, powszechnie stosowany fluorescencyjny barwnik wiążący DNA, wiąże wszystkie dwuniciowe DNA. Wykrywanie jest monitorowane poprzez pomiar wzrostu fluorescencji w całym cyklu. SYBR® Green I ma maksima wzbudzenia i emisji odpowiednio 494 nm i 521 nm. Specyficzność naszej detekcji qPCR opartej na SYBR® Green jest znacznie zwiększona przez włączenie polimerazy Taq z gorącym startem, takiej jak JumpStart™ Taq. Nr kat.Nazwa produktuWłaściwości [KCQS02](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/kcqs02)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ with ROX™ - Dla urządzeń Applied Biosystems® (ABI) [KCQS01](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/kcqs01)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ Low ROX™ - Dla urządzeń Applied Biosystems® (ABI) i Stratagene®&instrumentów [KCQS00](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/kcqs00)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ - Dla analizatorów Bio-Rad®, Cepheid®, Eppendorf®, Illumina®, Corbett® i Roche® systemy [KCQS03](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/kcqs03)KiCqStart® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ iQ™ - Z fluoresceiną dla systemów Bio-Rad® [S4438](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/s4438)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ - Do ilościowego PCR, MgCI2 w buforze [S5193](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/s5193)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ - Do ilościowej reakcji PCR, bez MgCl2 w buforze [S9194](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/s9194)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ for High Throughput qPCR - SYBR® Zielony odczynnik qPCR, pasywny barwnik referencyjny w zestawie [S1816](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/s1816)SYBR® Green JumpStart™ Taq ReadyMix™ do ilościowej reakcji PCR - Formuła kapilarna SYBR® Zielony odczynnik qPCR do systemów kapilarnych Roche LightCycler® [SFUKB](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/sfukb)KAPA SYBR® FAST qPCR Master Mix, Universal - Skonsekwentne wykrywanie słabo kopiowanych i trudnych celów - Kompletne przebiegi PCR w czasie rzeczywistym w zaledwie 40 minut< [FSUSGMMRO](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/roche/fsusgmmro)FastStart Universal SYBR® Green Master (Rox) - Do amplifikacji i wykrywania dowolnego docelowego DNA lub cDNA, w tym bogatych w GC lub AT - Zawiera dUTP, aby zapobiec zanieczyszczeniu przez przeniesienie [L6544](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/l6544)LuminoCt® SYBR® Green qPCR ReadyMix™ - Do szybkiej ilościowej reakcji PCR SYBR® Green z wynikami testu w zaledwie 25 minut - Z oddzielną fiolką ROX - Praktycznie eliminuje potrzebę optymalizacji parametrów testu Dowiedz się więcej na temat SYBR® Green based qPCR w [tym krótkim filmie.](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/how-qpcr-works) ## MicroRNA-Based RT-qPCR .Znajdź produkty do odwrotnej transkrypcji mikroRNA, których potrzebujesz, dzięki naszej linii produktów  MystiCq® . *__MystiCq® MicroRNA RT-qPCR SystemR__* MystiCq® odczynniki microRNA zapewniają kompletny przepływ pracy SYBR® Green RT-qPCR do ilościowego określania ekspresji w zaledwie trzech krokach: 1. izolacja 2. synteza cDNA 3. kwantyfikacja przez amplifikację . Dowiedz się więcej na temat przepływu pracy MystiCq® na naszej stronie produktu MystiCq® . Produkty te posiadają: - Ponad 1400 wstępnie zaprojektowanych i przetestowanych w mokrym laboratorium par starterów zaprojektowanych tak, aby celować tylko w dojrzałe mikroRNA - Konwersja wszystkich mikroRNA, umożliwiająca niemal nieograniczoną liczbę odczytów z pojedynczej próbki - Wybór trzech różnych produktów do izolacji mikroRNA<   ## qPCR Assay Designs and Reagents for SARS-CoV-2 