การหาลำดับ

Sanger Sequencing

ในช่วงต้นวิธีการวิเคราะห์ทางเคมีสามารถกำหนดองค์ประกอบของกรดนิวคลีอิก อย่างไรก็ตาม Fred Sanger และเพื่อนร่วมงานได้พัฒนาวิธีการ - ในขั้นต้นใช้ชิ้นส่วนที่ย่อยด้วยรังสีและการแยกส่วนสองมิติ - เพื่อให้บางส่วนของลำดับนิวเคลียสที่สมบูรณ์ครั้งแรก ความก้าวหน้าในภาคสนามยังคงดำเนินต่อไปเป็นเวลาหลายทศวรรษโดยการปรับปรุงแต่ละครั้งจะเพิ่มเข้าไปในห้องสมุดที่กำลังเติบโตของโปรตีนและจีโนมตามลำดับ การปรับปรุงเหล่านี้รวมถึงการแยกนิวคลีโอไทด์โดยความยาวโดยใช้เจลอิเล็กโตรโฟเรซิสตามด้วยอิเล็กโตรโฟเรซิสของเส้นเลือดฝอย นอกจากนี้การรวมตัวกันของนิวคลีโอไทด์ที่ติดฉลากอย่างเรืองแสงและการวิเคราะห์คอมพิวเตอร์อัตโนมัติของแต่ละส่วนของกรดนิวคลีอิกทั้งหมดในขณะนี้กำหนดวิธีการเรียงลำดับที่ทันสมัยของเรนเจอร์

วิธีการจัดลำดับ DNA

ในขณะที่วิธีการลำดับดีเอ็นเอยังคงมีการปรับปรุงตั้งแต่ต้นกำเนิดของเทคโนโลยีนี้ส่วนประกอบพื้นฐานหลายอย่างยังคงจำเป็นและใช้โดยแพลตฟอร์มการเรียงลำดับดีเอ็นเอที่ทันสมัย การเตรียมดีเอ็นเอมักจะรวมถึงการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอจากสิ่งมีชีวิตโฮสต์ ส่วนประกอบที่สำคัญเพิ่มเติมรวมถึงฐานดีเอ็นเอฟรีไพรเมอร์ดีเอ็นเอฐานดีเอ็นเอดัดแปลงที่มีแท็กเรืองแสง (ฐานเทอร์มิเนเตอร์) และโพลิเมอร์ดีเอ็นเอจะถูกรวมเข้าด้วยกันเป็นภาชนะเดียว เรือที่มีส่วนประกอบทั้งหมดเหล่านี้ผ่านชุดของขั้นตอนการทำความร้อนและการระบายความร้อนจะผลิตห้องสมุดของลำดับดีเอ็นเอขนาดเล็กที่สัมพันธ์กับลำดับดีเอ็นเอเต็มความยาวของความสนใจแต่ละลงท้ายด้วยฐานปลายขั้วที่ติดฉลากอย่างเรืองแสง ดีเอ็นเอเส้นใหม่ที่มีนิวคลีโอไทด์ที่ติดฉลากไว้ปลายเรืองแสงจะถูกแยกออกจากกันตามความยาวผ่านหลอดเส้นเลือดฝอยและจัดเรียงตามขนาด จากนั้นเลเซอร์จะถูกใช้เพื่อกระตุ้นฐานฟลูออเรสเซนต์บนแต่ละเกลียวในขณะที่กล้องจะจับภาพสัญญาณ สุดท้ายโดยทั่วไปแล้วคอมพิวเตอร์จะใช้ในการรวบรวมข้อมูลที่เก็บรวบรวมไว้ลงในลำดับ DNA แบบเต็มความยาว