ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR)

What is PCR?

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) เป็นเทคนิคชีววิทยาโมเลกุลทั่วไปที่ช่วยให้นักวิจัยสามารถทำสำเนาหลายของภูมิภาคเฉพาะของดีเอ็นเอ PCR มีประสิทธิภาพรวดเร็วและสามารถขยายลำดับ DNA หรือ RNA จากแหล่งต่างๆได้ เมื่อดีเอ็นเอได้รับการขยายอย่างเพียงพอแล้วผลิตภัณฑ์ที่ได้จะถูกจัดลำดับวิเคราะห์โดยเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสหรือโคลนลงในพลาสมิดเพื่อการทดลอง  

PCR ทำงานอย่างไร What are the steps of PCR?

ปฏิกิริยา PCR ที่เรียบง่ายประกอบด้วยดีเอ็นเอเป้าหมายชุดของไพรเมอร์ oligonucleotide สังเคราะห์ที่หมุนลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายโพลิเมอร์ DNA ที่มีความเสถียรต่ออุณหภูมิ (โดยปกติจะเป็น Ta qpolymerase) และนิวคลีโอไทด์ ขั้นตอนสามขั้นตอนในแต่ละวงจรการขยายสัญญาณได้แก่การลดความอิ่มตัวการหลอมและการขยาย

1. ประการแรกดีเอ็นเอถูกตัดออกโดยการให้ความร้อนถึง 90-95 ˚C ซึ่งแยกดีเอ็นเอสองชั้น (DSDNA) ออกเป็นดีเอ็นเอเดี่ยวที่ติดอยู่ อุณหภูมิที่ร้อยละ 50 ของ dsDNA ถูกแปลงเป็นที่รู้จักกันในชื่ออุณหภูมิหลอม_(TM)และถูกกำหนดโดยเนื้อหา G + C ความยาวของตัวอย่างและความเข้มข้นของไอออน (หลัก mg²+)
2. ในระหว่าง ขั้นตอนการอบอ่อนตัวอย่างจะถูกระบายความร้อนด้วยอุณหภูมิ 40-60 ˚C ซึ่งจะช่วยให้ไพรเมอร์สามารถยึดติดกับ DNA เป้าหมายได้
3. ขั้นตอน PCR สุดท้ายจะเกิดขึ้นที่ 70-75 ˚C และเป็นที่ทราบกันว่าเป็น การยืดขยาย ในขั้นตอนนี้ DNA พอลิเมอเรสขยายดีเอ็นเอจากไพรเมอร์สร้างดีเอ็นเอใหม่ด้วยเส้นเก่าและเส้นใหม่

ไพรเมอร์ PCR คืออะไร

ไพรเมอร์เป็นกรดนิวคลีอิก (oligonucleotides สังเคราะห์) ที่จำเป็นในการเริ่มต้น PCR ดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอเส้นเดียวเหล่านี้มีความเฉพาะเจาะจงและสอดคล้องกับส่วนลำดับ DNA/อาร์เอ็นเอเป้าหมาย ในระหว่างขั้นตอนการระบายความร้อน (การหลอม) ของ PCR ไพรเมอร์จะจับกับเป้าหมายและเริ่มการคัดลอกลำดับ DNA/RNA เป้าหมาย ไพรเมอร์จะถูกใช้เป็นคู่หรือที่เรียกว่าไพรเมอร์ไปข้างหน้าและย้อนกลับ เรา offe rcustom oligo sin หลายรูปแบบ.  

