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质粒DNA纯化

质粒纯化简介

DNA、RNA和蛋白等大分子的提取常用于分子生物学研究。核酸提取和纯化已经不再是一个复杂、密集劳动力的过程。现在的核酸纯化技术可提供较高的样品输出量、纯度和生物分子可扩展性,并具有最小的交叉污染。也常使用转为中高通量实验室所设计的自动化系统。

制备用于质粒纯化的核酸

核酸制备一开始需要收集样本(细菌,动物组织和细胞,或植物组织)。无论使用哪一种DNA制备方法,都需要以恰当的方式收集和处理样本,才能得到高质量核酸。如工作流程所示(图1),从样本收集到核酸纯化可能包含样本收集,运输,存档,储存,核酸纯化这一系列过程。

包含样本收集、运输、存档和DNA纯化的工作流程。

图 1.包含样本收集、运输、存档和DNA纯化的工作流程。

核酸提取

DNA提取包含了 细胞膜裂解,去除组蛋白,RNA和脂质和纯化。各种不同的提取和纯化方法见表1

表1.核酸提取方法综述

质粒DNA

质粒是一种小型的环状双链DNA,在分子生物学可用于遗传信息的操作和解码。因为操作简单,它们已经成为了克隆和生物技术中的重要组成部分。

质粒DNA纯化有多种方法。我们致力于为您带来更加绿色的替代产品,这些产品遵守一项或多项绿色化学12项原则。相比标准DNA提取方法使用苯酚和氯仿,GenElute产品是更安全的化学产品。

GenElute™制备小提试剂盒是一种从大肠杆菌培养物中提取质粒DNA的简单、快速、高效的方法。试剂盒结合了硅基膜技术和方便的离心管,能从每毫升过夜培养液中回收到最多20 mg高拷贝质粒DNA。以下是GenElute™制备小提试剂盒质粒DNA提取和纯化主要步骤(图2)。

  1. 离心收获细菌细胞,使用改良碱性SDS法裂解,高盐条件下DNA被二氧化硅吸收。
  2. 然后通过简单的清洗步骤去除污染物。
  3. 用Tris-EDTA缓冲液洗脱DNA。回收到的质粒DNA主要是超螺旋形式。
  4. DNA可用于限制性内切酶消化,克隆,PCR,转化,转录,传统和自动化测序。

部分质粒DNA纯化试剂盒见表2不同质粒DNA纯化方法详细说明(PDF)。.

从质粒制备和提取核酸工作流程

图 2.从质粒制备和提取核酸工作流程。PCR DNA纯化:货号NA1020和PCR9604

表2.质粒DNA纯化试剂盒
表3.PCR纯化产品

参考文献

1.
Tan SC, Yiap BC. 2009. DNA, RNA, and Protein Extraction: The Past and The Present. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 20091-10. https://doi.org/10.1155/2009/574398
2.
Buckingham L, Flaws ML. 2007. Flaws, Molecular Diagnostics: Fundamentals, Methods, & Clinical Applications. Philadelphia, USA: F.A.Davis Company.
3.
Weaver R. 2002. 分子生物学. 2nd edition. San Francisco: McGraw Hill.