[ข้ามไปยังเนื้อหา](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th) สินค้า รถเข็น0 THTH สินค้า ผลิตภัณฑ์การใช้งานบริการทรัพยากรการสนับสนุน [เข้าสู่ระบบ / ลงทะเบียน](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [ค้นหาคำสั่งซื้อ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/order-lookup) [สั่งซื้อด่วน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/quick-order) รถเข็น0 [หน้าแรก](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th)[การแสดงออกของยีนและการปิดกั้นการแสดงออกของยีน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/applications/genomics/gene-expression-and-silencing)โปรโตคอลการฉีดวัคซีน # โปรโตคอลการฉีดวัคซีน  ไลบรารี MISSION ® TRC shRNA เป็นคอลเลกชันเวกเตอร์ shRNA ที่ใช้ lentiviral สำหรับใช้ในการศึกษาแบบล้มลงของยีน โปรโตคอลนี้อธิบายถึงการใช้  อนุภาคมิชชั่น ® TRC shRNA lentiviral โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการปิดเสียงระยะยาวและการตรวจสอบ phenotypic ในเซลล์ระงับ โปรโตคอลต่อไปนี้ได้รับการพัฒนาจากวรรณคดี 1 สำหรับใช้ในเพลท 6 หลุมกับ  อนุภาค lentiviral Mission ® ระบบ ExpressMag ™ (SHM0[](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/SHM01) 1 หรือ [SHM02)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/SHM02)ได้รับการปรับให้เหมาะสมกับเซลล์ระงับการถ่ายโอนในเวลาน้อยกว่าโปรโตคอลนี้ 24 ชั่วโมงและในรูปแบบการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหลายรูปแบบ #### ไปที่โดยตรง - [วัสดุ](https://www.sigmaaldrich.com#material) - [โปรโตคอล](https://www.sigmaaldrich.com#protocol) - [หมายเหตุ](https://www.sigmaaldrich.com#notes) ## [](https://www.sigmaaldrich.com)วัสดุ #### มิชชั่น® อนุภาค lentiviral ใช้ [SHC002](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/sch002v) VOR [SHC001](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/SHC001V) Vสำหรับ การเพิ่มประสิทธิภาพโปรโตคอลการถ่ายโอน การถ่ายโอน [SHC003](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/SHC003V) vcan จะถูกตรวจสอบผ่านทาง FACS หรือกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แต่โปรโตคอลสำหรับเรื่องนี้อยู่นอกขอบเขตของเอกสารนี้ การปรับโปรโตคอลของคุณให้เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญอันดับแรกเพื่อให้คุณมั่นใจในประสิทธิภาพการถ่ายโอนของคุณ ซึ่งจะลดปริมาณผลกระทบของเพย์โหลดเลนติไวรัส (ไม่ว่าจะเป็น shRNA หรือเพย์โหลดแบบกำหนดเอง) จากประสิทธิภาพการถ่ายโอน จากนั้นเมื่อเปลี่ยนไปใช้ MISSION® lentivirus ที่แสดงถึง SHRNA การเปลี่ยนแปลงจำนวนโคโลนีหรือเซลล์ที่ทำงานได้อาจเกิดจากผลกระทบของ SHRNA และไม่สามารถเกิดจากประสิทธิภาพการถ่ายโอนต่ำได้ หลังจากที่ประสิทธิภาพการถ่ายโอนได้รับการปรับให้เหมาะสมแล้วให้ใช้ อนุภาคมิชชั่น ® เลนติไวรัสที่แสดงให้เห็นถึง shRNA ที่มุ่งเป้าไปที่ยี  [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/gene-expression-and-silencing/custom-services)   นที่คุณสนใจหรือใช้ acustom mission ® lentiviral partl ที่แสดงให้เห็นถึง shRNA หรือยีนที่คุณสนใจ __Puromycin__ [(P9620)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/P9620) สารละลายสต็อก 10 mg/mL สำหรับการเลือก __สื่อเต็มรูปแบบ__ สำหรับ Jurkat Cells DME รวมถึงซีรัมวัวหรือสื่อของทารกในครรภ์ที่ไม่ได้รับความร้อน 10% สำหรับประเภทเซลล์ของคุณ __ฟ้าทริปแปน__ ([93595](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/93595)) __12 x 15 มล. Conicals__ [(CLS430790)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/CLS430790) __แผ่นวัฒนธรรมเนื้อเยื่อ 6 หลุม__ [(CLS3516)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/CLS3516) __เครื่องหมุนเหวี่ยงแบบแกว่งถัง__ เครื่องหมุนเหวี่ยงควรติดตั้งการควบคุมอุณหภูมิและอุ่นไว้ที่ 32 º C ก่อนการถ่ายโอนเซลล์ __Hemacytometer__ [(Z359629)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/Z359629) Hemacytometer ใช้สำหรับการนับเซลล์ ## [](https://www.sigmaaldrich.com)โปรโตคอล 01. กำหนดความเข้มข้นของ puromycin สุดท้ายที่จะใช้ในการเลือก ความเข้มข้นที่แน่นอนขึ้นอยู่กับสายของเซลล์และควรได้รับการกำหนดโดยการทดสอบความเป็นพิษต่อเซลล์ที่ไม่ได้รับการถ่ายโอน 72 ชั่วโมง 02. ใช้เฉพาะสิ่งของที่ผ่านการฆ่าเชื้อและงานโดยใช้เทคนิคการปลอดเชื้อของเนื้อเยื่อมาตรฐานตลอดขั้นตอนนี้ 03. อุ่นสื่อทั้งหมดล่วงหน้าที่อุณหภูมิ 37°C 04. นับเซลล์ Jurkat ที่มีการเพาะเลี้ยง 05. เจือจางเซลล์ Jurkat ลงในขนาดกลางถึงขนาดสุดท้ายที่ มีความเข้มข้น 1x10 5 เซลล์/มล. ด้วยปริมาตรสุดท้าย 14 มล. 06. ถ่ายภาพขนาด 1x10 5 เซลล์/มล. 2 มล. ลงในหลอดทรงกรวยขนาด 15 มล. ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วหกหลอด 07. เพิ่ม Mission® lentiviral particle solution ลงในเซลล์ Jurkat โดยมีค่าเท่ากับ 0 5.0 0.5 1.0 0.1 หรือ 10 ต่อกรวย 0 MOI แสดงถึงการควบคุมเชิงลบที่ไม่ผ่านการถ่ายโอนของคุณ 08. ปั่นเหวี่ยงเซลล์ที่แรงเหวี่ยง 800  *xg* เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 32°C 09. ไวรัสที่มีขนาดกลางจะถูกดูดและกำจัดอย่างเหมาะสมตามสถาบันของคุณ 10. เม็ดเซลล์แต่ละเม็ดจะถูกนำกลับมาใช้ใหม่ในสื่อ 2 มล. โดยค่อยๆวางท่อเม็ดขึ้นและลงและเม็ดที่ถูกนำกลับมาใช้ใหม่แต่ละเม็ดจะถูกถ่ายโอนไปยังที่เก็บของตัวเองในแผ่นเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 6 หลุม 11. จานจะถูกส่งกลับไปยังตู้บ่มเพาะเชื้อเนื้อเยื่อเป็นเวลาสามวัน 12. หลังจาก 3 วันให้ถ่ายเซลล์ไปยัง 15 หลอดทรงกรวยขนาด 6 มล. และเม็ดที่ 200  *xg* เป็นเวลา 5 นาที นำสื่อบันทึกออกและใส่สื่อบันทึกที่มีส่วนผสมของ puromycin 2 มล. แทน 13. นำแผ่นเพาะเชื้อเนื้อเยื่อไปเก็บไว้ที่ตู้บ่มเพาะข้ามคืน 14. เซลล์จะถูกรักษาไว้ใน puromycin จนกว่าเซลล์ควบคุมลบที่ไม่ผ่านการถ่ายโอนจะเสียชีวิตตามที่กำหนดโดยการตรวจสอบหรือการย้อมสี Trypan Blue #### หมายเหตุ[](https://www.sigmaaldrich.com) ใช้สมการด้านล่างเพื่อคำนวณ MOI ในบ่อ ViralTiter จะอยู่ในใบรับรองการวิเคราะห์ของคุณ VolumeofVirus คือปริมาตรในหน่วยมล. ที่เติมลงในหลอดเก็บตัวอย่าง/หลอดหมุนเหวี่ยงที่มีเซลล์ที่จะถ่ายโอนให้คุณ NumberofCells เท่ากับจำนวนรวมของเซลล์ที่ทำงานได้ในหลอดหมุนเหวี่ยง/หลุม | | | | |------|---|----------------------------------------| | โมอิ | = | ปริมาณไวรัส (TU/mL) x ปริมาณไวรัส (mL) | | | | Number of Cells | 1\. O'Doherty U, Swiggard WJ, Malim MH. 2000. Human Immunodeficiency Virus Type 1 Spinoculation Enhances Infection through Virus Binding. J. Virol.. 74(21):10074-10080. [https://doi.org/10.1128/jvi.74.21.10074-10080.2000](https://doi.org/10.1128/jvi.74.21.10074-10080.2000) __Related Protocols__ - [X-tremeGENE ™ SiRNA Transfection โปรโตคอลและการแก้ไขปัญหา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/x-tremegene-sirna-transfection-reagent) - [X-tremeGENE ™ HP DNA Transfection Reagent Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/xtghp-general-protocol) - [CRISPR CAS 9 การแก้ไขจีโนมแบบ Nuclease RNA-Guided](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/crispr-cas9-genome-editing) - [การแก้ไขจีโนมในพืชด้วย CRISPR/Cas9](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/genome-editing-in-plants-with-crispr-cas9) - [โปรโตคอลการถ่ายโอน lentiviral](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/lentiviral-transduction) - [การไตเตรท FACS ของโปรโตคอลเลนติไวรัส](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/gene-expression-and-silencing/facs-titration-of-lentivirus) - [การเตรียมอนุภาคการถ่ายโอน lentiviral โดยใช้การผสมพลาสมามิดบรรจุภัณฑ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/gene-expression-and-silencing/lentiviral-packaging) - [Preparation of Cationic Liposomes & Transfection of Cells - Avanti Research™ Polar Lipids](https://www.sigmaaldrich.com/TH/en/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/preparation-of-cationic-liposomes-transfection-of-cells0) - [View More](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __หมวดหมู่สินค้าที่เกี่ยวข้อง__ - [การแสดงออกของยีนและการปิดกั้นการแสดงออกของยีน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/applications/genomics/gene-expression-and-silencing) - [X-tremeGENE ™ SiRNA Transfection โปรโตคอลและการแก้ไขปัญหา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/x-tremegene-sirna-transfection-reagent) - [X-tremeGENE ™ HP DNA Transfection Reagent Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/xtghp-general-protocol) - [CRISPR CAS 9 การแก้ไขจีโนมแบบ Nuclease RNA-Guided](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/crispr-cas9-genome-editing) - [การแก้ไขจีโนมในพืชด้วย