Research Jesteśmy zaangażowani w dostarczanie naukowcom niezawodnych zasobów i narzędzi wspierających walkę z COVID-19 (SARS-CoV-2). W odpowiedzi na zapotrzebowanie społeczności na odczynniki i protokoły specyficzne dla SARS-CoV-2, nasi naukowcy ocenili zestawy One-Step RT-qPCR oparte na RNA do wykrywania celu SARS-CoV-2. Tylko do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych. *__Projekt eksperymentalny i metody__* Ten eksperyment został przeprowadzony w celu ustalenia, czy nasze zestawy One-Step RT-qPCR mogą wykrywać SARS-CoV-2. Test przeprowadzono zgodnie z protokołem CDC do wykrywania SARS-CoV-2 przy użyciu zsyntetyzowanego RNA SARS-Cov-2 jako matrycy, rozcieńczonego do 105, 104, 103, 102 i 10 kopii. Próbka testowa zawierała matrycę, odczynniki z każdego zestawu, startery DNA specyficzne dla celu /TaqMan® zestawy sond dla N1 i N2 (N, gen nukleokapsydu). W każdym teście uwzględniono również próbki NTC (bez kontroli szablonu). Primer TargetF Primer 5'-3' R Primer, 5'-3' SondaAmplicon Rozmiar N1GACCCCAAAATCAGCGAAATTCTGTTACTGCCAGTTGAATCTG5'-FAM-ACC CCG CAT TAC GTT TGG TGG ACC-BHQ1-3'71 bp N2TTACAAACATTGGCCGCAAAGCGCGACATTCCGAAGAA5'-FAM-ACA ATT TGC CCC CAG CGC TTC AG-BHQ1-3'67 bp __Tabela 2.__ Zestawy starterów i sond przeznaczone do specyficznego wykrywania SARS-CoV-2 (testy N1 i N2). Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych. *__Wyniki testów__* A: Test N1  B: Test N2  __Rysunek 2.__ Testy wykrywania SARS-CoV-2 z wykorzystaniem Quantitative RT-PCR ReadyMix™ (nr kat. QR200) dla starterów N1 (wykres A) i N2 (wykres B). Testy wykrywania SARS-CoV-2 N1 (wykres A) i N2 (wykres B) na __Rysunku 2__ zostały wykonane przy użyciu Quantitative RT-PCR ReadyMix™ (nr kat. [QR200](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/qr0200)) przy użyciu zsyntetyzowanego RNA SARS-CoV-2 jako matrycy. Oba testy wykazały czułość wykrywania zaledwie 102 kopii matrycy. Nie zaobserwowano amplifikacji w próbkach NTC A: Test N1  B: Test N2  __Rysunek 3.__ Testy wykrywania SARS-CoV-2 wykorzystujące KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (nr kat. KCQS07) dla starterów N1 (wykres A) i N2 (wykres B). Testy wykrywania SARS-CoV-2 N1 (wykres A) i N2 (wykres B) na __Rysunku 3__ przeprowadzono przy użyciu KiCqStart® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ (nr kat. Nr  [KCQS07](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/kcqs07)) przy użyciu zsyntetyzowanego RNA SARS-CoV-2 jako matrycy. Oba testy wykazały czułość wykrywania zaledwie 10 kopii matrycy. Nie zaobserwowano amplifikacji w próbkach NTC. A: Test N1  B: Test N2  __Rysunek 4.__ Testy wykrywania SARS-CoV-2 z wykorzystaniem uniwersalnego zestawu KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) (nr kat. KK4752) dla starterów N1 (wykres A) i N2 (wykres B). Testy wykrywania SARS-CoV-2 N1 (wykres A) i N2 (wykres B) na __Rysunku 4__ przeprowadzono przy użyciu uniwersalnego zestawu KAPA PROBE FAST One-Step qRT-PCR Master Mix (2X) (nr kat.  [KK4752](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/roche/kk4752%22)) z wykorzystaniem zsyntetyzowanego RNA SARS-CoV-2. Nr  [KK4752](https://www.sigmaaldrich.com/product/PL/pl/roche/kk4752)) przy użyciu zsyntetyzowanego RNA SARS-CoV-2 jako matrycy. Oba testy wykazały czułość wykrywania tak niską jak 102 kopii matrycy. Nie zaobserwowano amplifikacji w próbkach NTC. A: Test N1  B: Test N2  __Rysunek 5.