[ข้ามไปยังเนื้อหา](https://www.sigmaaldrich.com#main-content)
[](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th)
สินค้า
รถเข็น0
THTH
สินค้า
ผลิตภัณฑ์การใช้งานบริการทรัพยากรการสนับสนุน
[เข้าสู่ระบบ / ลงทะเบียน](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in)
[ค้นหาคำสั่งซื้อ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/order-lookup)
[สั่งซื้อด่วน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/quick-order)
รถเข็น0
[หน้าแรก](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th)[การประยุกต์ใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/applications/genomics/pcr)มาตรฐาน PCR Protocol
# มาตรฐาน PCR Protocol
## วิธีการทำ PCR
การตั้งค่าปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสมาตรฐาน (PCR) ประกอบด้วย ขั้นตอนต่างๆดังนี้:
1. เพิ่มต้องใช้ น้ำยา มาสเตอร์มิกซ์ของ dreagent sor และเทมเพลตลงในหลอด PCR
2. ผสมและปั่นเหวี่ยง
\* เพิ่มน้ำมันแร่เพื่อป้องกันการระเหยในไซเลอร์ความร้อนโดยไม่ต้องมีฝาอุ่น
3. ขยายต่อเทอร์โมไซเซอร์และพารามิเตอร์ไพรเมอร์
4. ประเมินดีเอ็นเอขยายโดย agarose เจล electrophoresis ตามด้วย ethidium bromide staining
ขั้นตอนเหล่านี้จะแสดงอยู่ด้านล่างโดยละเอียดพร้อมกับวัสดุและเคล็ดลับการเลือกน้ำยา นี่คือโปรโตคอล PCR พื้นฐานที่ใช้โพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq
## ขั้นตอน PCR และองค์ประกอบ PCR ที่จำเป็น
การแก้ไขปัญหาปฏิกิริยา PCR มีหลายปัจจัย ดูภาพเคลื่อนไหวนี้เพื่อเรียนรู้ว่าการเลือกองค์ประกอบที่เหมาะสมและสภาพการขี่จักรยานที่เหมาะกับความต้องการของคุณจะช่วยให้ได้ผลลัพธ์ที่ดีที่สุดได้อย่างไร
* * *
ค้นหาโพลิเมอร์หรือเทคนิค PCR ขั้นสูงอื่นๆเพิ่มเติมได้ใน [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/pcr-technologies-protocols-introduction)ส่วนโปรโตคอลในคู่มือ PCR Technologies ของเรา
เรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับ PCR มาตรฐานรวมถึงสิ่งที่อยู่ใน [หน้าข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับ PCR ของเรา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/pcr/routine-amplification)
## [](https://www.sigmaaldrich.com)น้ำยา: PCR จำเป็นต้องใช้อะไรบ้าง
น้ำยาที่ใช้ใน PCRผลิตภัณฑ์ที่แนะนำ
พอลิเมอเรสดีเอ็นเอของ Taqเลือก *Taq* DNA polymerase ตามความต้องการของผู้ใช้ (ดู [ตารางตา qpolymerase แยกต่างหาก](https://www.sigmaaldrich.com#taqdnapolymerase) ด้านล่าง)
น้ำเกรด PCRPCR Reagent Water
ไพรเมอร์เจือจางเพื่อความเข้มข้นในการทำงาน
10 หุ้นที่ใช้งานได้เพียงพอ µM รับการวิเคราะห์ส่วนใหญ่
โอลิโก (Oligos)[Custom oligos](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/molecular-biology-and-functional-genomics/oligos-and-qpcr-probes/custom-predesigned-dna-oligos-and-qpcr-probes)
ดีเอ็นเอที่จะถูกขยายจัดทำโดยนักวิจัย
ปิเปตต์เฉพาะ
วงจรความร้อนมีขนาดบล็อกที่หลากหลายหรือหลายรูปแบบ