CRISPR/Cas9](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/genome-editing-in-plants-with-crispr-cas9) - [โปรโตคอลการถ่ายโอน lentiviral](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/advanced-gene-editing/lentiviral-transduction) - [การไตเตรท FACS ของโปรโตคอลเลนติไวรัส](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/gene-expression-and-silencing/facs-titration-of-lentivirus) - [การเตรียมอนุภาคการถ่ายโอน lentiviral โดยใช้การผสมพลาสมามิดบรรจุภัณฑ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/gene-expression-and-silencing/lentiviral-packaging) บนสุด __เข้าสู่ระบบเพื่อดำเนินการต่อ__ เพื่ออ่านต่อ โปรดเข้าสู่ระบบหรือสร้างบัญชีใหม่ เข้าสู่ระบบ__ยังไม่มีบัญชีใช่หรือไม่?__ลงทะเบียน หน้านี้ได้ถูกแปลโดยเครื่องแปลภาษาเพื่อความสะดวกของลูกค้าของเรา เราได้พยายามเพื่อให้มั่นใจว่าเครื่องแปลภาษาแปลได้ถูกต้องแม่นยำ อย่างไรก็ตาม เครื่องแปลภาษานั้นไม่สมบูรณ์แบบ หากคุณไม่พอใจกับเนื้อหาที่แปลโดยเครื่องแปลภาษา โปรดอ้างอิงจากฉบับภาษาอังกฤษ การสนับสนุน[ฝ่ายบริการลูกค้า](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/support/customer-support)[ติดต่อเรา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/offices)[คำถามที่พบบ่อย](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[เอกสารข้อมูลความปลอดภัย (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/documents-search?tab=sds)[ใบรับรอง (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/documents-search?tab=coa)[คุณภาพและการกำกับดูแล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/quality-and-regulatory-management)[เครื่องคิดเลขและแอป](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/support/calculators-and-apps)[การสัมมนาผ่านเว็บ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/webinars) คำสั่งซื้อ[ค้นหาคำสั่งซื้อ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/order-lookup)[คำสั่งซื้อด่วน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/quick-order)[ผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/services/custom-products)[โซลูชันอีคอมเมิร์ซ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) บริษัท[เกี่ยวกับเรา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/about-us)[ความรับผิดชอบ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/ssbi)[กิจกรรม](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/events)[ข่าวประชาสัมพันธ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/press)[โครงการ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/partnership-programs)[อาชีพ](https://careers.merckgroup.com/global/en)[สำนักงาน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/offices) โซเชียลมีเดีย [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __การวิจัย การพัฒนา การผลิต__ เราเป็นผู้จัดจำหน่ายชั้นนำของอุตสาหกรรมวิทยาศาสตร์ชีวภาพระดับโลกด้วยโซลูชันและบริการสำหรับการวิจัย การพัฒนาและผลิตเทคโนโลยีชีวภาพ รวมถึงการพัฒนาและผลิตการบำบัดด้วยยาทางเภสัชกรรม [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th) [โซลูชัน Sigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/sigma-aldrich)[โซลูชัน BioReliance®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/bioreliance)[โซลูชัน Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/millipore)[โซลูชัน SAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/safc)[โซลูชัน Milli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/milliq)[โซลูชัน Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA เมืองดาร์มชตัท ประเทศเยอรมนี และ/หรือบริษัทในเครือ สงวนลิขสิทธิ์รวมถึงการทำเหมืองข้อมูลและข้อความสำหรับการฝึกอบรม AI และเทคโนโลยีที่คล้ายกัน ห้ามทำซ้ำสื่อใดๆ จากเว็บไซต์โดยไม่ได้รับอนุญาต [เงื่อนไขการใช้งานเว็บไซต์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/site-use-terms)|[นโยบายความเป็นส่วนตัว](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/privacy-statement)|[ข้อกำหนดและเงื่อนไขทั่วไปของการขาย](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/terms-and-conditions)|[การยินยอมด้านลิขสิทธิ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/copyright-consent)|[แผนผังเว็บไซต์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/site-map) An unknown error has occured.