[ข้ามไปยังเนื้อหา](https://www.sigmaaldrich.com#main-content) [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th) สินค้า รถเข็น0 THTH สินค้า ผลิตภัณฑ์การใช้งานบริการทรัพยากรการสนับสนุน [เข้าสู่ระบบ / ลงทะเบียน](https://www.sigmaaldrich.com/oidc-sign-in) [ค้นหาคำสั่งซื้อ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/order-lookup) [สั่งซื้อด่วน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/quick-order) รถเข็น0 [หน้าแรก](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th)[การโคลนและการแสดงออก](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/applications/genomics/cloning-and-expression)การคัดกรองและโปรโตคอลสีน้ำเงิน - ขาวสำหรับการเลือกอาณานิคม # การคัดกรองและโปรโตคอลสีน้ำเงิน - ขาวสำหรับการเลือกอาณานิคม ## การระบุแบคทีเรีย Recombinant การคัดกรองสีฟ้า - ขาวเป็นเทคนิคที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพในการระบุแบคทีเรียที่รีคอมบิแนนท์ มันขึ้นอยู่กับกิจกรรมของ β -galactosidase เอนไซม์ที่เกิดขึ้นใน *E. coli*ซึ่งแยกแลคโตสเป็นกลูโคสและกาแลคโตส ## ทำลายยีน Lacz การปรากฏตัวของแลคโตสในสภาพแวดล้อมโดยรอบทำให้เกิดแลคซีโอเปอร์ออนใน *E. coli* กิจกรรมของโอเปอร์อนส่งผลให้เกิดการผลิตเอนไซม์ β -galactoisdase ที่เผาผลาญแลคโตส เวกเตอร์ plasmid ส่วนใหญ่มีส่วนสั้นๆของยีน lacz ที่มีข้อมูลการเข้ารหัสสำหรับกรดอะมิโน 146 ตัวแรกของ β -galactosisdase โฮสต์ *E. col* istrains ที่ใช้เป็นเซลล์ที่มีความสามารถที่มีการกลายพันธุ์การลบ lacZΔM15 เมื่อ α เวกเตอร์ plasmid ถูกนำขึ้นโดยเซลล์ดังกล่าวเนื่องจากกระบวนการเสริม β เอนไซม์ทำงาน -galatosidase จะถูกผลิตขึ้น เวกเตอร์ plasmid ที่ใช้ในการโคลนถูกจัดการในลักษณะที่กระบวนการเสริม α นี้ทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายสำหรับการรวมตัวกันใหม่ มีไซต์โคลนนิ่งหลายไซต์ (MCS) อยู่ภายในลำดับ LACZ ในเวกเตอร์ plasmid ลำดับนี้สามารถทำได้โดยการจำกัดเอนไซม์เพื่อแทรกดีเอ็นเอจากต่างประเทศ เมื่อเวกเตอร์ plasmid ที่มีดีเอ็นเอจากต่างประเทศถูกนำขึ้นโดยโฮสต์ *E. coli*การเสริม α ไม่เกิดขึ้นดังนั้นเอนไซม์ β -galactosidase ที่ใช้งานไม่ได้ หากไม่ได้ใส่ดีเอ็นเอจากต่างประเทศลงในเวกเตอร์หรือหากใส่ไว้ในตำแหน่งอื่นที่ไม่ใช่ MCS ยีน lacZ ในเวกเตอร์ plasmid จะช่วยเติมเต็มการกลายพันธุ์ของการลบ lacz ในโฮสต์ *E. coll* ซึ่งเป็นการผลิตเอนไซม์ที่ใช้งานได้ ## การคัดกรองสีฟ้าขาวทำงานอย่างไร ? สำหรับการคัดกรองโคลนที่มีดีเอ็นเอ recombinant สารตั้งต้นโครโมจีนิกที่เรียกว่า X-gal จะถูกเพิ่มลงในแผ่นวุ้น หาก β -galactosidase ผลิต X-gal จะถูกไฮโดรไลซ์เพื่อสร้าง 5 โบรโม 4 chloro-indoxyl ซึ่งละลายโดยธรรมชาติเพื่อผลิตเม็ดสีฟ้าที่ไม่ละลายน้ำที่เรียกว่า 5,5 '-dibromo-4,4 '-dichloro-indigo โคโลนีที่เกิดจากเซลล์ที่ไม่ใช่รีคอมบิแนนท์จึงปรากฏเป็นสีฟ้าในขณะที่ตัวรีคอมบิแนนท์ปรากฏเป็นสีขาว สามารถเลือกและเพาะเลี้ยงอาณานิคม Recombinant ที่ต้องการได้อย่างง่ายดาย Isopropyl MD-D-4-thiogalactopyranoside 1 (IPTG) ใช้ร่วมกับ X-gal β รับการคัดกรองสีฟ้า - ขาว IPTG เป็นอะนาล็อกที่ไม่สามารถเผาผลาญได้ของกาแลคโตสที่ทำให้เกิดการแสดงออกของยีนแลคซี ควรสังเกตว่า IPTG ไม่ใช่สารตั้งต้นสำหรับ β -galactosidase แต่เป็นเพียงตัวกระตุ้นเท่านั้น สำหรับการคัดกรองด้วยสายตาจำเป็นต้องใช้สารตั้งต้นที่มีโครเมียมเช่น X-gal  __รูปที่ 1__การแสดงแผนผังของเวกเตอร์พลาสมิดทั่วไปที่สามารถใช้ในการคัดกรองสีฟ้า - ขาว  __รูปที่ 2__การแสดงแผนผังของขั้นตอนการคัดกรองสีฟ้า - ขาวทั่วไป ## ผลิตภัณฑ์คัดกรองสีฟ้า - ขาว (วัสดุ) หมายเลขสินค้าชื่อการละลายการดำเนินการการใช้งานSpecial features [B6650 ค่ะ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B6650)[X-GlcA](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B6650)DMFสารตั้งต้น