ปิเปตต์กรองปลอดเชื้อ
หลอดเก็บตัวอย่างขนาดเล็กแบบฝาเกลียวขนาด 1.5 มล. ปลอดเชื้อ หลอด Corning ® microcentrifuge พร้อมฝาเกลียว
หลอด PCR หรือแผ่นเลือกให้เหมาะกับนักปั่นจักรยาน:
หลอด PCR ขนาดบาง 200 มม. µL รับแต่ละหลอด
หลอด µL รับแถบทดสอบขนาด 200 มม
แผ่น ปิดผนึกแบบหลายหลุม
การผสม dntpDeoxynucleotide MI xcontaining 10 มม. dATP, dCTP, DGTP และ dTTP
\* readymixes มีอยู่แล้ว dNTP
*Taq* DNA Polymerase เป็นเอนไซม์ที่มีความร้อนได้มาจากแบคทีเรีย Thermophilic Thermamus aquaticus ฉัน มักใช้ในการขยายส่วนดีเอ็นเอใน PCR เอนไซม์อยู่ในรูปแบบ recombinant แสดงใน *E. coli* สามารถทนต่อความร้อนซ้ำได้ถึง 95°C (ตามที่ต้องการโดยเทคนิค PCR) โดยไม่สูญเสียกิจกรรมอย่างมีนัยสำคัญ เอนไซม์มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 94 KDA โดย SDS-page โดยไม่มีกิจกรรม endonuclease หรือ exonuclease ที่ตรวจพบได้ มันมีกิจกรรม DNA polymerase 5→3 ' และ กิจกรรม exonuclease 5→3 ' แต่ละล็อตของ *Taq* DNA Polymerase ได้รับการทดสอบสำหรับการขยาย PCR และการจัดลำดับสองชั้น เอนไซม์นี้มีให้ที่ 5 หน่วย/µL และมาพร้อมกับบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 10 เท่าที่ดีที่สุด
[](https://www.sigmaaldrich.com)
### มาตรฐาน *Taq* DNA Polymerase
ใช้ตารางด้านล่างเพื่อเลือกส่วนผสมที่เหมาะสมของ พอลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq สำหรับสภาวะการตอบสนองของคุณ เลือกจากสูตรย้อมสีใสหรือสีแดงที่มีและไม่มีแมกนีเซียมคลอไรด์ (MgCl2) หรือ readymix ที่เตรียมไว้ล่วงหน้าหรือผสมหลักกับบัฟเฟอร์และ dNTPs
มี MgCl2 แยก MgCl2Readymix
ล้างสูตรโดยไม่ต้องย้อมด้วยสีแดงสำหรับโหลดโดยตรงบนเจลล้างสูตรโดยไม่ต้องย้อมด้วยสีแดงสำหรับโหลดโดยตรงบนเจลล้างสูตรโดยไม่ต้องย้อม
ดีเอ็นเอ Polymerase จาก *Thermus aquaticus* (D1806)Red*Taq*® DNA Polymerase
(D4309)Taq DNA Polymerase จาก *Thermus aquaticus*โดยไม่มี MgCl2 (D4545) มิกซ์ปฏิกิริยา PCR RERed Taq ® ReadyMix ™
(R2523)ReadyMix ™ *Taq* PCR ปฏิกิริยาผสม
(P4600)
__Unit Definition:__ หนึ่งหน่วยประกอบด้วยไตรฟอสเฟต deoxyribonucleoside รวม 10 นาโนโมลเป็นดีเอ็นเอที่ตกตะกอนของกรดใน 30 นาทีที่ 74°C
## [](https://www.sigmaaldrich.com)ขั้นตอน: ขั้นตอนของ PCR
สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับความเข้มข้นของ พอลิเมอเรสดีเอ็นเอของ Taq, ดีเอ็นเอเทมเพลต, ไพรเมอร์และ MgCl2 จะขึ้นอยู่กับระบบที่ใช้ อาจจำเป็นต้องกำหนดสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับแต่ละองค์ประกอบ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ โพลิเมอร์ดีเอ็นเอของ Taq พารามิเตอร์การขี่จักรยานและ ความเข้มข้นของ MgCl 2 ขอแนะนำให้ใช้เอนไซม์และ MgCl2 เพื่อกำหนดประสิทธิภาพที่ดีที่สุด
1. __เติมน้ำยาลงในหลอดที่มีขนาดเหมาะสม__ ตามลำดับที่ระบุไว้ในตาราง (เลือกตารางที่เหมาะสมสำหรับการตั้งค่าปฏิกิริยา: น้ำยามาตรฐานหรือน้ำยาผสมใหม่) สำหรับปฏิกิริยาจำนวนมาก ควรตั้งค่า mastermix ที่ไม่มีเทมเพลตและแบ่งเป็นหลอดปฏิกิริยา ในตอนท้ายควรเพิ่มเทมเพลตลงในหลอดที่เหมาะสม
