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主页凝胶电泳DNA/蛋白质电泳及故障排除表

DNA/蛋白质电泳及故障排除表

聚丙烯酰胺凝胶中DNA的有效分离范围

%丙烯酰胺(w/v)1有效分离范围(bp)
3.51000-2000
5.080-500
8.060-400
12.040-200
15.025-150
20.06-100
1N,N'-亚甲基双丙烯酰胺的含量是丙烯酰胺浓度的1/30。

琼脂糖凝胶中DNA的有效分离范围

%琼脂糖(w/v)
线性DNA分子(kb)的有效分离范围
0.35-60
0.61-20
0.70.8-10
0.90.5-7
1.20.4-6
1.50.2-3
2.00.1-2

加样染料的DNA大小迁移

琼脂糖浓度(%w/v)二甲苯溴酚蓝
0.1-1.54-5 kb400-500 bp
2.0-3.0(筛分琼脂糖)750 bp100 bp
4.0-5.0(筛分琼脂糖)125 bp25 bp

SDS-PAGE蛋白电泳疑难解答指南

问题可能的原因解决方案
微弱或缺失的蛋白条带加样量低于染色剂的检测水平检查A280并增加样品浓度
  使用更敏感的染色剂(例如银染)
 蛋白质没有固定在凝胶中使用同样固定蛋白质的染色剂
  使用凝胶固定液
 小肽(<4kda)不固定在凝胶中用5%戊二醛固定凝胶。染色前用水冲洗凝胶移液器吸头
 蛋白质被降解检查A280并避免蛋白酶污染
 蛋白质跑出凝胶使用较高浓度的PAGE凝胶。推荐凝胶浓度参见预制凝胶,如果大小未知,可使用4-20%凝胶
染色后在凝胶上成膜沉淀考马斯蓝R在甲醇中漂洗凝胶15秒,立即回到水中或脱色
电泳条带分辨率差蛋白浓度高每蛋白负载10μg或每蛋白提取物100μg
 凝胶的年龄,由于碱催化订购新鲜预制凝胶或浇铸新鲜凝胶
 凝胶浓度不当推荐凝胶浓度参见预制凝胶,如果大小未知,可使用4-20%凝胶
电泳条带弥散高盐浓度透析样品,用TCA沉淀蛋白或使用脱盐柱
 蛋白浓度高每蛋白负载10μg或每蛋白提取物100μg
 蛋白质聚集样品中加入4-8 M尿素
 电压偏高10-15v/cm电泳
孔内蛋白质沉淀疏水蛋白样品中加入4-8 M尿素
样品中的白色沉淀SDS沉淀可能是由于样品中存在胍盐或钾盐
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