ß -galactosidase และ ß -glucuronidaseการตรวจหายีนของแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening [16658](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16658)[เอ็กซ์ - กัลนาค](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16658)DMF, DMSOซับสเตรต ß รับ N-Acetyl-the-galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant และ *Candida albicans* - blue-white screening [S7313](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/S7313) [เกลือโซเดียม S-Gal ®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/S7313)น้ำซับสเตรต ß -galactosidaseการตรวจหายีนของแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - ฆ่าเชื้อได้ - ความเปรียบต่างที่เพิ่มขึ้นเพื่อการนับอาณานิคมอัตโนมัติ [S9811](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/S9811)[S-Gal®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/S9811)น้ำซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - ฆ่าเชื้อได้ - ความเปรียบต่างที่เพิ่มขึ้นเพื่อการนับอาณานิคมอัตโนมัติ [C4478.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/C4478)[S-Gal®/lb Agar Blend](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/C4478)น้ำซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - ฆ่าเชื้อได้ - ความเปรียบต่างที่เพิ่มขึ้นสำหรับการนับอาณานิคมอัตโนมัติได้เพิ่ม IPTG [B2904.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B2904)[บลูกอล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B2904)DMFซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - no sterilization required [B3928](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B3928)[Blue-White Select ™น้ำยาคัดกรอง](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B3928)Ready-to-use solutionซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening [16669](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16669)[สีม่วงแดง - แกล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B8931)DMF, DMSOซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - red-white screening [B8931 ค่ะ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B8931)[สีม่วงแดง - แกล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16669)เมทานอลซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - red-white screening [B4252](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/b4252)[5 โบรโม 4 คลอโร 3 อินโดล ß -D-galactopyranoside](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/b4252)DMF, DMSOซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - สามารถใช้สำหรับ immunocytochemistry - no sterilization required [B9146 ค่ะ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B9146)[5 โบรโม 4 คลอโร 3 อินโดล ß -D-galactopyranoside](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B9146)DMF, DMSOซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - no sterilization required [B6024](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B6024)[5 โบรโม 4 คลอ โร3 indolyl ß -D-galactopyranoside (แท็บเล็ต)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B6024)DMF, DMSOซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - no sterilization required [16665](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16665)[5 โบรโม 4 คลอโร 3 อินโดล ß -D-galactopyranoside](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16665)DMF, DMSOซับสเตรต ß -galactosidaseการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - no sterilization required [I1284 ค่ะ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/I1284)[สารละลาย Isopropyl ß -D-thiogalactopyranoside](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/I1284)Ready-to-use solutionกระตุ้นให้เกิดโปรโมเตอร์ Lacการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening - สามารถเพิ่มลงในสื่อวัฒนธรรมได้ [ไอ 6758](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/i6758)[ไอโซโพรพิล ß -D-2 1 ไทโอกาลาคโตไพราโนไซด์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/i6758)น้ำกระตุ้นให้เกิดโปรโมเตอร์ Lacการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening [I5502.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/i5502)[ไอโซโพรพิล ß -D-2 1 ไทโอกาลาคโตไพราโนไซด์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/i5502)น้ำกระตุ้นให้เกิดโปรโมเตอร์ Lacการคัดกรองแบคทีเรีย Recombinant - blue-white screening ## โปรโตคอลสำหรับการคัดกรองสีฟ้า - ขาว โครงการศึกษาที่สมบูรณ์ของการคัดกรองสีฟ้าขาวประกอบด้วย 3 ขั้นตอนที่สำคัญ: - ligation: ligation ของดีเอ็นเอต่างประเทศเป็น MCS ของเวกเตอร์ plasmid - การแปลง: การแนะนำเวกเตอร์ plasmid กับการแทรกดีเอ็นเอจากต่างประเทศเข้าไปใน *E. coli ที่มีความสามารถ* - การคัดกรอง: การคัดกรองสีฟ้า - ขาวเพื่อระบุอาณานิคมแบคทีเรียที่เกิดขึ้นใหม่ ### การควบ เรามีเวกเตอร์นิพจน์ที่พร้อมใช้ต่อไปนี้ซึ่งสามารถใช้สำหรับระบบนิพจน์ที่เสถียรและชั่วคราวได้ โครงสร้างธงฟิวชั่นเหล่านี้มีต้นกำเนิดของการจำลองแบบสำหรับการแพร่กระจายในเซลล์แบคทีเรียและสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม | | | | |------------------------------------------------------------------|-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------|-------------------------------| | หมายเลขสินค้า | ชื่อ | ความเข้ากันได้ | | [E6783.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E6783) | [PFLAG-CMV ™ -3 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E6783) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E7658.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E7658) | [p3XFLAG-CMV ™ -10 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E7658) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E7283.](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E7283) | [p3XFLAG-Myc-CMV ™ -26 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E7283) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E9033](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E9033) | [PFLAG-Myc-CMV ™ -22 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E9033) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E6908](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E6908) | [PFLAG-CMV ™ -5.1 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E6908) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E9408](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E9408) | [p3xFLAG-Myc-CMV ™ -25 Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E9408) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [FLMAS](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/FLMAS) | [ชุดธงอะมิโนเทอร์มินัล แมมmalian Stable Expression Kit](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/FLMAS) | แบคทีเรียเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนม | | [E8158](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E8158) | [PFLAG-ATS ™ Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E8158) | แบคทีเรีย | | [E8408](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E8408) | [PFLAG-CTC ™ Expression Vector](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/E8408) | แบคทีเรีย | | [D3404](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/D3404) | [pUC19 plasmid DNA จาก *E. coli* RRI](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/D3404) | แบคทีเรีย | | [D4154](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/D4154) | [pUC18 plasmid DNA จาก *E. coli* RRI](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/D4154) | แบคทีเรีย | __Materials required__ | | | |----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------|---------------------------------------------------------------------------------------------| | รีเอเจนต์ | อุปกรณ์ | | บัฟเฟอร์เอ็นเอ T4 (KEM0049B) | หลอดปฏิกิริยา PCR | | Plasmid vector | Thermo Cycler (อุปกรณ์เสริม) | | แทรก (ดีเอ็นเอจากต่างประเทศ) | คอลัมน์ PCR ทำความสะอาด ([NA1020)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/NA1020) | | เอ็นเอ็นเอ T4 ([KEM0020,](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/kem0020) [KEM0019)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/kem0019) | | | น้ำปลอดเชื้อปราศจากนิวไคลด์ | | __ต่อไปนี้เป็นการตั้งค่าปฏิกิริยาสำหรับ ligation__ | | | | |-------------------|-------------|---------------------| | คอมโพเนนต์ | Volume (µL) | Final concentration | | บัฟเฟอร์เอ็นเอ T4 | 2 | 1 เท่า | | เวกเตอร์ | x | 1-10 นาโนกรัม/µL | | Insert | x | 1-10 นาโนกรัม/µL | | เอ็นเอ็นเอ T4 | 1 | 6 µL/ตารางเมตร | | Sterile water | x | ไม่มีข้อมูล | | ปริมาณรวม | 20 | | - เติมส่วนประกอบทั้งหมดข้างต้นลงในหลอดปฏิกิริยาที่สะอาด - บ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25°C (สามารถทำได้ในเทอร์โมไซเซอร์) - µL ความสะอาดดีเอ็นเอโดยใช้คอลัมน์การล้าง PCR และ Elute ในประมาณ 50 μ m - แปลงผลิตภัณฑ์ ligation 0.1-10 ng เป็นเซลล์เคมีหรือเซลล์ไฟฟ้าที่เข้ากันได้กับเวกเตอร์ ### การเปลี่ยนแปลง พลาสมิดคุณภาพสูงเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับขั้นตอนการเปลี่ยนแปลง ชุดต่อไปนี้แยกและทำให้พลาสติกคุณภาพสูงบริสุทธิ์เหมาะสำหรับการเปลี่ยนแปลง | | | |-------------------------------------------------------------------|--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------| | หมายเลขสินค้า | ชื่อ | | [PLN10](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN10) | [GenElute ™ Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 10 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN10) | | [PLN70](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN70) | [GenElute ™ Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 70 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN70) | | [PLN350](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN350) | [GenElute ™ Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 350 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLN350) | | [PFM10](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM10) | [GenElute ™ 5 นาที Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 10 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM10) | | [PFM50](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM50) | [GenElute ™ 5 นาที Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 50 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM50) | | [PFM250](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM250) | [GenElute ™ 5 นาที Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 250 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PFM250) | | [PLX15](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLX15) | [GenElute ™ plasmid Maxiprep Kit (พรีพส์ 15 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLX15) | | [PLD35](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLD35) | [GenElute ™ Plasmid Miniprep Kit (พรีพส์ 35 ตัว)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/PLD35) | โปรโตคอลรายละเอียดสำหรับการเปลี่ยนแปลงโดยใช้เซลล์เคมีหรือเซลล์ไฟฟ้าสามารถ foun [](https://www.sigmaaldrich.com)[dhere](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/competent-cells) ### การคัดกรอง เรามีพื้นผิวโครโมจีนิกหลากหลายชนิดที่ช่วยในการคัดกรองแบคทีเรียรีคอมบิแนนท์ ผลิตภัณฑ์บางชนิดอาจใช้เพื่อกระจายบนแผ่น agar LB (การคัดกรองตามขั้นตอนที่ 1) ในขณะที่ผลิตภัณฑ์อื่นๆจะรวมอยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ (การคัดกรองตามขั้นตอนที่ 2) ผลิตภัณฑ์จะถูกใช้พร้อมกับ IPTG เมื่อจำเป็น โปรโตคอลสำหรับทั้งสองขั้นตอนมีดังต่อไปนี้ __โปรโตคอลการคัดกรอง 1 (ใช้ได้กับหมายเลขผลิตภัณฑ์__ B6650, [16658](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16658) B2904, B3928,  [16669](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sial/16669) [B8931)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/product/sigma/B8931) - กระจายสารละลายสต็อก µL รับสารตั้งต้นที่มีโครเมียม 40 ไมโครลิตรหรือปริมาณที่เหมาะสมและสารละลาย IPTG 10 ไมโครลิตรบนแผ่นเหล็กชุบแข็งปอนด์โดยใช้เครื่องกระจายแบบปลอดเชื้อ (  ไม่ µL เป็นต้องเติม IPTG เมื่อใช้หมายเลขผลิตภัณฑ์ B392 8 เนื่องจากมี IPTG) อยู่แล้ว - แผ่นควรมียาปฏิชีวนะที่เหมาะสมและไม่มียาปฏิชีวนะเป็นตัวควบคุม - ปล่อยให้เพลทแห้งในช่องการไหลแบบ Laminar โดยเปิดฝาเล็กน้อย - กระจาย *อีโคลที่เปลี่ยนสภาพแล้ว 10-100 มล.* ลงบนแผ่น µL ความร้อนด้านอาหารแข็ง LB โดยใช้เครื่องหว่านเมล็ดที่ผ่านการฆ่าเชื้อ - บ่มจานที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง - อาณานิคมสีฟ้าและสีขาวปรากฏบนพื้นผิวของวุ้น เลือกเซลล์รีคอมบิแนนท์ในอาณานิคมสีขาวไปยัง Culture __โครงการวิจัยการคัดกรอง 2 (ใช้ได้กับหมายเลขผลิตภัณฑ์__ S7313, S9811, C4478) - เตรียมอาหารแข็งปอนด์โดยการชั่งน้ำหนักผงที่เหมาะสมปานกลางวุ้นและน้ำในขวดที่ปราศจากเชื้อ หรือชั่งน้ำหนัก C447 8 ในปริมาณที่เหมาะสมและเติมลงในน้ำในขวดปลอดเชื้อ - เพิ่ม 300 มก./ ลิตรของหมายเลขผลิตภัณฑ์ S731 3 และ S9811 และ 500 มก./ ลิตรของเฟอร์ริกแอมโมเนียมซิเตรต (หมายเลขผลิตภัณฑ์ F5879) ลงในสื่อก่อนที่จะ autoclaving หลีกเลี่ยงขั้นตอนนี้หาก  ใช้ C447 8 - หม้อนึ่งความดันขนาดกลางและเย็นพอที่จะสามารถจัดการกับขวดได้ - เพิ่มความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่เลือกให้กับสื่อ - เทอาหารแข็งปอนด์ประมาณ 25-30 มล. ลงในแผ่นความร้อนปลอดเชื้อและปล่อยให้ฝาปิดเปิดออกเล็กน้อย - กระจาย *อีโคลที่เปลี่ยนสภาพแล้ว 10-100 มล.* ลงบนแผ่น µL ความร้อนด้านอาหารแข็ง LB โดยใช้เครื่องหว่านเมล็ดที่ผ่านการฆ่าเชื้อ - บ่มจานที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง - อาณานิคมสีฟ้าและสีขาวปรากฏบนพื้นผิวของวุ้น เลือกเซลล์รีคอมบิแนนท์ในอาณานิคมสีขาวไปยัง Culture  __รูปที่ 3__การเลือกสีฟ้า - ขาวของแบคทีเรียรีคอมบิแนนท์โดยใช้ X-gal ## ข้อจำกัดของการคัดกรองสีฟ้า - ขาว - เทคนิคสีน้ำเงิน - ขาวเป็นเพียงขั้นตอนการคัดกรอง ; มันไม่ได้เป็นเทคนิคการเลือก - ยีนแลคซีในเวกเตอร์บางครั้งอาจไม่สามารถใช้งานได้และอาจไม่สามารถผลิต β -galactosidase ได้ อาณานิคมที่เกิดขึ้นจะไม่ถูกรวมใหม่แต่จะปรากฏเป็นสีขาว - แม้ว่าลำดับเล็กๆของดีเอ็นเอต่างประเทศอาจจะแทรกลงใน MCS และเปลี่ยนกรอบการอ่านของยีน lacZ ซึ่งส่งผลให้เกิดอาณานิคมสีขาวที่เป็นบวกเท็จ - เม็ดมีดขนาดเล็กภายในกรอบการอ่านของ lacZ อาจสร้างอาณานิคมสีฟ้าที่ไม่ชัดเจนเนื่องจาก β -galactosidase ไม่ได้ใช้งานเพียงบางส่วน ### ข้อมูลอ้างอิง 1\. Sambrook J, Fritsch E, Maniatis T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2\. Padmanabhan S, Banerjee S, Mandi N. [Screening of Bacterial Recombinants: Strategies and Preventing False Positives](http://www.intechopen.com/download/get/type/pdfs/id/21711). [https://doi.org/10.5772/22140](https://doi.org/10.5772/22140) __บทความที่เกี่ยวข้อง__ - [บทนำสู่การถ่ายโอนเซลล์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/transfection-reagents) - [โปรโตคอลการเปลี่ยนแปลงของแบคทีเรีย](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/competent-cells) - [โคลนยีนที่น่าสนใจลงในเวกเตอร์ plasmid](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/restriction-enzyme-cloning-manual-cloning) - [ระบบโปรโมเตอร์ T7](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/t7-promoter-system) - [การเลือกเซลล์ที่มีความสามารถ & E. coli Markers Guide](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/technical-documents/technical-article/protein-biology/protein-expression/competent-cell-selection-guide) - [Reverse Transfection of Plasmid DNA](https://www.sigmaaldrich.com/TH/en/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/xtg-reverse-transfect-pdna) - [3xFLAG® System Expression Vectors for Ultra-Sens](https://www.sigmaaldrich.com/TH/en/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/3x-flag) - [Genotypes, Phenotypes and Markers](https://www.sigmaaldrich.com/TH/en/technical-documents/technical-article/genomics/cloning-and-expression/definitions-and-genotypes-of-e-coli) - [View More](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/search/facet-search?focus=sitecontent&term=facet-search) __หมวดหมู่สินค้าที่เกี่ยวข้อง__ - [วัสดุตรวจจับและเอนไซม์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/protein-biology/proteins-and-enzymes/detection-substrates-and-enzymes) - [การโคลนระดับโมเลกุลและการแสดงออกของโปรตีน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/molecular-biology-and-functional-genomics/cloning-and-expression/molecular-cloning-and-protein-expression) - [สารทำความสะอาด - สารทำความสะอาดแบบแอนไอออนิก, คาทไอออนิก, ซวิทเทอร์ไอออนิก, สารลดฟอง](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/chemistry-and-biochemicals/biochemicals/detergents) - [คาร์โบไฮเดรตสำหรับการวิจัยทางชีวเคมี](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/chemistry-and-biochemicals/biochemicals/carbohydrates) - [DNA พลาสมิด | ชุดอุปกรณ์การแยกและบริสุทธิ์พลาสมิด](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/products/molecular-biology-and-functional-genomics/nucleic-acid-purification/plasmid-dna-purification) บนสุด __เข้าสู่ระบบเพื่อดำเนินการต่อ__ เพื่ออ่านต่อ โปรดเข้าสู่ระบบหรือสร้างบัญชีใหม่ เข้าสู่ระบบ__ยังไม่มีบัญชีใช่หรือไม่?