### ปฏิกิริยา PCR มาตรฐาน
จำนวนคอมโพเนนต์Final Concentration
µLน้ำ
5 µLบัฟเฟอร์ PCR 10 เท่า ([P219](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/P2192) 2 หรือ [P2317](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/P2317))\*1 เท่า
1 µLDeoxynucleotide Mix200 µM
µLไพรเมอร์ไปข้างหน้า
(โดยทั่วไปจะมีความยาว 15-30 ฐาน)0.1 µM 0.5 μ m
X µL
สีรองพื้นแบบย้อนกลับ
(โดยทั่วไปจะมีความยาว 15-30 ฐาน)
0.1 µM 0.5 μ m
0.5 µL
*Taq* DNA Polymerase*
0.05 units/µL
y µL
ดีเอ็นเอเทมเพลต (ปกติ 10 นาโนกรัม)
200 pg/µL
Z µL
25 มม. MgCl2 (ใช้เฉพาะกับบัฟเฟอร์ [P2317)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/P2317)
0.1 - 0.5 มม
__50 µL__
__ปริมาณปฏิกิริยารวม__
\* ซื้อบัฟเฟอร์และ *Ta* qpolymerase ด้วยกัน: D1806, D430 9 หรือ D4545
### ปฏิกิริยา PCR ของ Readymix
จำนวนคอมโพเนนต์Final Concentration
25 µL
Readymix ([R252](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/R2523) 3 หรือ [P4600)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/P4600)
µL
ไพรเมอร์ไปข้างหน้า
(โดยทั่วไปจะมีความยาว 15-30 ฐาน)
0.1 µM 0.5 μ m
X µL
สีรองพื้นแบบย้อนกลับ
(โดยทั่วไปจะมีความยาว 15-30 ฐาน)
0.1 µM 0.5 μ m
y µL
ดีเอ็นเอเทมเพลต (ปกติ 10 นาโนกรัม)
200 pg/µL
Z µL
น้ำ
__50 µL__
__ปริมาณปฏิกิริยารวม__
2\. __ผสมเบาๆด้วยน้ำวนและปั่นเหวี่ยง__ เป็นเวลาสั้นๆเพื่อเก็บส่วนประกอบทั้งหมดไว้ที่ด้านล่างของหลอด
หมายเหตุ: เติมน้ำมันแร่ 50 มล. ที่ด้านบนของท่อแต่ละหลอดเพื่อป้องกันการระเหยหากใช้ไซโคลนร้อนที่ไม่มีฝาปิด µL ความร้อน
3\. __ขยายเสียง__ พารามิเตอร์การขยายจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับไพรเมอร์และวงจรระบายความร้อนที่ใช้ อาจจำเป็นต้องปรับระบบให้เหมาะสมสำหรับไพรเมอร์เทมเพลตและวงจรระบายความร้อนแต่ละตัว
### พารามิเตอร์การขี่จักรยานทั่วไป
แนะนำให้ใช้การขยายสัญญาณ 25-30 รอบ
| | | |
|--------------------------|------------|----------|
| PCR ขั้นตอน | อุณหภูมิ°C | ระยะเวลา |
| Denature template | 94 °C | 1 min |
| ไพรเมอร์ที่ผ่านการอบอ่อน | 55 °C | 2 min |
| ต่อ | 72 °C | 3 min |
4\. __ดีเอ็นเอที่ขยายสามารถประเมินได้โดย [agarose เจล electrophoresis](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/nucleic-acid-gel-electrophoresis/nucleic-acid-electrophoresis) และการย้อมสี ethidium bromide ตามมา__
การซ้อนทับของน้ำมันแร่อาจถูกลบออกโดยการสกัดคลอโรฟอร์มเดี่ยว (เวลา 1 น 1.) ซึ่งเป็นการกู้คืนเฟสน้ำ
### [](https://www.sigmaaldrich.com)ตัวทำปฏิกิริยาสำหรับอิเล็กโทรโฟเรซิสของกรดนิวคลีอิก
- Agarose (เจลสำเร็จรูป, ผงฯลฯ)
- บัฟเฟอร์ เช่น MOPS-EDTA โซเดียมอะซิเตต, ทริส - อะซิเตต - EDTA (TAE) หรือทริส - โบราต - EDTA (TBE)
- โซลูชันการโหลดเจลและบัฟเฟอร์การโหลดตัวอย่างสำหรับ RNA
- รอยเปื้อนอิเล็กโทรโฟเรซิสหรือดีมาก เป็น ethidium bromide
1\.