__ Testy wykrywania SARS-CoV-2 z wykorzystaniem zestawu ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (nr kat. RK20407) dla starterów N1 (wykres A) i N2 (wykres B). Testy wykrywania SARS-CoV-2 N1 (wykres A) i N2 (wykres B) na __Rysunku 5__ przeprowadzono przy użyciu zestawu ABScript II One Step RT-qPCR Probe Kit (nr kat. Nr  [RK20407](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/rk20407)) przy użyciu zsyntetyzowanego RNA SARS-CoV-2 jako matrycy. Oba testy wykazały czułość wykrywania zaledwie 10 kopii matrycy. Nie zaobserwowano amplifikacji w próbkach NTC. *__Wnioski__* Powyższe wyniki wskazują, że nasze odczynniki i zestawy One-Step RT-qPCR są idealne do wykrywania celu SARS-CoV-2 w badaniach SARS-CoV-2. W oparciu o te informacje, testy wykorzystujące odczynniki One-Step RT-qPCR mogą wykrywać nawet 100 kopii, a w niektórych przypadkach nawet 10 kopii matrycy RNA. Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych. Nieopublikowane dane przedstawione w tym artykule technicznym pochodzą z badań wewnętrznych. Aby uzyskać więcej informacji na temat produktów RT-qPCR do wykrywania SARS-CoV-2, odwiedź [Sigma-Aldrich.com/covid19](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/life-science/covid) ## TRI Reagent® for Total RNA Isolation TRI Reagent® jest idealny do szybkiej, ekonomicznej i wydajnej izolacji całkowitego RNA lub jednoczesnej izolacji RNA, DNA i białek z próbek pochodzenia ludzkiego, zwierzęcego, roślinnego, drożdżowego, bakteryjnego i wirusowego. Produkt ten, będący mieszaniną tiocyjanianu guanidyny i fenolu w roztworze jednofazowym, skutecznie rozpuszcza DNA, RNA i białka podczas homogenizacji lub lizy próbki tkanki. Po dodaniu chloroformu lub 1-bromo-3-chloropropanu i odwirowaniu, mieszanina rozdziela się na 3 fazy: fazę wodną zawierającą RNA, interfazę zawierającą DNA i fazę organiczną zawierającą białka. Każdy składnik można następnie wyizolować po oddzieleniu faz. Jeden ml odczynnika TRI Reagent® wystarcza do wyizolowania RNA, DNA i białka z 50-100 mg tkanki, 5-10 ´ 106 komórek lub 10 cm2 powierzchni szalki hodowlanej dla komórek hodowanych w monowarstwie. Jest to jedna z najskuteczniejszych metod izolacji całkowitego RNA, którą można wykonać w ciągu zaledwie 1 godziny, zaczynając od świeżej tkanki lub komórek. Procedura ta jest bardzo skuteczna w izolowaniu cząsteczek RNA wszystkich typów o długości od 0,1 do 15 kb. Uzyskany RNA jest nienaruszony, z niewielką lub żadną ilością zanieczyszczającego DNA i białka. Może być stosowany do Northern blot, izolacji mRNA, *translacji in vitro* , testu ochrony przed RNazą, klonowania i PCR. TRI Reagent® był szeroko stosowany w inaktywacji wirusów i ekstrakcji wirusowego RNA do wykrywania SARS-CoV-2 za pomocą testów RT-qPCR w kilku badaniach naukowych.1, 2, 3 Wykazano, że jest idealny do izolacji i przechowywania mi-RNA w temperaturze -800C przez dłuższy czas.4 Został użyty do ekstrakcji RNA koronawirusa kotów i psów, który jest następnie wykorzystywany w teście RT-PCR.5, 6 Został również użyty do izolacji cytoplazmatycznego RNA z komórek Vero zakażonych SARS-CoV. 7 | | | | |-----------------------------------------------------------------|----------------|------------------------------------------------------------------------------------| | Nr kat. | Nazwa produktu | Właściwości | | [T9424](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/product/sigma/t9424) | Odczynnik TRI® | Do przetwarzania tkanek, komórek hodowanych w monowarstwie lub peletek komórkowych | Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych. ## Materiały Przepraszamy, wystąpił nieoczekiwany błąd Response not successful: Received status code 500 ### Referencje 1\. Dimke H, Larsen SL, Skov MN, Larsen H, Hartmeyer GN, Moeller JB. Phenol-chloroform-based RNA purification for detection of SARS-CoV-2 by RT-qPCR: comparison with automated systems. [https://doi.org/10.1101/2020.05.26.20099440](https://doi.org/10.1101/2020.05.26.20099440) 2\. Alhamlan F, Alqahtani A, Bakheet D, Bohol M, Althawadi S, Mutabagani M, Almaghrabi R, Obeid D. Development and Validation of Two In-house, Low-Cost SARS-CoV-2 Detection Assays. [https://doi.org/10.1101/2020.05.18.20105510](https://doi.org/10.1101/2020.05.18.20105510) 3\. Toptan T, Hoehl S, Westhaus S, Bojkova D, Berger A, Rotter B, Hoffmeier K, Cinatl J, Ciesek S, Widera M. Optimized qRT-PCR Approach for the Detection of Intra- and Extra-Cellular SARS-CoV-2 RNAs. IJMS. 21(12):4396. [https://doi.org/10.3390/ijms21124396](https://doi.org/10.3390/ijms21124396) 4\. Mraz M, Malinova K, Mayer J, Pospisilova S. 2009. MicroRNA isolation and stability in stored RNA samples. Biochemical and Biophysical Research Communications. 