__ลงทะเบียน หน้านี้ได้ถูกแปลโดยเครื่องแปลภาษาเพื่อความสะดวกของลูกค้าของเรา เราได้พยายามเพื่อให้มั่นใจว่าเครื่องแปลภาษาแปลได้ถูกต้องแม่นยำ อย่างไรก็ตาม เครื่องแปลภาษานั้นไม่สมบูรณ์แบบ หากคุณไม่พอใจกับเนื้อหาที่แปลโดยเครื่องแปลภาษา โปรดอ้างอิงจากฉบับภาษาอังกฤษ การสนับสนุน[ฝ่ายบริการลูกค้า](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/support/customer-support)[ติดต่อเรา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/offices)[คำถามที่พบบ่อย](https://maestro.my.site.com/knowledgeportal/s/)[เอกสารข้อมูลความปลอดภัย (SDS)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/documents-search?tab=sds)[ใบรับรอง (COA/COO)](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/documents-search?tab=coa)[คุณภาพและการกำกับดูแล](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/quality-and-regulatory-management)[เครื่องคิดเลขและแอป](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/support/calculators-and-apps)[การสัมมนาผ่านเว็บ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/webinars) คำสั่งซื้อ[ค้นหาคำสั่งซื้อ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/order-lookup)[คำสั่งซื้อด่วน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/quick-order)[ผลิตภัณฑ์ที่กำหนดเอง](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/services/custom-products)[โซลูชันอีคอมเมิร์ซ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/ecommerce/ecommerce-solutions) บริษัท[เกี่ยวกับเรา](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/about-us)[ความรับผิดชอบ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/ssbi)[กิจกรรม](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/events)[ข่าวประชาสัมพันธ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/press)[โครงการ](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/partnership-programs)[อาชีพ](https://careers.merckgroup.com/global/en)[สำนักงาน](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/collections/offices) โซเชียลมีเดีย [](https://www.linkedin.com/company/merck-life-science) [](https://x.com/Merck_lifesci) [](https://www.facebook.com/Merck.lifescience) [](https://www.instagram.com/mercklifescience/) [](https://www.youtube.com/@MerckLifeScience/featured) Merck __การวิจัย การพัฒนา การผลิต__ เราเป็นผู้จัดจำหน่ายชั้นนำของอุตสาหกรรมวิทยาศาสตร์ชีวภาพระดับโลกด้วยโซลูชันและบริการสำหรับการวิจัย การพัฒนาและผลิตเทคโนโลยีชีวภาพ รวมถึงการพัฒนาและผลิตการบำบัดด้วยยาทางเภสัชกรรม [](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th) [โซลูชัน Sigma-Aldrich®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/sigma-aldrich)[โซลูชัน BioReliance®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/bioreliance)[โซลูชัน Millipore®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/millipore)[โซลูชัน SAFC®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/safc)[โซลูชัน Milli-Q®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/milliq)[โซลูชัน Supelco®](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/supelco) © 2026 Merck KGaA เมืองดาร์มชตัท ประเทศเยอรมนี และ/หรือบริษัทในเครือ สงวนลิขสิทธิ์รวมถึงการทำเหมืองข้อมูลและข้อความสำหรับการฝึกอบรม AI และเทคโนโลยีที่คล้ายกัน ห้ามทำซ้ำสื่อใดๆ จากเว็บไซต์โดยไม่ได้รับอนุญาต [เงื่อนไขการใช้งานเว็บไซต์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/site-use-terms)|[นโยบายความเป็นส่วนตัว](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/privacy-statement)|[ข้อกำหนดและเงื่อนไขทั่วไปของการขาย](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/terms-and-conditions)|[การยินยอมด้านลิขสิทธิ์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/life-science/legal/copyright-consent)|[แผนผังเว็บไซต์](https://www.sigmaaldrich.com/TH/th/site-map)