Cheng S, Fockler C, Barnes WM, Higuchi R. 1994. Effective amplification of long targets from cloned inserts and human genomic DNA.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 91(12):5695-5699. [https://doi.org/10.1073/pnas.91.12.5695](https://doi.org/10.1073/pnas.91.12.5695)
2\.
Chou Q. 1992. Minimizing deletion mutagenesis artifact duringTaqDNA polymerase PCR byE.coliSSB. Nucl Acids Res. 20(16):4371-4371. [https://doi.org/10.1093/nar/20.16.4371](https://doi.org/10.1093/nar/20.16.4371)
3\.
Innis MA. 1995. PCR Strategies. New York: Academic Press.
4\.
Innis MA. 1990. PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications. New York: Academic Press.
5\.
Innis MA, Myambo KB, Gelfand DH, Brow MA. 1988. DNA sequencing with Thermus aquaticus DNA polymerase and direct sequencing of polymerase chain reaction-amplified DNA.. Proceedings of the National Academy of Sciences. 85(24):9436-9440. [https://doi.org/10.1073/pnas.85.24.9436](https://doi.org/10.1073/pnas.85.24.9436)
6\.
Newton CR. 1995. PCR: Essential Data. 1. Wiley-Blackwell.
7\.
Olive DM, Simsek M, Al-Mufti S. 1989. Polymerase chain reaction assay for detection of human cytomegalovirus.. 27(6):1238-1242. [https://doi.org/10.1128/jcm.27.6.1238-1242.1989](https://doi.org/10.1128/jcm.27.6.1238-1242.1989)
8\.
Pääbo S, Gifford JA, Wilson AC. 1988. Mitochondrial DNA sequences from a 7000-year old brain. Nucl Acids Res. 16(20):9775-9787. [https://doi.org/10.1093/nar/16.20.9775](https://doi.org/10.1093/nar/16.20.9775)
9\.
Erlich HA. 1989. PCR technology : principles and applications for DNA amplification. New York: Stockton Press.
10\.
Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
11\.
Sarkar G, Kapelner S, Sommer SS. 1990. Formamide can dramatically improve the specificity of PCR. Nucl Acids Res. 18(24):7465-7465. [https://doi.org/10.1093/nar/18.24.7465](https://doi.org/10.1093/nar/18.24.7465)
12\.