390(1):1-4. [https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2009.09.061](https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2009.09.061) 5\. Gunn-Moore DA, Gruffydd-Jones TJ, Harbour DA. 1998. Detection of feline coronaviruses by culture and reverse transcriptase-polymerase chain reaction of blood samples from healthy cats and cats with clinical feline infectious peritonitis. Veterinary Microbiology. 62(3):193-205. [https://doi.org/10.1016/s0378-1135(98)00210-7](https://doi.org/10.1016/s0378-1135%2898%2900210-7) 6\. Erles K, Toomey C, Brooks HW, Brownlie J. 2003. Detection of a group 2 coronavirus in dogs with canine infectious respiratory disease. Virology. 310(2):216-223. [https://doi.org/10.1016/s0042-6822(03)00160-0](https://doi.org/10.1016/s0042-6822%2803%2900160-0) 7\. Darnell ME, Subbarao K, Feinstone SM, Taylor DR. 2004. Inactivation of the coronavirus that induces severe acute respiratory syndrome, SARS-CoV. Journal of Virological Methods. 121(1):85-91. [https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.06.006](https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2004.06.006) \*Ten artykuł jest preprintem i nie został zrecenzowany. Raportuje nowe badania medyczne, które nie zostały jeszcze ocenione, a zatem nie powinny być wykorzystywane do kierowania praktyką kliniczną. __Powiązane artykuły__ - [Jak działa qPCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/qpcr/how-qpcr-works) - [RT-qPCR Basic Troubleshooting](https://www.sigmaaldrich.com/PL/en/technical-documents/protocol/genomics/qpcr/rt-qpcr) - [Projektowanie testów PCR/qPCR/dPCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/protocol/genomics/pcr/pcr-qpcr-dpcr-assay-design) - [Optymalizacja i walidacja testów PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/assay-optimization-and-validation) - [Synteza oligonukleotydów DNA](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/dna-oligonucleotide-synthesis) - [Zablokowany kwas nukleinowy i drobne spoiwo / Eclipse Dark Quencher](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/locked-nucleic-acids-faq) - [Kwantyfikacja oligonukleotydów](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/quantitation-of-oligos) - [Rozwiązywanie problemów z RT-PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/troubleshooting) - [Zobacz więcej](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __Powiązane kategorie produktów__ - [Odczynniki i zestawy PCR](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/molecular-biology-and-functional-genomics/pcr-and-amplification/pcr-reagents-and-kits) - [Produkty Roche Life Science](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/molecular-biology-and-functional-genomics/roche-life-science-products) - [Produkty do testowania konopi indyjskich: Cultivator Solutions](https://www.sigmaaldrich.com/PL/pl/products/analytical-chemistry/cannabis-testing) Góra __Zaloguj się, aby kontynuować__ Zaloguj się lub utwórz konto, aby kontynuować. Zaloguj się__Nie masz konta użytkownika?__Zarejestruj Dla wygody naszych klientów ta strona została przetłumaczona maszynowo. Dołożyliśmy starań, aby zapewnić dokładne tłumaczenie maszynowe. Tłumaczenie maszynowe nie jest jednak doskonałe. Jeśli tłumaczenie maszynowe nie spełnia Twoich oczekiwań, przejdź do wersji w języku angielskim. An unknown error has occured.