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主页酶活性测定牛血浆凝血酶

牛血浆凝血酶

货号T7513

储存温度:–20 °C
CAS RN 9002-04-4 EC 3.4.21.5 别名:IIa因子

产品描述

凝血酶是一种内溶性丝氨酸蛋白酶,可选择性裂解纤维蛋白原的精氨酸-甘氨酸键,从而形成纤维蛋白并释放纤维蛋白肽A和B。1,2

体内凝血酶的主要形式是酶原,即凝血酶原(因子II),主要在肝脏中产生。正常人血浆中凝血酶原的浓度约为5-10 mg / dL。3凝血酶原是一种糖蛋白,含糖量约为~12%。3

凝血酶原在体内由活化因子X裂解,释放活化肽并将凝血酶裂解成轻链和重链,产生具有催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一条轻链(A链,MW ~6 kDA)和一条重链(B链,MW ~31 kDa)组成。这两条链通过一条二硫键连接。4 人凝血酶的B链由肽部分 (MW 29,485 Da) 和碳水化合物部分 (MW 2,334 Da) 组成,其中在三个天冬酰胺残基处N-连接糖基化。5,6 牛凝血酶含有1.7%葡萄糖胺、1.8%唾液酸、0.61%半乳糖和0.95%甘露糖。7

凝血酶还含有γ-羧基谷氨酰残基。这些修饰的谷氨酰残基是微粒体酶(维生素K依赖性羧化酶)的羧化产物。γ-羧基谷氨酰残基是与带负电荷的磷脂表面进行Ca2+依赖性相互作用所必需的,这对凝血酶原转化为凝血酶至关重要。4 凝血酶原在体内是在磷脂膜表面活化,磷脂膜可与凝血酶原的氨基末端以及因子Va和Xa结合。因为将因子V激活成因子Va的初始凝血酶量较少,所以激活过程开始缓慢。

凝血酶的最佳裂解位点:2

  1. A-B-脯氨酸-精氨酸-||-X-Y,其中A和B是疏水性氨基酸,X和Y是非酸性氨基酸
  2. 甘氨酸-精氨酸-||-甘氨酸

任意哺乳动物的凝血酶可凝结其他哺乳动物的纤维蛋白原。8

纤维蛋白原的凝血酶裂解仅发生于精氨酸残基处;但是,裂解位点不是特异性的,可产生2种产物。初级裂解产物纤维蛋白肽A是从纤维蛋白原第16位氨基酸后裂解,有时从第19位氨基酸后裂解,而次级裂解产物纤维蛋白肽B是在第14位氨基酸处裂解产生。9

凝血酶活化不需要二价金属离子或辅因子。但是,凝血酶的Na+依赖性变构激活在确定凝血酶对精氨酸残基后裂解的主要特异性中发挥作用。10 血栓调节蛋白在蛋白C的激活过程中作为凝血酶辅因子而发挥作用。11

在某些储存条件下,α-凝血酶自溶消化形成β和γ-凝血酶,两者没有纤维蛋白溶解活性,但对纤维蛋白原以外的合成肽底物和蛋白底物具有一定活性。12 该凝血酶制剂主要是α-凝血酶。

凝血酶(人和牛)可催化硝基苯胺、甲苯磺酰基-精氨酸-硝基苄酯和硫代苄酯几种 肽合成底物的水解。13

催化pH范围:14 5–10,最佳pH:14 8.3,凝血酶沉淀≤pH 5

人类同工酶pI范围:6.35-7.6.
牛pI范围:15 7.05–7.1

= 18.3(人)16
= 19.5 (牛)17

该产物由含有盐和柠檬酸钠缓冲液 (pH 6.5) 的溶液冻干而得。

比活性:≥2,000 NIH单位/mg蛋白( = 19.5)

单位定义:以NIH单位表示活性,直接与NIH凝血酶参考标准批次K比较而得。NIH分析方法基于Biggs方法进行改进,使用0.2 mL稀释血浆(与盐水1:1)作为底物和0.1 mL白蛋白溶液。18 只使用15-25秒范围内的凝固时间测定凝血酶活性。最佳凝固温度为37 °C。

文献中的凝血酶浓度通常以不同的活性单位进行报告。18,19 文献中使用以下几种惯例表达凝血酶活性:

1 IOWA单位 = 0.83 NIH单位
1 WHO单位 = 1 NIH单位 1 NIH单位 = 0.324 ± 0.073 mg 1 NIH单位 = 1 USP单位

注意事项和免责声明

本产品仅可用于研发用途,不可用于药物、家用或其他用途。有关危险和安全处理方法的信息,请参阅材料安全数据表。

制备说明

产物溶于水 (10 mg/mL),得到澄清溶液。

储存方法/稳定性

可以用0.1%(w/v)BSA溶液以100单位/mL的浓度制备储备溶液。在0-5 °C下,储备溶液一周内有效。溶液在pH 6.5下最稳定,pH >7时凝血酶活性显著降低。凝血酶溶液易吸附到玻璃上,建议将溶液分装在塑料管中,在–20 °C下长期储存。

将冻干粉末在–20 °C下储存。

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合成底物:13

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材料
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