Winship PR. 1989. An lmproved method for directly sequencing PCR-amplified material using dimethyl sulphoxide. Nucl Acids Res. 17(3):1266-1266. [https://doi.org/10.1093/nar/17.3.1266](https://doi.org/10.1093/nar/17.3.1266)
## ใบแจ้งยอดใบอนุญาตฉลาก
### ประกาศสำหรับผู้ซื้อ: DISCLAIMER OF LICENSE
ไม่มีใบอนุญาตใดๆที่ได้รับการถ่ายทอดด้วยการซื้อผลิตภัณฑ์นี้ภายใต้สิทธิบัตรของสหรัฐอเมริกาหมายเลข 5,804,375 5,538,848 6,171,785 6,214,979 5,994,056 5,723,591 5,876,930 6,030,787 และ 6,258,569 และสิทธิบัตรที่เกี่ยวข้องนอกสหรัฐอเมริกาหรือสิทธิบัตรหรือการใช้สิทธิบัตรอื่นๆที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการย้อมสี Nuclease และ dsDNA ผูกพัน 5 สำหรับข้อมูลเพิ่มเติมโปรดติดต่อผู้อำนวยการฝ่ายลิขสิทธิ์, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404 ประเทศสหรัฐอเมริกา
## วัสดุ
ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด
Response not successful: Received status code 500
__บทความที่เกี่ยวข้อง__
- [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/wet-chemical-analysis/installation-use-of-milli-q-2series-water-purification-system)
- [ฉันเป็นคนที่มีความสามารถสูงมาก](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/deoxyribonuclease-i)
- [การสกัดดีเอ็นเอและการขยาย WGA จากตัวอย่างดิน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-of-dna-from-soil)
- [Buccal DNA Extraction และ WGA Amplification Protocol](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/dna-and-rna-purification/extraction-protocol-buccal-swab)
- [การอบอ่อน oligonucleotides พิธีสาร](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/pcr/annealing-oligos)
- [แอนติบอดี - เอนไซม์ไกล่เกลี่ยเริ่มต้นร้อน PCR โปรโตคอล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/pcr/antibody-enzyme-mediated-hot-start-pcr)
- [โปรโตคอล PCR การเริ่มต้นอย่างร้อน dnTP](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/pcr/dntp-mediated-hot-start-pcr)
- [Kapa Biosystems Taq DNA Polymerase และ PCR Kits](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/genomics/pcr/kapa-pcr-kits)
- [View More](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search)
__หมวดหมู่สินค้าที่เกี่ยวข้อง__
- [ฟิล์ม ซีล, ฟอยล์ และเทป](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/labware/sealing-films-foils-and-tapes)
- [Fame Standard เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของระบบ GC](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/fame-standard-for)
- [การวิเคราะห์สิ่งแวดล้อมที่รวดเร็วและเชื่อถือได้ของอัลดีไฮด์และมลพิษทางอากาศ Ketone](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/fast-and-reliable)
- [ไนโอไนโตนอยด์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/neonicotinoids-bee-pesticides)
- [NMR เชิงปริมาณสำหรับการกำหนดเนื้อหาของมาตรฐานอ้างอิงสำหรับการควบคุมคุณภาพของผลิตภัณฑ์สมุนไพร](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/calibration-qualification-and-validation/quantitative-nmr-used)
- [การวิเคราะห์ GC ของ Fame Mix 37 ส่วนประกอบบน SP ™ -2560](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/c-analysis-of-a-37-component-fame-mix)
- [การกำหนดไตรกลีเซอไรด์และแว็กซ์ในผลิตภัณฑ์อาหารโดยใช้ Cool on-Column Injection และ MET-Biodesel Capillary Column](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/determination-of-triglycerides)
- [EN 14105 GC วิเคราะห์สิ่งเจือปนของกลีเซอรีนในไบโอดีเซลบน Met-Biodesel](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/protocol/analytical-chemistry/gas-chromatography/en-14105-gc-analysis-of-glycerin-impurity-in-biodiesel)
- [View More](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search)
บนสุด
__เข้าสู่ระบบเพื่อดำเนินการต่อ__
เพื่ออ่านต่อ โปรดเข้าสู่ระบบหรือสร้างบัญชีใหม่
เข้าสู่ระบบ__ยังไม่มีบัญชีใช่หรือไม่?__ลงทะเบียน
หน้านี้ได้ถูกแปลโดยเครื่องแปลภาษาเพื่อความสะดวกของลูกค้าของเรา เราได้พยายามเพื่อให้มั่นใจว่าเครื่องแปลภาษาแปลได้ถูกต้องแม่นยำ อย่างไรก็ตาม เครื่องแปลภาษานั้นไม่สมบูรณ์แบบ หากคุณไม่พอใจกับเนื้อหาที่แปลโดยเครื่องแปลภาษา โปรดอ้างอิงจากฉบับภาษาอังกฤษ
An unknown error has occured.