ลำดับไพรเมอร์จะต้องถูกเลือกเพื่อกำหนดเป้าหมายพื้นที่ที่ไม่ซ้ำกันของดีเอ็นเอหลีกเลี่ยงความเป็นไปได้ของการผสมพันธุ์กับลำดับที่คล้ายกัน เมื่อออกแบบไพรเมอร์คู่ควรมีอุณหภูมิหลอมเหลวที่คล้ายกันเนื่องจากขั้นตอนการหลอมเกิดขึ้นสำหรับทั้งสองเส้นพร้อมกัน ยิ่งไปกว่านั้นไพรเมอร์ที่มี _TM (อุณหภูมิหลอมเหลว) สูงกว่าอุณหภูมิการหลอมของปฏิกิริยามากเกินไปอาจทำให้เกิดการผสมและขยายตัวในลำดับดีเอ็นเอที่ไม่พึงประสงค์  _TM ที่ต่ำกว่าอุณหภูมิการอบอ่อนมากอาจส่งผลให้การอบอ่อนล้มเหลว

PCR สร้าง DNA ได้กี่สำเนา

เนื่องจากเกลียวที่สังเคราะห์ขึ้นในวงจร PCR หนึ่งรอบทำหน้าที่เป็นเทมเพลตในรอบถัดไปจึงสามารถเพิ่มปริมาณ DNA ได้เป็นล้านเท่าในรอบเพียง 20 รอบ รอบเหล่านี้สามารถทำได้โดยอัตโนมัติโดยใช้เครื่องมือไซโคลนความร้อน^1,2,3

Popular PCR Products

PCR ประจำจะใช้ในการสร้างดีเอ็นเอจำนวนมากสำหรับการใช้งานปลายทางรวมถึงการตรวจสอบความยาวของโคลน Our products offer a variety of options to perform routine PCR. ส่วนผสมของปฏิกิริยา ReadyMix ™ PCR และ ตัวเลือกสีย้อม REDTaq ® ของเราช่วยเพิ่มความสะดวกสบายให้กับปฏิกิริยาการขยายเสียงของคุณ   

• พอลิเมอราสดีเอ็นเอของ Taq
• ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR
  
• Roche AptaTaq เริ่มต้นอย่างรวดเร็ว DNA Polymerase
• Roche Expand™
• โรช FastStart ™ Taq

พอลิเมอราสดีเอ็นเอของ Taq

Taq DNA polymerase เป็นเอนไซม์ที่มีความร้อนเฉพาะที่แยกได้จาก Thermus aquaticus ซึ่ง เป็นแบคทีเรีย thermophilic TA QIS DNA polymerase ที่ใช้กันมากที่สุดสำหรับ PCR และตอนนี้แสดงออกมาใหม่ใน E. coli เอนไซม์มีความสามารถในการทำโพลิเมอร์ 5 → 3 นิ้วและกิจกรรม exonuclease การตรวจสอบหน้า SDS ไม่พบการปนเปื้อนที่ตรวจพบได้ที่เกี่ยวข้องกับ endonucleases หรือ exonucleases

Table 1.

หมายเลขสินค้า	ชื่อสินค้า	คุณสมบัติ
D1806.	Taq DNA Polymerase ที่มีบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 10 เท่า	•บัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสมกับ MgCl2
D4545 ค่ะ	Taq DNA Polymerase ที่มีบัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 10 เท่าโดยไม่มี MgCl2	•ขวดแยกต่างหากของ MgCl 2 ที่ให้มา

 โพลิเมอร์ DNA REDTaq ®

REDTaq^® DNA Polymerase เป็นส่วนผสมที่เป็นเอกลักษณ์ของ  โพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq ที่มีสีแดงเฉื่อย ชาผสมนี้มีประสิทธิภาพเช่นเดียวกับการ  ผสมผสาน Ta qenzyme ที่ชัดเจนและไม่รบกวนการใช้งานปลายน้ำ หน้าที่หลักของมันคือการระบุตัวตน - โซลูชันสามารถติดตามได้ง่ายในหลอด PCR และเจล หากจำเป็นสามารถถอดสีย้อมออกได้ด้วยวิธีการทำให้บริสุทธิ์มาตรฐานหลังการขยาย

รูปที่ 1 อัตราผลตอบแทนของโพลิเมอร์ดีเอ็นเอ REDTaq ® เมื่อเทียบกับ Taq มาตรฐานภายใต้สภาวะที่เหมือนกัน

รูปที่ 2 สีย้อม REDTaq ® จะเปลี่ยนไปเหมือนกับชิ้นส่วน 125 bp ดังนั้นจึงไม่จำเป็นต้องโหลดบัฟเฟอร์และสีย้อมติด

Table 2.

หมายเลขสินค้า	ชื่อสินค้า	คุณสมบัติ
D4309	REDTaq® DNA Polymerase	•บัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสมกับ MgCl2
D8312	REDTaq® Genomic DNA Polymerase	•สำหรับการขยาย DNA ของ Genomic •รวมบัฟเฟอร์ 10 เท่าที่ปรับให้เหมาะสมกับ MgCl2
D2812	REDTaq® Genomic DNA Polymerase ที่ไม่มี MgCl2	•สำหรับการขยาย DNA ของจีโนมิก •รวมบัฟเฟอร์ 10 เท่าและขวดแยกต่างหากของ MgCl2
D6063	REDTaq® SuperPak ™ DNA Polymerase	โพลิเมอร์ที่มองเห็นได้ชัดเจน •รับ Genomic DNA •ประกอบด้วย dNTP และ บัฟเฟอร์ PCR ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสม 10 เท่า MgCl 2

ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR

  ส่วนผสมของปฏิกิริยา ReadyMix ™ PCR ประกอบด้วย  โพลิเมอร์ดีเอ็นเอ Taq คุณภาพสูงของเรา, dNTP บริสุทธิ์ 99 เปอร์เซ็นต์และบัฟเฟอร์ในสารละลายเข้มข้นของปฏิกิริยาที่ได้รับการปรับให้เหมาะสม 2 เท่า ผลิตภัณฑ์ที่สะดวกนี้ช่วยลดการวางท่อและลดความเสี่ยงของการปนเปื้อนโดยการขจัดขั้นตอนการผสมต่างๆ เพียงเพิ่มเทมเพลตและไพรเมอร์ลงในมิกซ์ปฏิกิริยา ReadyMix ™ ส่วนผสมปฏิกิริยา PCR ถูกกำหนดขึ้นเพื่อตอบสนองความต้องการ PCR ต่างๆและสามารถซื้อร่วมกับ สีย้อม REDTaq ® เพื่อความสะดวกเพิ่มเติม

รูปที่ 3 การขยายส่วนย่อยของ 1 2 3 และ 7 kb และ DNA จีโนมิกของมนุษย์ 4.5 kb โดยใช้มิกซ์ปฏิกิริยา ReadyMix ™ Taq PCR

Table 3.

หมายเลขสินค้า	ชื่อสินค้า	คุณสมบัติ
R2523	มิกซ์ปฏิกิริยา PCR REDTaq ® ReadyMix	ซึ่งรวมถึง  พอลิเมอเรสดีเอ็นเอของ Taq, deoxynucleotides บริสุทธิ์ 99 เปอร์เซ็นต์และบัฟเฟอร์ปฏิกิริยาใน สารละลายเข้มข้น•ปฏิกิริยาที่ปรับให้เหมาะสม 2 เท่า•รวมถึงสีย้อม REDTaq เพื่อระบุตัวตน
หน้า 4600	ReadyMix™TaqPCR Reaction Mix	•รวมถึง Taq DNA Polymerase, deoxynucleotides บริสุทธิ์ 99% และบัฟเฟอร์ใน 2 × สมาธิปฏิกิริยาที่ดีที่สุด

ขออภัย เกิดข้อผิดพลาดที่ไม่คาดคิด

Response not successful: Received status code 500

ข้อมูลอ้างอิง

1. Innis M. A. 2012. PCR protocols: a guide to methods and applications.. Academic press.

2. Haynie DT. 2001. Biological Thermodynamics. https://doi.org/10.1017/cbo9780511754784

3. McPherson, Mike, Simon M. 2000. PCR. London: Taylor & Francis.